[Música] [Aplausos] [Música] [Aplausos] [Música] o teste do micro núcleo é utilizado para a identificação de compostos mutagênicos ou seja daqueles compostos não capazes de induzir danos cromossômicos ou no aparato mitótico é um teste bastante utilizado em pesquisa e hoje bastante aceito por agências regulatórias nacionais e internacionais como parte da bateria de testes de mutagenicidade recomendada para o registro de novos produtos o teste do micro núcleo é fundamentado na ele propõe um processo responsável pela formação dos eletrólitos neste os blasfemos se dividem se diferenciam em eritrócitos por cromáticos de forma dinâmica e que envolve eventos de
vitória e de perda do núcleo em situações onde não há danos celulares a divisão ocorrerá normalmente eo núcleo será eliminado por completo no entanto quando ocorrer um dano genético com uma quebra de um cromossomo o fragmento resultante pode não ser incorporado no núcleo principal das células filhas após a mitose e poderá também não ser eliminado pelo processo de educação originando assim um micro núcleo o teste do micro núcleo também pode detectar alterações no gene kras estas lesões podem ter origem em danos nos centrômeros dos cromossomos ou no fuso mitótico nesses casos o micro núcleo incluir
a região centro américa a qual poderá ser detectada por sondas específicas a técnica in vivo para detectar a presença de micronúcleos é principalmente realizada com camundongos após o tratamento com a gente teste os senhores são coletados para obtenção de células da medula óssea pela técnica de flash após as centrífugas são da suspensão celular o sobrado ante é removido para a coleta do sedimento de células as lâminas são confeccionadas por meio de esfregaço celular e após a fixação as células são cobradas para que seja possível a identificação de eritrócitos pole e normal cromáticos com e sem
me dando uns os procedimentos apresentados a seguir tem por base o gasto online número 474 teste do micro núcleo em eritrócitos de mamíferos recomendado pela o incide em julho de 2016 os critérios para a seleção dos animais bem como as condições de manutenção e alimentação a seleção das doses da substância teste e as vias de administração o preparo das soluções controle positivo e negativo estão descritos em detalhes no guia online da ou incide o tempo para amostragem das células da medula dependerá do protocolo utilizado tendo como limite mínimo 18 e no máximo de 48 horas
após o tratamento com a substância teste a seguir estão inscritos os procedimentos para obtenção processamento e coloração das células da medula óssea ela os procedimentos apresentados a seguir estão de acordo com as normativas do consea para produção manutenção e utilização de animais em atividades de ensino e pesquisa científica e foram aprovados por comissão de ética no uso de animais realizada a eutanásia o animal deve ser colocado sob uma prancha de necrópsia ou sobre papel alumínio em decúbito dorsal após a assepsia do local com álcool 70% face a incisão na pele e retira se o fêmur
o excesso de tecido ao redor do fêmur deve ser retirado com o auxílio de tesoura e pinça de de secção e papel absorvente asp caso necessário os dois senhores podem ser utilizados a seguir à extremidade proximal do fêmur deve ser cortada para expor o canal da medula agulha de uma seringa de 1 ml previamente preenchida com soros e tal o governo deve ser inserida firmemente no canal da medula com o fêmur dentro de um tubo de centrífuga previamente marcado com o código do animal o soro injetado na medula de modo a retirar as células repetir
esse procedimento e descartar o fêmur com auxílio de uma pipeta após ter as células devem ser vistos pedidos por várias vezes até a obtenção de uma suspensão homogênea este procedimento assegurará uma distribuição ao acaso das células da medula óssea a suspensão então centrifugado por cinco minutos a mil rpm [Música] e os sobrenadar antes descartado com o auxílio da peta paz ter até restar apenas cerca de 6 ml no tubo procedimento então e suspendido para a realização dos empregados de células em uma lâmina previamente marcada com o código do animal pimba uma ou duas gotas da
suspensão de células mais facilidade e com auxílio de uma outra lâmina inclinada em um ângulo de 45 graus para vir um esfregaço com média compressão para facilitar a análise microscópica é importante que se obtém esfregaços com uma única camada de células suficientemente espalhadas e como morfologia preservada as lâminas devem ser deixadas ficar ao ar em ambiente limpo e fixadas por dois a cinco minutos em metanol devem ser preparadas pelo menos duas lâminas para cada animal ao final do procedimento a vidraria utilizada deve ser este aguarda com água corrente e colocado em meça em solução de
estranho 2% para o teste do micro núcleo as células da medula óssea devem ser cobradas 24 horas após a realização dos fracassos o método de coloração utiliza corantes convencionais para diferenciado ele trouxe tutor cromático o pc é enor monocromático ele se é como vingança ou lástima para a coloração por lightman colocar as lâminas em cuba de coloração contendo o corante puro por três minutos transferir as lâminas para outra cuba contendo corante diluído na proporção de uma parte de corante para seis partes de água por 15 minutos passar as lâminas em água corrente por várias vezes
e posteriormente em água destilada até a retirada total do excesso de corante limpar as lâminas do lado oposto esfregaço e deixar secar ao ar por 24 horas após esse período a qualidade da coloração deve ser avaliada antes da montagem da lâmina utilizando resinas específicas as lâminas devem ser montadas evitando-se a formação de bolhas para análise microscópica as lâminas devem ser inicialmente avaliadas em aumento médio de 200 a 400 vizinhos para localizar campos com boa qualidade técnica onde células estejam bem espalhadas não modificadas e adequadamente colorados isso feito o observador deve proceder à contagem e análise
das células para identificação de micronúcleos utilizando um aumento de mil vezes com um objetivo admiração se adequadamente colorados os eritrócitos policromáticos o pcs devem aparecer na tonalidade azul clara ou acinzentada e os eritrócitos normal cromáticos ou mcs na tonalidade rosa o núcleo dos eletrodos bastos presentes nos pregar sudeste terá cor azul escura os pcs são levemente os maiores e mais arredondados do que o cncs os critérios para a identificação dos micronúcleos são o seu tamanho sua forma e sua coloração devem ser cerca de 1 para 10 a 1 para 20 do tamanho do pcr arredondados
ou ovais com contorno liso e bem definido e com coloração azul escuro pelo menos 4.000 ele trouxe tons policromática us devem ser analisados por animal para se determinar a frequência de pcs micro nucleadas para avaliar o efeito citotóxico da substância teste na medula óssea recomenda se a determinar a razão pc ncr ou seja a porcentagem de pcs no total de 500 ele trouxe tons a toxicidade é indicada quando houver redução significativa na percentagem de pc [Música] o teste do micro núcleo medula ótica rondon que permite a detecção de agenda classe ou genéricos ea mil gênios
com resultados reprodutíveis é simples pode ser desenvolvido em curto período de tempo com o uso de pequeno número de animais essas características fazem do teste do micro núcleo uma ferramenta altamente indicada para estudos tóxico genéticos o envio [Música] o ae
