Escola Mutagen - Mutagênese ambiental e genética toxicológica aplicada

o Olá Então bom dia a todos é estamos então começando a escola muitas aí esse é o evento dentro do congresso da multa gente Brasil e hoje é eu vou mostrar então essa aula para vocês né referente a muita gente as contas número um né E vai é igual mais homogenizar na pai de novo toxicology in toxicology essa ficou toxicológico generics desculpa e eu gostaria então de agradecer a presença de todos que estão aqui comigo nesta manhã bem cedinho é acompanhando o congresso já e agradeceu o convite também da Montagem Brasil né para participar do

congresso muito obrigado a todos e eu vou começar Então me apresentando para aqueles que não me conhece meu nome aí na vitaliê a bióloga de Formação pela Universidade Federal do Paraná Bacharel licenciada sou mestre Em genética também pela Universidade Federal do Paraná isso Doutora Em genética também pela Universidade Federal do Paraná e o trabalho com área de dinâmica psicológica desde a meninice São científica Então já fazem uns mais de 15 anos que eu trabalho nesta mesma área é então a ideia hoje é que a gente possa é abordar alguns assuntos relacionados essa área né e

ele trazer então para vocês uma visão é de alguns ensaios né que a gente utiliza é para avaliação dos compostos são considerados é mutagênicos tá tem uma ideia era quando eu fui convidada fazer uma rápida e é está fora de foco gente é só um problema uma cidade está fora de foco placar a culpa minha aparece tudo certo gente será que pode ser que alguma coisa fazer esse começar para contestar isso ah ah tá pode tem internet não deixa eu ver se eu desligo o celular aqui Oi ok e vai desligar tá eu vou continuar

Qualquer coisa vocês é piorar vocês me avisa OK então vou começar o compartilhamento da tela por favor o e colocar em modo de apresentação Então tá bom não vou continuar assim o fio tava nervosa e eu fiquei mais nervosa ainda mas obrigada é então vamos começar Então ela sua primeira apresentação da Escola montage 1 e vai lamento almoçar Gênesis é meu pai biológico de Nery então a minha ideia hoje ela faz um histórico breve sobre a história da montagem de ambiental falar rapidamente serviço classe no processo de moto genes e como que a gente de

diferencia esses processos e as relações existentes entre a genotoxicidade e mutagenicidade e carcinogenicidade e também trazer aqui os métodos mais comuns de pesquisa para avaliação de danos derrete quais os ensaios são mais utilizados para avaliação desses danos Oi e o significado desses resultados dos Testes que a gente utiliza Então porque a gente utiliza eles e o que eles trazem é de informação então o surgimento da multa agência ambiental e bem lá com a publicação da revista é uma este visor em 1964 né porque porque naquela época assim que eu chegar lá já muito efeito da

radiação ionizante então é utilizar radiação ionizante sobre o material genético então é em 69/1999 ouvir a fundação da sociedade americana de mutagênese e em seguida a duração 70 da fundação da sociedade europeia né da música de anime oriental aqui na América Latina apenas em menos de 80 a gente vai ter apresentação é pela anta né e no Brasil especificamente em 1989 então é fundados a Sociedade Brasileira de motor Gênese Oi gente é mental só e atualmente a gente Brasil então é porque disso aconteceu um pão rápido crescimento né expressivo de literatura científica publicada relacionada à

mutagênese ambiental que despertou os governos para o perigo né da presença de desses agentes mutagênicos para a população humana e para a biosfera então isso fez com que os governantes ficassem em Alerta e isso trouxe uma expressividade para as sociedades em seguida então o acúmulo de dados né sugeriu que é muita gente sejam a roupa gente cidade seriam uma endpoint né marcador prognóstico razoável para prender a caixa carcinogenicidade então como ouvir haver uma relação entre esses dois em depósito é ele foi eles passaram a ser incorporado né a multa de o nosso incorporada nos ensaios

para liberação esses compostos no ambiente Então os órgãos de saúde pública as agentes ambientais aquele sentaram alta densidade como uma das características dos compostos químicos a serem avaliados antes da comercialização desses compostos consequentemente essas decisões permitir a criação e desenvolvimento rápido das genética toxicológica então A genética toxicológica ela combina o estudo das alterações induzidas quimicamente ou fisicamente não no material de prático né Qual a predição e a prevenção de potenciais efeitos adversos então é Além disso ela avalia efeitos genotóxicos e ele ficou tencial uma vez que eles são considerados pré ventos para o desenvolvimento de

efeitos adversos na célula não tem ele ficar tão gente então efeitos primários que atingem as células e material genético antes do desenvolvimento da carta a promoção é do desenvolvimento de toma então A toxicidade genética lá avaliada ela não é considerada por si só uma diretamente uma medida de carcinogénese mas é frequentemente utilizada como indicador disso uma vez que os ensaios utilizados eles medem eventos iniciais ou intermediários havendo alta Associação dos respostas humanas entre os testes de toxicidade que a gente vai vir hoje que a gente vai passar por eles hoje ver luz e a água

começou na caixa GM cidade principalmente em roedores e humanos tem inúmeros ensaios estão disponíveis para avaliação da toxicidade genérica eu ligo ocidente até marca mais de 200 em Sales Jardim de inscritos e em grande progresso tem sido observado nos últimos anos na tentativa de se padronizar Os Protocolos de Estágios genotoxicidade E mutagenicidade então quem são os órgãos que mais paga em esta harmonização o que a organização É para comer ação é operação de desenvolvimento econômico e a conferência internacional de harmonização perdão aí ch dançando as entidades que a gente sabe que fazem esse trabalho o

que nós seguimos né quando é desenvolvimento quando desenvolvemos né aplicamos esse difícil então qual seria a relação entre a genotoxicidade a moto G bom o processo de uma gênia em três partes estão de danos ao DNA detecção de danos ao DNA e processamento dos danos ocasionados o DNA Então são três e meio em duas Orlando depois da depois o processamento do feito pela célula né então são três processos interligados Ok então conceito intrínseco à esse processo é que é é a muita gente não precisa do celular e que frequentemente envolve a replicação do DNA então

onde eu consegui chave é a diferença entre os bancos a ganhar é o de não ganhar pode estar presente não vi Sim Card ano necessariamente uma mutação então é preciso que a gente tem escrito diferença é né na nossa cabeça quando a gente está avaliando né observando esses esses esses é status apesar da nomenclatura então sugeri que os agentes mutagênicos produzam mutações né é quando a gente fala não é um agente mutagênico gritava mutações primeiramente de modo por si só esses compostos eles danificam o DNA que o primeiro ele tem que ter em cada né

né de alguma maneira é o processo de mutação é produzido pelas células seja por meio de defeito no sistema de reparo de DNA quadrado pelos estágios ou por algum dor espontânea ao DNA seja pela replicação namorava DNA fica perguntando que não foi reparado introduzindo assim algum erro de aplicação que não que aí sim esse erro de replicação as marcas não gostar só depois né então primeiro passo indução de danos ao DNA ela pode ser de origem então endógena ou exógena né então você é dos adornos um DNA e o a fonte dessa desse dando ele

pode ser de é do ambiente na externo ao organismo Mas pode também reflexo do metabolismo né desce desse desses indivíduos né dos organismos Enfim então agora eu olhei as imagens que eu vou fazer um parênteses aqui todas as imagens eu coloquei a referência em baixo lá que fique registrado depois eu quem quiser acessar né nesses artigos Então as imagens e ao final da apresentação tem uma lista dos livros e dos artigos é que não foram citadas de modo geral aqui durante apresentação tá Nos quais me base a construir esse conteúdo o conteúdo da sala Ok

então só para ficar bom então ainda estão de danos ao DNA é a origem dos não é que surge Então como a gente acabou de ver isso tempo de danos que podem ser ocasionados a molécula de DNA A gente pode ver aqui na imagem Então a gente tem Pontes intrínseca como a produção de espécies reativas de oxigênio é reações químicas espontâneas né E aí como fonte de 30 externas organismo apresenta a exposição à radiação né a presença de compostos que veio a gente tava tempo todo exposto à luz solar nada mais é do que radiação

né então a gente tem toda uma maquinaria é responsável por proteger o nosso DNA de sofrer digamos mais tarde se esses danos ocorram quais seriam os tipos de danos que nós temos só a gente tem danos as pedras de fita simples as quebras de fita dupla Os adutos de DNA as eleições assim Sertório inserções as articulações de bases Então a gente tem vários a vocês a molécula que pode acontecer e que a gente um primeiro momento o DNA sofre né então é essa indução em seguida a gente vai ver o próximo passo que é que

tá ajudando o DNA então uma vez induzido quais seriam consegui feita essa de detecção de danos né então os danos ocorrem as células até que é bonita sistema de resposta de Dona Nenê ar e determina como ele vai ser processado Então essa é isso ela tem que ir as guias de reparo do DNA e a dizia de apoptose tá então a gente dorme estuda só o reparo separadamente porque todo mundo um outro universo nosso sistema de reparo e algumas linhas de apoptose podem ser acionados Porque dependendo do dano não há reparo possível que a célula

vai encaminhar né então para de apoptose você só vai reprogramar né vai ligar esse e essa vez de morte celular programada e vai iluminar essa célula então aí aqui a gente tem toda nessa imagem além dos danos todo sistema de reparo que é disponível né porque está diferente pela célula para detectar e tentar remover né esses danos do da molécula lá resposta esses anos então ela pode medir um processo de impacto tentar parar os grãos não consegui e você fala tornando uma mutação né ou pode ainda deixar Marcelo então para morte celular por apoptose existe

a possibilidade do dono que o por causa nada ali só se reparado quando eu terminar seu ser um novo processo de replicação E aí que a atuação da DNA polimerase não se na Assunção de ex nuclease dela tá isso pode acontecer também tenho aqui a gente tá vendo um gráfico né que me mostra os danos né endógenos e ambientais aqui os danos que podem ser financiados aqui a personalização é que pode ser ativada dependendo do organismo aqui os mecanismos de reparar e em seguida a gente vê aqui a resposta né que pode acontecer então a

gente tem é o sobre a sobrevivência dessa tela depois né do Mecânico dia para ter atuado ou a morte ou as mutações então a célula ou morre ou vai persistir essa mutação e vai arrematar transformação dessas tu vai ser vai aqui então processamento de danos ocasionados ao DNA da célula pode processar os anos o DNA de forma que a gente divide esses anos em três partes principais tá bem essa classificação é obviamente era uma classificação só pra gente conseguir explicar de modo ar do seu o que acontece essa classificação uma Varia muito de autor pelo

corpo e só perceber há uma diferenciação de um modo geral um é detalhe o mais outros detalhes um pouco menos ou menos mais de um modo geral e enquadradas nessas Três Faces principais então a mutação gênica são mutações que ocorrem dentro de um jeito né então a gente usar esse classificação a gente vai precisar definir nessa obra só que ocorre dentro do gênio peão gente né então genial segmento de DNA que codifica a ele a mensageiro que você traduzido em uma pergunta então é isso até um produto poder né então é isso é eu queria

genital mutações pro Como nessa Matriz não impedindo a produção correta essa proteína seria uma mutação genética uma mutação cromossômica ela normalmente não vou querer mais de higiene né então também seriam chamadas de aberrações cromossômicas porque seriam alterações mutações maiores né gente conseguiria não pude vê-la né é assim a olho nu facilmente né Processando o material no laboratório perdeu e a rotação genômica segundo esse autor é as votações ela e ela se envolver em um todo de novo então geralmente e elas é só não foi dias né se eu ganho ou a perda de um cromossomo

inteiro mas assim só um cromossomo né não envolveriam é por polinização nesse caso né porque é isso aí alteraria demais e aí a gente não tá incluindo aqui nesse caso tá Então nesse contexto de processo de muita gente o termo em si mutagênico ele se refere a uma gente que pode induzir danos ao DNA que é célula vai processar Com certeza em uma mutação tá minha termos gelo é um termo que seria mais geral e se referiam a gente tem dos danos ao DNA de um modo geral e esse dano ele pode ou não pode

ser processado pela célula uma mutação não necessariamente ele vai gerar uma outra pior nesse caso que a gente precisa aqui é diferente diferenciar perdeu ensaio de genotoxicidade e estar de muda genicidade então descobrir com a gente um dos anos E aí E é genotóxico só que esse dano genotóxico ele pode ser revertido porque a gente fez mecanismos de arma e certo já descobriram a gente também dos mutações da lente seja na Copa os né enfim ele é um agente mutagênico E isso não pode ser revertido a mutação não pode ser emitida uma vez que ela

foi feita ela foi ela foi produzida ela foi perpetuada né porque porque essa lanche tá Face de replicação de DNA e já entrou em divisão às vezes inclusive E você já consegue ver Cida então outra diferença então que a gente precisa fazer é esse dano genotóxico e mutagênico gente principalmente muita gente que ele correu em células somáticas e células germinativas bom é importante saber porque as células somáticas se tem uma célula somática após o evento de moto génese ela eu posso ter que acessar o amor ou pode ser que essa célula somática ela tem uma

mudança de Oi e essa mudança baixa gasta promoveu a presença de um câncer diminuindo por exemplo o aplicativo de vida daquele organismo E aí impedindo com que ele se reproduza por exemplo né então isso pode causar uma queda populacional Enfim pode ter consequências populacionais no caso das células germinativas quando a gente tem as células germinativas a alteração nessas células pode levar à morte né Desse ser vivo que seria determinado por essas células né sim ou pode ser que essa rotação seja perpetuada e seja transmissível parar para General você já e assim eu tenho a perpetuação

de sua mutação EA transmissão dela para outras é para outra é gerações E aí isso faz com que essa relação seja festuar né então para começar vou falar um pouco do ensaio dinheiro toxicidade eu ia colocar mais de um mas a pagar multa a identidade porque né causa da importância dela eu sou da avaliação da mutagenicidade e mensagem dizendo que eu vou falar vai ser ensaio do Cometa porque é um dos mais utilizados né no mundo hoje é o está Cometa ele é uma técnica relativamente simples comparado a outras técnicas de avaliação de genotoxicidade e

ele é muito sensível e ele permite a detecção de danos ao DNA dos danos mais variáveis que vocês podem ver todos aqueles anos ela quebra de fica dupla quero ficar simples crosslinking é adultos e ele permite é avaliado é dependendo da do protocolo que você utilizada é importante que se diga isso é que você consiga avaliar uma gama muito Ampla né de danos usando uma única técnica então o começo a ele ele é importante por causa disso é importante dizer também que o nome completo do começo desse a encontrar um gel electrophoresis SC g s

e esse nome popular vou com a visão Neve sai comentário por causa dessa assim semelhança né entre o cometa que a gente vê lá no céu né quando passa né que a gente chama de comenta né e aqui a gente ver como é que fica né o material genético quando a gente avalia né o ensaio comer então essa semelhança porque trouxe popularizou o nome né de tratamento alterações na técnica dois argumentos elas permitem uma análise extenso então não vários tipos de danos ao DNA e ele pode ser utilizado em qualquer célula individualizada Então até Unidos

a comenta em qualquer célula individualizada você pode fazer avaliação é dos anos 80 é isso faz com que ele seja muito amplo né utilização dele é muito amplo então aqui é só pra gente ver como faz aqui a realização é do ensaio comer né então é visualizada de tecidos de tecido sanguíneo ou de Cultura celular exposta um composto químico variado né enfim químico ou físico né pode ter um a gente ficou físico enfim e aí a gente tem lâminas próprio da descarga 9 nessas mais para cobrar que escolher a delas recebem o material é com

outra garota por cima que te agrada de baixo ponto de fusão depois de solidificado essa grosa a gente coloca numa solução de lise que vai remover todas as estruturas né que não estão o DNA então é todas as proteínas enfim todos os vídeos de membrana a Depois desses do Criador diz que ficaram aqui gente passa passa o nome não chamava de células sem núcleo que agora é só tem o material genético ali esse material genético ele pode passar enfim por um tratamento com enzimas para gente fazer uma avaliação mais rigorosa dos anos né é de

foram ocasionados ou a seguir diretamente para eletroforese em seguida depois era do frese pode passar por um processo de neutralização depois da coloração EA visualização do Cometa e análise como a gente mostrou ali em cima certo então esse ensaio vai nos mostrar o que vai mostrar se o composto É capaz ou não de gerar danos ao DNA sim ou não Lembrando que se danos podem ser reparados os ensaios de mutagenicidade Então como é que eles entram né nessa questão então dividir em eles entre de mamíferos e mamíferos tá então o primeiro queria falar o teste

de em sempre que tiver um correspondente eu adoro receber Ou seja já foi para ser pisado validade do mais eu coloquei o número do protocolo né do guia da umas e delito a gente se as pessoas quiserem depois acessar tem informação então o teste de mutagenicidade ele fez por salmonella de figura é chamado de salmonella me que eu sou a montagem de ienes esse aqui essa imagem do sense que é o ângulo dos autores deve publicou o artigo o trabalho né junto com Yamazaki 71 falando sobre emprego desses Mutantes né estão nela tipo Mourão trabalhar

potencial carcinogênico de compostos químicos Então essa metodologia é muito utilizada uma das mais utilidades hoje para detectar substâncias carcinogênicas e Geno costas essa qualidade em larga escala por diversos Laboratórios né E aí depois publicação do trabalho doenças ele ganhou essa esse teste deu mais autoridade porque existem alguns compostos tipo esse da ser próximo Tipo se você processados né que vocês vão passar por uma ativação metabólica para desenvolver e essa relação essa essa multa de felicidades A carcinogenicidade então adição dessa fração que a gente chama de difração s9 tem uma fração de fígados de ratos ficam

É sim essa adição dessa fração nesse ensaio possibilitou que aqueles compostos que não é que precisam das ativação fossem testados também por esse ensaio então isso fez com que ele ganhasse muito importância né Na avaliação e é um atualmente considerado uma ferramenta importantíssima né o o conjunto dos Testes que define a potencialidade de ação de compostos cancerígenos e já não gosta então aqui a gente tem uma figura muito simples só para ilustrar mesmo essa parte né que é o o o fato da gente ter uma uma certa específica de salmonella né E daí o que

acontece a gente coloca fazem incubação rapidamente em meio com ar aqui e aí exponha ele à vontade não e depois da incubação com ele é um tagino a gente conta E olha que vão ter nesse meio acontece que se ele não momento ruim essa separa não é uma ser pouco mundo né então o que aconteceu tipo que é utilizada nesse caso é a capacidade que a bactéria tem essa mulher ela não tem dissidente da histidina né o homem nasce essencial Então essas ervas são utilizadas ela se tornam incapazes de sintetizar extinguindo portanto não tem que

adquirir do meio-oeste Dina para conseguir se multiplicar né para conseguirem sobreviver Então as bactérias elas são retiradas diretamente de uma cultura incorporadas né a esse meio tem Oeste da limitada né E aí elas passam por várias divisões nesse e-mail tá expressar Então essa muita gente cidade está sendo avaliada pela presença do composto nesse meio também e elas param após O esgotamento decidindo a respeito as bactérias sofreu uma mutação reversa em seu vocais the Opera é importante voltar uma capacidade se tente usar este de pela presença do contaminante elas vão continuar a dirigir Ou seja eu

vou continuar vendo a presença dessas colônias Elas Não Param de se dividir acordaram que aquela se não Carol a gente encontrou então a cidade né ela não mudou e daí Porque não tem esse composto que eu tô testando que não era muita gente que dá poucas colônias foram resultantes desse processo tá então produto químico que a gente mutagênico positivo ele vai demonstrar o aumento relacionado né ao número de colônias que a gente vai te rever tem né são colônias formadas quando comparado ao servir tem que ser espontâneas em placas de controle então aqui a gente

tem uma representação esquemática para vocês verem tô aqui o realizado sempre com a presença e ausência da fração s9 que essa pressão é de metabolização né pra ele aumentar atualização dos compostos né que ativação perdão dos compostos Oi gente tem um controle negativo o tratamento do composto e um Positivo né E aí é esses tubos são incubadas E aí são colocadas em placas né essas placas são de tamanho de 90 15 né então que a gente tem nessa imagem não se ver para vocês verem as placas de haidê as de controle negativo né e em

sei de as de controle positivo só para você ter a noção do número de colônias ali que a gente pode contar Então isso é pode implodir de ser feito mecanizado gente equipamentos faz essa Contagem né se ele que a gente vai ver ensaios com salmonella tipo me aparece um número número após né esse esse ao nome né da coluna é só meu tio e o número esse número aí está relacionado as cepas né então algumas e passam utilizadas durante os ensaios de rotina que são recomendadas né Então essas e panela só e eu acho Ok

então eu achei algumas cepas né aqui aqui são as mais pedidas Mas eu percebi que é uma variação Dependendo do que você quer testar Você precisa avaliar quais se passam mais interessantes de manter para você testar né dependendo do que você tá Qual é o seu o que você tá pensando que composta você está testando né então várias linhagens com sensibilidade específica do tem um determinado fácil de substâncias ela tem sido selecionadas né elevando ainda mais as especificidades técnicas na identificação de compostos cancerígenos tá então aqui tem um vídeo do laboratório da e da Unicamp

e Professor José Umbuzeiro e se está Nesse artigo aqui esse esse vídeo ele tá nem certinho ele foi para o mercado com o parte de ncm atualizada Então a gente vai ver ele é 3 minutinhos de vir que a gente vai ver ele não tem ninguém narrando nem nada é só para gente ver como eles fazem né que é mais faz o teste ncm atualizado tá deixa eu ver se eu consigo tirar isso porque essa musiquinha que aconteceu vou falando o teste de miniaturizado então ele é feito não e placas de 90 por 15 pares

de pé mas sim em placas de 12 postos E aí esse saco de 12 postos como vocês vão ver no final aqui do vídeo ele vai colocar as quatro replicadas Então dentro desse teste não consegue fazer quatro replicar mas ainda da sua mostra então isso aumenta muito o que o número né de editar tus aumenta o poder mas também diminui muito o número de amostra que você precisa protestar tô fazendo isso você diminui também o número é a quantidade de reagente utilizar o estão isso geram economia isso é um refinamento da técnica tá então isso

é importante porque a gente tá não né no meio do movimento para ensinar reduzir né enfim melhorar os protocolos existentes Então esse é com certeza essa essa esse protocolo é uma maneira de refinar essa técnica e fazer com que ela atinja de nos cursos de fazer com que ela atinja o maior número de substâncias testadas possíveis né Então é eu ver se consigo dar uma adiantada ginha né querer só vai dividindo as estações eu queria que vocês vissem no final a placa né aqui que é importante é a placa é de 12 postos que aonde

ele vai colocar amostra dele em quatro Poços né 200 250 ml duas em casa Oi e aí vai incubar e depois vai contar as colônias tá eu vamos ver aqui no finalzinho se a gente consegue ver as colônias Então aí tem um pouco aka depois você tem 7 graus Celsius por 66 horas a gente consegue ver as colônias de fazer a contagem então é do laboratório de toxicologia e genotoxicidade da Unicamp Ok o próximo teste então que você ia falar é sobre o ensaio Smart né que é um dos Testes também que a gente bastante

né em congresso e tudo mais ele tem uma aplicabilidade sim né então é a sigla Smart é em frente à Somália limitations exibir combinete em pé e ele é o teste para detecção de mutação e recombinação entre os afloram a Núbia EA dos ela falou com gente sabe desde o início da genética um modelo muito útil para estudo de artes neh ou ruim também então espécie de gel toxicidade eles são menos onerosos e que o o Jardim células germinativas de drosófila por exemplo são muito sensíveis e específicos e precisos e também é possível no curto

prazo Então vale a danos genéticos em células somáticas e Moscas adultas após a exposição normal então basicamente aqui o teste ele é ele verifica né ele detecta a indução de mutação gênica e recombinação homóloga né e nestes que são os testes muito úteis então para analisar em vivo porque está vivendo a toxicidade de produtos químicos né é em um organismo eucariótico superior Então a gente tem dois testes que são os mais comuns ser utilizados que é windspot é sei que é o ensaio da mancha da Asa e o estar da amante do olho a Sport

s é a então esses tecidos que são verificados são verificados nos tecidos adultos mas a drosófila é exposta ainda quando enquanto larva então vocês põe a larva e o indivíduo adulto ele não demora né ah o ciclo de vida é curta e já você consegue analisar o indivíduo adulto e fazer então essa análise então para o teste da da asa a gente tem que ter um casado agora as águas normais Olha eu voltar aqui perdão na Sagas eles fazem análise dessas regiões com esses pelos né com essas coisas pequenas pênis que a gente consegue avaliar

então quando não há nenhuma mutação você consegue duas perguntas de forma normal mas se alguma mutação você consegue ver esses pelos de forma alterada e o número a quantidade dessas manchas que aparecem são contabilizados E aí é possível perceber Quais são as alterações que foram acondicionadas no ensaio do Ó é um pouco diferente porque o Style da asa é um é o consumo outros o mico né E aqui no do olho é um cromossomo sexual tão ligada ao cromossomo sexual principalmente nas fêmeas eles conseguem perceber então mutações no cromossomo sexual são mais significativas são mais

letais Então aí nesse desse modo eles conseguem perceber a gente vê se eu coloquei aqui isso no óleo das drosófilas é possível perceber então ausência que tem uma ausência bem significativa e essa ausência né Ela é contabilizado também do mesmo modo como as as manchas nas asas então em plantas para amostras ambientais e também substância A gente tem ensaio com plantas estás com plantas são variados podem ter com alho seca né que foi Luzia pro sugeri aqui mas é comido quadrados italiana com tradescantia pai de conversa Fabi então eles são muito antes é mais um

ensaio com cebola né com alho separa ele é um ensaio de avaliação dinheiro toxicidade perdão e é possível nele avaliar as aberrações cromossômicas e também avaliar a presença de micronúcleos então a gente consegue avaliar muda de identidade genotoxicidade e ainda é evento de citotoxicidade então é um teste muito amplo né então aqui a gente tem o cariótipo da cebola e ela tem 16. Somos divididos em ou de Paris ela fornece dados sobre os potenciais danos ao DNA contexto multicelular seja o organismo do celular uma possibilidade que pode não ser fornecida em alguns testes de cultura

de células por exemplo e aqui a gente tem a esposa como seria o ensaio né de anos sempre pela exposição lembrando também ok se esse essas imagens aqui porque a exposição a partir da semente da cebola é do Google de cebola né então é um site é bem variado você pode fazer diferentes formas então aqui se vocês os bulbos incubar né na sua na sua solução de teste e aí fazer todo o processamento das amostras estreia região meio sistemática que a região possui maior número de células né para fazer as lâminas E aí sim avaliar

né nessas células os diferentes endpoints não o que é bom do ensaio é que você pode avaliar células normais de todas as fases da divisão celular e células com todas as fases da divisão celular com a presença de micronúcleo e avaliar alterações durante o processo de divisão celular se você consegue interpretar feliz alteradas Anápolis alteradas São alfaces alteradas e isso faz com que você consiga é Inclusive inserir-se a gente tem o modo de ação dos compostos só se consegue saber quem seria um pouco sobre o modo de ação dos compostos Então ela é bem o

teste de mutagenicidade estão em mamíferos Vou tomar uma água em pó aqui é só bater gordinha mostrando o que vem pela frente então as características dos Testes de mamíferos e elas são mutações que são comumente detectadas usam sistema teste de células de mamíferos que podem ser usados com grande eficiência né Elas são cultivadas em testes então de muita gente cidade as células de mamíferos e ela tem algumas vantagens sobre Outro teste que eu que os métodos semelhantes lógico cada ensaio vai ter dependendo do seu vestido vai ter um objetivo Então dependendo daquilo que você gostaria

de avaliar o ensaio sempre complementa o outro então duas vantagens principais para o teste de células derivadas de humanos seria a organização genômica né DNA cromossomos e núcleo né organização né do Genoma ela tá os dentes algumas bactérias da mesma forma como está nas nossas células e assim como o perigo de divisão celular que ele é diferenciado nossas do que bactérias e o metabolismo celular também é específico de mamíferos e ele não pode ser habitado pelas bactérias então algumas diferença que a gente deve considerar no entanto a contagem também existem testar células derivadas de um

anos né como a alta sensibilidade mais baixa especificidade associadas as entradas de genotoxicidade mamíferos in vitro por exemplo e uma bateria de ensaios ela geralmente usada para oferecer um maior conhecimento acerca do modelo de gestão e permitir uma possível extrapolação podem vivo então o conjunto de ensaios que a gente realiza é muito importante porque ele dá várias respostas e quais as respostas tenta montar o quebra-cabeça para aí sim dizer efetivamente se se composto é ou não é muita gente tem uns ensaios mais comuns detecção de mutações genéticas de células de mamíferos e batem acima uma

relação direta né que conferem resistência a um produto químico tóxico geralmente como veremos a seguir nos primeiros ensaios então o primeiro ensaio que ouvi comentar é o ensaio de linfoma de camundongo no O que é o ensaio é que os célula de mamífero é uma célula de Cultura de uma admiração l5178 y e elas são mensurados por meio da Resistência adquirida A trifluorotimidina tá que é o resultado né esse essa resistência no estado da Mutação direta no óculos A timidina quinase então esse ensaio ele detectar mutações importantes na arte uma dedo câncer bem como de

outras doenças humanas mediadas por fatores genéticos dois e tem evidências que esse ensaio e detectar mutações pontuais e eventos promocionais também ou seja muito feliz mais né a maior né esses tá então ele precisa de uma adição de uma fonte de trabalho que externa maioria dos ensaios que a gente vai ver a partir de agora isso precisamos ativação da do s9 da pressão Sinop pra acontecer então aqui a gente tem toda a cadeia de Como tá essa realizado né que tem a cultura de células você vai tratá-las oi oi senha a curvatura s9 você vai

embalada 37 graus você vai lavar e aí vai começar a expressão fenotípica vai expor elas a aos compostos de interesse né vai expor é umas aqui fura tem Medina para selecionar né as células se você quer avaliar né que ela acho que tenham a a mutação enfim e aí aqui cê tem duas técnicas diferentes disponíveis que é a do água né o Anderson Fraga e a versão de micro postos E aí na versão time propostos essa que a gente tá olhando aqui a Jéssica eu decidi que é explicar melhor porque é bem visível então aqui

a gente tem ausência de colônia então a gente não tem essa redução da rotação aí que a gente tem a multas a colônia as maiores e as colônias menor então aqui nesse nesse nascem O que é colônia pequenininha aqui né E aqui Uma colônia grandona e essa colônias em placas de 96 Poços tá então a gente vai fazer eles vão medir né quanto o tamanho dessa colônia é vão medindo o tamanho dessa colônia e isso vai fazer com que a gente calcule o que a frequência relativa de crescimento e a a frequência de mutações que

eu gostei de mutantes e quanto ele cresceu também é indicativo de mutação de muita genes né dava para gente se dá a e esse agora eu vou perdão é um segundo teste Faz igual a primeira vez que a gente viu só que aí muda a a linhagem celular né e muda um gene que é o outro gênio variado aqui nesse caso então teste de mutação em células de mamíferos com esse Gene HR hprt Tadeu que a gente dá hipoxantina-guanina possa ônibus e transfers tá pela fgm ele é responsável por atuar na vida todos são masculina

quando na presença de um substrato nela e o seu substrato ele catalisa a transformação délhi dos análogos de insulina con aceite de uma menina e essas esse composto ele forma eles ficaram citotóxico com as células normais então ele vai matar diz elas vai selecionar a outras células trás que a gente quer utilizar no teste então a gente teve esse homem dessas células já chegou é depois vou mostrar no próximo Sales tem um todavia E aí a gente seleciona essas células essas células vão ser se você está expostas ao meu contaminante ao meu agente de interesse

E aí sim eu vou avaliar vou retirar um composto do Meio sim acontecer o processamento desse composto Aí sim né eu consigo fazer a contagem dessas coisas produzidas senão novamente não vai ter vai ter morte celular eu não vou conseguir ver E aí a gente vai conseguir fazer o cálculo da frequência de mutantes então aqui a gente tem a linhagem de show que a linhagem celular de ovário de hamster para vocês verem que era utilizada nesse teste e às vezes 79 aqui embaixo que também é utilizada nesse teste Lembrando que pela oecd é esse teste

ele é bem flexível e ele aceita outras células então ele tem outras células aqui como células linfoblastoides humanas também podem ser utilizadas nesse teste tá então aula se deixa bem aberto nesse caso aqui então a gente vai ver aqui como funciona esse teste rapidamente olhando para essa parte de baixo aqui nessa figura então aqui a gente tem seis o Kelson tóxico análogo aqui da guanina EA ele entra nesse né nesse dessa via quieto da produção das Colinas E aí utilizando um gene daí por gente na produto gênico daí constante nessas e você ou transpirar em

que é produto de NH RTP hprt perdão e aí que vai acontecer essa mina proteína está presente no meio então que eu coloquei a célula tem uma mina proteína Eu só vou preparar a reação que seria é iniciada com a tioguanina E aí ele vai forçar são o adotar outros caminhos Onde está em processo de morte celular que ela que geralmente acontece entrar em morte celular a gente vai já direto para essa segunda parte dessa figura que qual a primeira parte é a exposição dessas células a esse meio com rate e em seguida as células

que morreram se retiradas do ensaio e vai ficar só células que sobreviveram essas células que sobreviverão serão expostas ao compôs a trabalhar né muita gente cidade gente eu tô com saudade E aí eu posso escolher duas esse caminho de frente eu posso explorar trifluorotimidina assistiu guanina e aí eu posso ver né ah Os Mutantes e Vertentes fazer a contagem das cores como eu mostrei no slide anterior e aí calcular a frequência de mutação tudo do meio da mesma forma como o outro o que é importante aqui é que como a esse hprt ele está situado

no cromossomo x diferente do anterior que não estava no cromossomo som e aí promoção Hot como eu falei antes ele leva a letalidade celular de modo mais é gráfico em qualquer alteração muito drástica nesse cromossomo é morte celular então aqui é importante lembrar que o cromossomo sexual tolera pequenas alterações como essas detectadas pelo Gene hprt tá teste de aberração cromossômica em mamíferos e é muito utilizado né então basicamente aqui nesse caso a linhagem celular ideal definida para os nesse teste é definida por algumas características nesses casos impostos humanos periféricos eles possuem algumas características dela só

que eles não eles não se dividem em vivo Então o que a gente paga colocar os linfócitos humanos coletados de pessoas né que não tiveram exposição a agentes mutagênicos né radiação né Muito excessiva que não tem vírus né porque você pode interferir na resposta colocamos essas essas células no numa Cultura né consiga agostiniana que a população responsável por induzir essa divisão dos impostos E aí sim fazer todo um processamento Expor essas células é a um composto que é pare a divisão celular nessa essa foi estimulada pela fica uma O que é pare quando houver a

presença do inibidor da metáfora de inibidor do ciclo celular do fuso mitótico E aí a gente consiga ver os cromossomos e avaliar né existência de aberrações cromossômicas de alterações nos cromossomos a ciclofosfamida nesse caso é utilizada geralmente como controle positivo e novamente aqui atração s9 ela pode ser utilizada cada um composto retira a ativação metabólica então aqui só para mostrar para vocês a divisão né que ocorre entre os ciclos celulares a replicação do DNA e essa marcação do DNA tá E aqui como faz análise dessas dessas alterações Então a gente tem que olhar Qualquer alteração

que ocorra nos cromossomos E aí vou fazer anotações Então as células neoplásicas estão cheias dessas alterações e é isso Oi gente avaliar né Sempre com cuidado então é importante dizer que a gente faz nada sem metáforas de cada Cultura né 50 por lâmina geralmente é que as células tem que ter de 44 A 46 cromossomos se tiver algo fora disso é preciso fazer uma análise mais detalhada mas principalmente que a gente olha quebra de lições né é cromossomos perdidos cromossomos em anel enfim é importante para a gente a vale né esse Cuidado o próximo então

saiu é o teste do micronúcleo e eu vou comer caminhando para o fim já é o teste de micronúcleos em células de mamífero in vitro né então é bom pertinho tudo que ele era amplamente utilizado né e os produtos são fragmentos de DNA separados do núcleo principal e originados de fragmentos cromossômicos entre usou as entre ou seja eles podem envolver o centro o mesmo a parte do certame você tomar inteiro Como pode não bom então então nunca nunca cês podem ser resultado de danos factores genéticos e anel g e o uau gente né então os

passos gênicos eles são acionados devido a danos directamente Al Qaeda na visão DNA e já usar gênicos eles são ocasionais devido a erros no aparato de divisão celular como por exemplo a formação do fuso mitótico Então por algum motivo e não forma o deixa de polimeriza as microtúbulos E aí numa correta separação e aí um um cromossomo inteiro esse prédio enfim meio cromossomo né porque a é possível que isso ocorra também então uso único no cruzeirense se apresentam danos que foram transmitidos às células-filhas eu já foi processado pela célula e já é uma mutação temos

micronúcleos em células em pé faz eles podem ser avaliados de forma relativamente objetiva é uma outra tampão como resultado as Reparações podem ser pontuados rapidamente e análise pode ser automatizado que vai tornar muito prático né dois centenas de células pro tratamentos aumentando o poder estatístico no ensaio Então finalmente com o micro Lucas para isso gente como somos atrasados existe potencial para detectar a gente eu já não conseguia sim nos pés que a gente acabou de ver de graça promoção que eles são difíceis de serem detectados então no caso do micronúcleo ele resolve esse problema mais

facilmente né no caso da aberração cromossômica por exemplo Então a gente tem que saber o número cromossômico né da espécie por exemplo aqui não onde você precisa só presença ou ausência do minuto né então ainda possível das ondas Que máquinas sintomas por exemplo e ver se o fragmento Sete de Setembro tá dentro do retorno coco ou tá lá dentro do núcleo da célula se foi se este fragmento é a sempre por cento né pra gente tem aqui a O que é o mico Hulk né como você visualizar Miami currículo né e aqui tem uma ponte

do Cosme não tô plasmática né também com presença de colocar aqui e aqui na imagem mostrando como seria uma um tratamento aneugenico possuem um único e um tratamento com um composto quase turgenico mas tiramos gerariam né aprender E aí o bruto o teste do micronúcleo Mistura medula óssea em vivo eu tinha colocado muito lacinho roedores porque eu gostei de falar desse especificamente mas da hora esse de 474 que aprovada medula óssea em qualquer organismo de interesse tá então ele deixa bem aberto você pode usar é o técnico medula óssea de qualquer outro animal também ele

deixa aberto isso né em aberto Então nesse caso é análise nunca lucros novamente com a gente acabou de ver E aí se esse teste ele pode também ser realizado comido a óssea ou com sangue periférico é não é se identifica cloro depende da escolha do avaliador do analisador né de quem tá é avaliando isso e dependendo também do composto e você vai testar Qual o objetivo Só o sangue é suficiente eu preciso de mais tempo precisa ser na medula óssea e tem enfim isso é o é tão que o avaliador tem que ter quando ele

vai é testar né o composto de interesse ontem ou a gente fez porque ele tá testando então é aqui é a gente colocou colocamos que é minha né E esse senninha mostra aqui dos Ratos né tirado o fêmur que é lavar em PDF assim feito uma cultura né com essa medula óssea E aí depois que é feita essa cultura ela é fixada e feito um esfregaço normal fique tá dormindo não curado com medo de vinho greenwell jeans e aí é analisado em microscópio de luz normal é para a presença de m Campos né e o

que é importante aqui é esse é o único Stark se vocês perceberam que utiliza animal vez em rico né e ele é utilizado para prever com precisão o risco em humanos né se isso é possível aumentar ou diminuir e cada vez mais Oi tá visto que tá aumentando né o número de ensaios in vitro não tem aumentado consideravelmente isso deve Principalmente ao esposo que a gente tem feito para reduzir uso de animais na Vanessa é uma segurança das substâncias testes e promover uma maior segurança mesmo utilizando mandar o número de animais a gente obviamente né

gostaria de sempre poder usar o que fosse mais sensível para que a gente é diminuir esse né Qualquer efeito de uma realidade que precisa ser encontrados no ambiente lembrando sempre que no ambiente da mostra são complexas né então a gente tem tanto no ambiente né no ar na terra no solo ou na água uma mistura de compostos E é isso que torna cada vez mais difícil essas abelhas transcrições de amostras ambientais Ok era isso que eu tinha para falar para vocês hoje tá eu queria deixar aqui o meu e-mail novamente né caso alguém gostar você

tende a se algum material tá eu posso enviar o Finn alguma outra questão alguma outra dúvida em algum comentário todas são bem vindos eu gostaria de agradecer então mais uma vez a professora Sílvia em nome da muita gente Brasil é o convite por é ministrado então rapidamente Eu adorei adorei o convite é sobre esse assunto também é gostei muito e deixar aqui meu agradecimento é a todos os professores também são sempre muito atenciosos né e nos ensinam tanto então muito obrigada por todo o trabalho feito até aqui e que eu mostrei no final tem os

capítulos de livro e alguns artigos que eu usei para fazer a parte textual dessa apresentação E aí eu deixo aqui também com vocês caso você queira também tá disponível tá ok Oi tá tudo bem Muito obrigado a todos e agora vamos ver se ele tem perguntas para resolver para responder que eu tenho que agora parar de compartilhar tela né interromper compartilhamento aí a muito obrigada pessoal perguntas podem fazer perguntas eu tentei ser o mais didática possível tem testes que não são fáceis de entender tá você ficar lendo lendo lendo e não sabe espaço talvez se

a gente fosse é fazer mesmo ali na prática seria mais simples de entender eu tentei mastigar o máximo possível né E também trazer os testes ensaios que elas CD preconiza né porque a gente como país não signatário Porém tem intuito de não é um dia Sérgio de pode já começar a pensar e me aplicar esses em paz e eu também tivesse cuidado de olhar quase não saio estão aplicados aqui no Brasil que a gente consegue fazer né porque é difícil né não ter recurso né suficiente para fazer ensaios demandam mais demandou mais custo né Demorou

mais financiamento né no mesmo que a gente tá passando então A ideia é que era trazer ensaios que a gente possa fazer aqui no Brasil inclusive sobre a situação esse nove que é bem cara ele é bem utilizada nesse bastante utilizada nesses portais é existem existem maneiras de se produzir elas em laboratório né é eu só realmente não hino no capítulo do livro ali que era relativamente fácil assim fácil não ela somente possível né então eu acho que a gente é eu não tenho um problema né de e como que a gente está fazendo agora

Talvez seja um caminho né É para diminuir né esse esse custo né uma pergunta a Mari né Parabéns uma pergunta que os pés estão utilizado por provar medicamentos do implante sim é todos esses eu trouxe é na Europa eles são assim não vou falar primeiro da Europa depois né do Brasil a Europa eles são utilizados sim muito utilizados inclusive é aqui no Brasil as baterias são um pouco diferente né e Varia muito principalmente foi a morte ambiental né ou uma mostra de indústria por exemplo amostras de indústria elas algumas precisam passar assim por alguns desses

testes e dependendo do tipo das indústrias do que que é são duas enfim aí o que você vai testar eles precisam sim passar por alguns desses testes ele E essas inclusive e fornece esse serviço então você pode entrar em contato com uma empresa elas fazem cidade para você e aí ele tem um áudio E aí sim você pode usar esse lado regulamentação do seu composto junto ao órgão regulatório elas estão se utilizados tá ele acredita também todo mundo que acordou cedo para me acompanhar muito obrigada viu foi um pouco difícil não só acordar cedo na

polícia mas é porque a gente estava muito apreensivo muito nervoso e é bom contar com a presença de todos vocês hoje muito obrigada viu mesmo que virtual né não poder não posso nem conversar depois nem tomar o café é mas muito obrigada por todos que acompanharam a palestra a gente tá 9:03 e eu gostaria de saber se tem mais alguma pergunta que nós que a gente tem que encerrar para não atrasar peça é isso quem tá não suporte o jovens os jovens tá falando comigo pode falar Posso encerrar então legal não temos mais perguntas o

meu e-mail está a disposição Por favor entre em contato Se precisarem de algo material de alguma conversar uma dúvida né estamos aí à disposição Muito obrigado a todos pelo chegou mais uma bom responder gente qual o teste mais sensível para avaliar a genotoxicidade de um biomaterial eu não gosto de usar se fugiu toxicidade eu gosto eu que sempre saiu com medo de de todo jeito sabe porque o trabalho que não vai comer teu domina muito bem eu sei que ele pode fazer então eu se for sozinha na cidade eu faria o começo de qualquer forma

daria um jeito de fazer já fiz olha cometas de muitas coisas mas para ir sair de muita gente cidade também aí eu acho que é um Babá teria de ensaios sempre é uma isso é de quatro escolher três organismos diferentes vias diferentes que respondem de forma diferente e faça três ensaios diferentes porque isso te dar mais resposta Oi Larissa você abrangendo mais dias mas né É mas and Point você consegue ter uma resposta mais confiável na hora que você vai vai dizer sim é genotóxico ou é muita gênico não há muita gente entendeu que a

gente tem que se secar né de do maior número possível de ensaios que respondam os mais diferentes entre Pontes da Cruz tem uma resposta mais próxima da realidade porque nem o modelo que você utilize é 100 porcento a realidade entendeu então a gente precisa sempre se cercar de maior número de informações possível é isso Tá OK agora eu vou encerrar então gente eu quero agradecer a todos novamente muito obrigada pela atenção tá ok eu vou querer acordar vocês junto comigo onde mãe do congresso tá sensacional gente tava muito ansioso aproveitem todo mundo tudo tudo tudo

conversa com as pessoas mandem e-mail tá a gente tá esperando a vocês a o ingresso quero vê-los em breve presencialmente Ok um abraço a todos bom final de semana bom congresso até mais