Aula 7 Cultivo Celular

Oi bom dia pessoal tudo bem Hoje nós vamos falar sobre os princípios básicos de cultivo celular na verdade a gente vai ver quais os tipos de cultivo que existem não é as técnicas as principais técnicas que são utilizadas em importância do cultivo do celular para as pesquisas biomédicas tá bom Oi amor lá o que que é o cultivo celular curtir o celular nada mais é do que você retirar as células ou de um animal ou de Uma planta né e promover o crescimento desses dessas células em um meio artificial esse médico se ela tem que

ser favorável a gente vai falar também na nos tópicos seguintes da importância de fatores como PH oxigênio do céu dois o meio de Cultura né para que a gente possa para que possa ser mimetizado né o ambiente natural em que essas células viviam as células elas são removidas diretamente de um tecido ou elas podem Vir de uma linhagem que já foi estabelecida e com que importância dessas dessas dessas células em primeiro lugar é um modelo alternativo para substituição de Pesquisas com animais Então passa a ser livre de dor livre de Sofrimento você pode controlar esse

ambiente então estudar mais reprodutibilidade mais consistência que os seus resultados você pode produzir por exemplo é proteínas vírus em grande quantidade tão importante para produção De vacinas produção de medicamentos sem era muito utilizado também para tratamento do Câncer um tratamento até individualizado como a gente vai falar mais para frente e é possível entender tópicos que a gente fala de pesquisa básica com por exemplo Como é o ciclo de vida de um determinado parasita Qual é a resposta imunológica do indivíduo Contra esse parasito é então é importante para em relação parasito-hospedeiro existem outras ele vantagem né

desse tipo de Técnica de cultivo celular para pesquisa em geral vamos falar dos tipos de contigo não existe o que a gente chama de cultivo primário em que as células obtidas diretamente de um tecido com tecido humano por exemplo no tecido tumoral ou de um animal você vai lá e pega por exemplo de você quer fazer uma cultura de carne Opus você vai lá direto no coração do animal e retira o mesmo vegetal você vai direto na fonte Então esse tipo de cultivo ele contém as Mesmas características da célula de origem do tecido jurídica é

só que ele é muito é ele é muito heterogêneo que vem diversos tipos celulares ali naquele órgão naquele tecido que eu tô retirando aquelas Células E também divide-se o número limitado de vezes por um processo natural essas células entram em apoptose então eu não consigo fazer e pixels bom né dessa dessa dessa célula muitas e muitas vezes não elas elas têm um número limitado de vezes nós tem a vantagem de Se trabalhar com a célula exatamente como ela é essa é nenhum tipo de alteração ou transformação as viagens contínuas amplamente utilizadas hoje em dia também

elas multiplicam-se por mais tempo essas células elas elas elas têm algumas características ainda do tecido de origem delas elas podem ser replicados em torno de 80 vezes então elas aliás isso é necessário que elas vão crescendo ali naquele e-mail que é necessário fazer essas passagens Repiques ouço cultivos E essas estas sozinhas utilizadas por exemplo Como eu disse que a produção de vacinas para célula detecção né de tipos importantes em relação parasito-hospedeiro sozinha às vezes contínuas é que são utilizadas EA ele tipos de linhagens continuar disponíveis no mercado para ser o obtidas pelos Laboratórios tá e

as células transformadas por sua vez são chamadas assim porque elas são transformadas ou por métodos por meio de Métodos químicos ou por por meio de introdução de vírus elas são transformadas do ponto de vista genético que elas adquirem a capacidade de se multiplicar indeferido indefinidamente tá ou então você já obtém essas células do tecido já notado com por exemplo células são obtidas diretamente de de tumores né ahi lá é um exemplo e eu já vou falar pra vocês da história dessa célula que é muito interessante as células podem crescer ou à Deriva sem Superfície plástica

uma superfície que é devidamente tratada ou em vidro são as imagens células aderentes ou suspensão e meio de cultura é maior parte das linhagens por exemplo obtidas de origem hematopoiética elas crescem e suspensão são células não e existem alguns tipos celulares compreta ch ch Ok eu vou falar dela tela mais para frente é uma célula de ovário de hamster chinês ela é possível de crescer tanto de modo aderente com Quanto em suspensão e isso lógico tem algumas vantagens tá é essa história bem interessante de uma uma célula né É do moral uma célula que foi

que ela foi obtida dessa dessa paciente aqui e ela essa célula ela existe até hoje em vários Laboratórios depositar importante também processo de contaminação diversos cultivos celulares bom essas células elas foram obtidas de uma mulher de uma americana nascida em dirigir em 1920 que foi diagnosticada com câncer cervical Aos 30 anos de idade na verdade era adenocarcinoma cervical e ela morreu dentro depois de um ano depois que foi feito esse diagnóstico mas durante o tratamento dela médicos retiraram duas amostras cervicais e conseguiram cultivar essas amostras decida adenocarcinoma cervical que ela tinha é para fins de

pesquisa e se conseguir isso mais ou menos em 1952 até então todas as células que os pesquisadores tentavam cultivar morreu pouco tempo Depois essa célula for proveniente dessa descendente afro-americana dessa mulher chamada henrietta lacks é era diferente ela conseguia se essas células se e se multiplicavam e se multiplicavam ou seja ela ela Se mostraram e mortais apresentar uma altíssima taxa de crescimento inclusive o nome dessas células né que é se elas fazem de Vila por pela pelas iniciais da própria henrietta né irrita Alex existe Hoje essas células são amplamente utilizadas Em pesquisa né muito muito

mas há várias discussões éticas mesmo sobre a utilização dessas células porque as amostras de que foram retirados de reta foram retiradas sem consentimento Então como ficou a família nunca receber um único centavo né do que do que as indústrias ganham com a venda dessas células e o que provém das das das pesquisas dessas células por exemplo a vacina da pólio ela é produzida neste o celular devido às características deste Tipo celular bom então existe mesmo uma uma questão ética com relação a isso inclusive existe um belíssimo livro em livros que ele foi uma das filhas

que depois virou o filme dirigido pela outra outra que era a vida Imortal de henrietta lacks quem quiser procurar eu acredito que tenha na internet tá que vai falar justamente dessa dura história né da henrietta que morreu muito cedo que vivia em uma família pobre cuja família Anos depois continua pobre é o que não não não não não foi dado a ela que é que direito era né Tiraram a célula dela utiliza-se economicamente as suas células até hoje para produção de fitoterápicos inclusive para ajudar no tratamento da Aids e nada é existem indústrias farmacêuticas ganham

milhões enquanto a família continua pobre né mas é é legal quem quiser ver vamos voltar agora para tirar nossa aula como é que a Gente visualiza as linhagens celulares basicamente por meio de um microscópio invertido Qual que é a diferença desse microscópio invertido por exemplo microscópio óptico Rua vejo a principal diferença é a fonte de luz e o condensador que se encontram na parte superior do equipamento né então eu coloco a minha a minha garrafa de Cultura aqui o as minhas plaquinhas para visualizar as células dessa forma tá então é um microscópio especial eu Preciso

de um microscópio observou especial para observar as minhas Células E aí eu visualizo as células dessa forma só que são células deram essas células provenientes de rim de macaco de macaco Verde aqui Tá errado viu gente é eu vou o nome da célula Tá tá errado depois eu vou consertar para vocês mas é um macaco-verde africano espécie de macaco e eles retiraram essas ela é primariamente dessas células de rim desses macacos então aqui a gente Observa uma célula com crescimento um pouco crescimento aqui com uma alta densidade né como a gente observa e essa esse

microscópio gente que eu falei para vocês invertido ele pode até diferente espíritos havendo o microscópio que trabalhava no laboratório ele tinha essa luz verde então era essa foto que eu vi era assim que eu vi é que eu vi as células vem aqui as células e águia ó super importante para pesquisa né para indústrias farmacêuticas porque a uma Grande produção de medicamentos anticorpos pública essas células baixa confluência que quase confluente certo sim mas em que condições que eu devo cultivar as minhas elas gente não existe um protocolo único cada célula tem necessidades especiais de meio

de modo a mimetizar o ambiente em que ela estava Então vai variar amplamente de acordo com o celular tá os meios de Cultura eles são a gente compra esses meios por meio de mercado né no mercado científico Vamos dizer assim e às vezes a gente precisa complementar porque as ela precisa de algo a mais além do que tá presente daquele meio às vezes algumas elas precisam de um ambiente rico em CO2 outras células não precisam controle da temperatura a maior parte das células elas virem bem A36 37 graus Celsius mas existem algumas que não precisam

dessa temperatura com por exemplo as células de inseto a gente sabe que PH do meio é também pode ter interferir é a gente Precisa promover uma superfície adequada a adequada de apoio para essas células porque uma superfície adequada porque essas células elas não crescem de qualquer maneira você elas precisam de um bom substrato para crescer não adianta você tentar colocar essas células Numa superfície contendo quatro de cor uma superfície de vidro essas elas precisam que estes este plástico este vidro sejam tratados então que o que é vendido que é o que é vendido né Os

laboratórios são eu vou mostrar pra vocês as e as figuras em as fotos são garrafas placas de Petri já que vem com a superfície tratada própria para que possa acomodar essas células né as linhagens celulares Elas têm que ser obtidos gente matrizes originais de fontes confiáveis por exemplo a TCC American Type Culture Collection ela é a principal fornecedora de linhagens celulares né E aí porque você pode ter Certeza que a linhagem aquela que não veio com contaminação negar no Brasil a gente tem um banco de células do Rio de Janeiro que também é muito eficiente

que você pode confiar para fazer todos os trabalhos nesse tipo de célula porque as células ali são realmente originais e importante que além de criar um ambiente ótimo protegê-la de estresse químico físico mecânico E para isso a gente tem que ter algumas técnicas assépticas que já já eu vou falar pra vocês também como Funciona tá e em que condições onde essas células são cultivadas essas células são cultivadas em incubadoras tá é a maioria delas né porque as incubadoras Elas têm controle da temperatura elas auxiliam no PH do Meio manutenção do PH do Rio e nas

concentrações de gás no ambiente tanto de ser dois ponto de oxigênio a que a gente vê o display de uma incubadora de CO2 em que eu posso ver tá vendo 37 graus e uma uma uma ambiente uma Atmosfera com 5 porcento seu dois ainda por cima tem filtro hepa maravilhoso ou seja lá dentro Eu sei que o ambiente é Stereo então existem a Lógico que você tem que fazer a manutenção dessa incubadora de tempos em tempos né você não pode ficar abrindo e fechando é deixando aberta por muito tempo que ela vai perdendo as condições

internas dela né Com relação à manutenção dos gases e também a própria contaminação ela não deve ser instalada por exemplo um lugar Onde tem ventilação de asta você perde também todo o toda essa não existem alguns cuidados que tem que ser seguir com a incubadora mas em geral elas são mantidas assim porque a maior parte das linhagens elas necessitam de 37 graus Celsius tá e aqui a gente está falando de uma linhagem que precisa de cinco porcento do ambiente com 5 porcento de CO2 para ela crescer bem é bom e hoje é necessariamente a gente

cultiva a gente pode cultivar em placas Com vários postos carta por cima desse então eu tenho eu tenho um pouco de células sendo cultivada entender slides O Câmera de cultivo que são ótimos também já trabalhei com esse tipo e por exemplo vamos supor que eu tô trabalhando com o parasito e eu quero saber quanto tempo em quantos dias quantas horas por exemplo esse parasito começa a se dividir então aqui eu posso fazer eu posso fazer o seguinte o cultivo a célula em cada um desses Pocinhos e por exemplo dia um eu coloco parasito aqui E

aí nos é uma coloca o parasita em todos os passinhos aí eu vou eu vou retirando fixando as células separadamente Retiro aqui no depois de 24 horas eu coloco meu o meu fixador aqui já deixou esperando para depois fazer a coloração aí depois 48 horas a Retiro meio aqui vou fazer a coloração depois 72 horas e assim por diante isso é importante para gente ver a cinética De infecção por exemplo né do cultivo celular é só um exemplo que a gente que eu tô dando pra vocês como poderia ser usado essas temer slides porque depois

você vai mas como é que eu faço coloração essa parte plástica aqui ó você retira aí fica só uma lâmina uma lâmina de vidro normal comum aí você consegue fazer a coloração que você quiser aqui esse material dessas células né placas de Petri desde que devidamente tratadas específicas para curtir o Celular que não é possível e um dos mais utilizados que são as garrafas essas garrafas elas podem ou não ouvir com filtro e isso é uma quando vem com filtro não é um é porque às vezes as células dependência ou dois então como que eu

faço para o céu 2 entradas eu tenho deixar a tampinha um pouquinho aberta né Isso pode gerar contaminação Se eu por exemplo comprou essas com filtro não preciso deixar aberto né Pode deixar ela Fechadinha que o pelo filtro CO2 consegue penetrar no meio de cultura é onde manipular os cultivos sempre se trabalha com células e meios assépticos e meio sisters tá sempre sempre sempre o meio tem que ser estéreo e se utiliza as capelas de fluxo laminar Classe 2 basicamente nesse tipo de fluxo laminar a o que se tem a proteção do ambiente de trabalho

né é o que tem a proteção do ambiente onde você trabalhando tá trabalhando hoje poeira de bactérias e Tal Porque tem filtros está vendo o ar entra porque ele é Sugar gente e ele ele é sugado para a parte interior dessa Capela a obra filtrado pelas expressões filtros hepa está vendo e aí eles voltam para o ambiente de trabalho então Observe como o ar que está aqui é um ar Stereo tá totalmente Stereo É lógico eu também não posso colocar uma capela de fluxo laminar em frente a uma porta por exemplo tá todo mundo abrindo

e fechando Essa porta todo tempo porque o fluxo de ar também interfere no ambiente interno da Capela e aqui tá demonstrando como deve ser organizado ambos os Capela tá tudo bem organizado e tudo que vem aqui dentro tem que tá Stereo também temperatura como eu disse a maioria das linhagens crescem a 37 graus Celsius Tá mas a linhagens diferentes a importância dos gases CO2 oxigênio simples assim por diante basicamente a gente o CO2 ele tem uma função ele não tem uma função Nutricional nem nada mas ele tem uma função ali no ambiente celular além de

ajudar a manter o PH das culturas tá as culturas Elas têm PH ótimo entre é se eu não me engano 7.47. 27.4 eu pegar a ótimo deve ser mantido nessas culturas né então o que acontece é isso vai depender do tipo de meio Atenção se o dois ali dentro da estufa depende do tipo de meio de cultura que você tá utilizando o meio de Cultura já vem com bicarbonato e você colocando o Seu dois ele também vai ajudar a tamponar porque olha só vocês lembram desse tampão que é é um tampão bem básico né tem

que o CO2 quando entra em contato com água e ele forma laço de estável que eu acho carbônico que se diz o sim h + e bicarbonato então por exemplo quando mês por alguma razão tá assistir ficando muito então a gente tem por exemplo excesso de CO2 o que acontece com a minha com a minha equação a equação basicamente ela disse ela ela Desloca para a direita de modo a forma O bicarbonato que para operar policarbonato Vai tanto o Nando vai entrar em contato com esse é mais um meio e vai tampo não deixa ainda

mais de modo que o PH da Cultura vai sendo contido entre 7.2 e 7.4 é a função do céu dois basicamente tá oxigênio também é necessário para o metabolismo celular essas células elas fazem o processo de glicólise que é um processo dependente de oxidação de oxigênio né é assim pegar É 7.27. 4 mesmo é os meios de Cultura eles também vem com indicador de PH que é o que é Norbert você noverde ele muda de Cultura ele muda de cor desculpa na medida que vai ter no mudanças no PH então quando pega tá muito ácido

por exemplo 6:30 olha como que o meu meio de cultura e quando pega tá muito alcalino ele fica com a cor mais escura né Olha coração 7.8 grandes mudanças na quantidade então presente é você vai Checa a sua Cultura ontem você chegou Chegou a sua cultura tava 7.4 aí hoje você vai chegar e ver lá é super amarelo bebê peste informação muito indicativo de contaminação que esse processo de acidificação do meio é natural as células vão utilizando o substrato é o meio de cultura e vão produzindo ácidos então é lógico que o meio vai tamponando

até um certo. Né A partir do momento em que aqueles em que o bicarbonato vai sendo consumido ela não consegue tamponar e o meio de Cultura vai ficando mais alaranjado e posteriormente amarelo mas isso leva um tempo por exemplo já depender também do número de células que você tem na sua garrafa na sua cultura se essa mudança repentina geralmente relaciona-se com infecção contaminação por isso mente a contaminação bacteriana eu também vou falar sobre isso mais para frente para você está o meio muito contaminadas também é complicado né contaminações por fungos lembra Lembra o meio de

Cultura Mais alcalino também né então você precisa fazer mudanças geralmente é um processo normal você vai lá checou sua cultura não tem nada você troca o meio a processo a troca do vestido que você vai conhecendo as ocelo você vai vendo que ela que você precisa trocar meio a cada dois dias a cada um dia tão curtindo o celular é um trabalho que você vai fazendo todos os dias eu servas os elas diariamente tá É bom como eu disse para vocês a mudança do PH EA manutenção do PH com a atmosfera de oxigênio estão dois

desculpa vai ser dependente do meio de controle que estou utilizando existem diferentes meios de Cultura de Man e Men cada um com quantidades Diferentes né de substrato O bicarbonato também então deixa eu dar um exemplo para vocês aqui esse gráfico me dá o PH do meio com relação a porcentagem CO2 a quantidade de CO2 presentes naquela atmosfera que Eu tô cultivando as minhas células tá dentro da incubadora Por exemplo quando eu vejo esse gráfico a que ele se refere ao meio Enem Enem esses essas duas linhas referem-se a o PH 7.2 a 7.4 que é

o PH ótimo para o meu cultivo celular Observe que eu preciso de uma atenção de CO2 aqui de quatro a seis entre quatro e seis por cento para que eu tenho um PH entre 7 pontos 17.4 tá que é esse intervalinho aqui ó então por isso que a gente convenciona Colocar 100% CO2 quando você olha a maioria dos dos meios de Cultura realmente entre quatro e seis por cento é a é o uma atmosfera ideal para que você tenha um PH a manutenção do PH entre 7.2 e 7.4 tá é mas vai depender do Meio

como é que esse meio de Cultura o meio de Cultura ela é fonte de carbono elefante de energia que ele contêm glicose de alimentos essenciais para o crescimento então ele contém sais inorgânicos ele Contém carboidratos aminoácidos vitaminas episódios proteínas peptídeos então cada nem cada meio de Cultura bem com suas especificações são ideais para um tipo de cultura Existem algumas células que se desenvolvem bem diferentes meios nem mesmo e similares então além do The Man a gente tem o meio rpmi né esse aqui não tô conseguindo ler mas eu acho que f12 que é um bom

meio também aí eles vêm ou e utilizado aí você tem que preparar em laboratório ou Eles vêm prontos assim tem que usar muito rapidamente quando não utilizar É você mantém geladeira se você não tem geladeira por um tempo né E quando você utiliza você tem que colocar no banho-maria você não pode colocar meio gelado em cima das suas células tá esse aqui por exemplo ele vem com a camina con senão Red e piruvato de sódio E aí Eric Glutamina é um aminoácido essencial tem que ter mesmo em alguns Meios de cultura que eram Red Como

eu disse para vocês ele é um indicador de PH e o privado de sódio ele é importante para a obtenção de energia pela célula Tá o pé Você tem que conhecer você tem que ter protocolo já padronizados para saber como você vai trabalhar com aquelas ela tá em alguns meios além de do meio de Cultura normal a gente chama de meio completa aquele que a gente suplementa Com soro nem toda célula precisa de soro de soro tá é mas Muitas delas necessitam para o crescimento por seu próprio crescimento né o soro ele vai auxiliar na

visão celular e o meio dele é possível as células obter em proteínas ácidos graxos hormônios né E essa suplementação pode variar de cinco a vinte por cento dependendo do tipo celular o principal soro utilizado é o soro fetal bovino porque ele não tem anticorpos e tal e ele é inativado né Não contente cortem o problema do soro fetal bovino dos soros né a suplementação com sobra que um boa parte da contaminação vende esse soro tá contaminação em cultivo celular vendo esse soro né e a muita variabilidade lote A lote então ele não tem uma constância

na sua produção né nem todos contém quantidades idênticas de proteínas os gás os carros usados São variáveis e quem faz o cultivo dessas células tem que Entrar em contato tem que saber disso também além de ser uma fonte de controle de contaminação aqui só mostrando para vocês os meios de Cultura EA linhagem celular que geralmente é o tipo de meio que essa célula utiliza então preserva as células ri lá que eu falei para vocês elas são células epiteliais é da espécie humana né Como que você cultiva em meio Man e aí você suplementa com dois

millimolar de Glutamina mas 10 por cento de soro fetal bovino mais um por cento De aminoácidos não essenciais tudo isso você compra pra gente a Glutamina tudo isso você uso você compra especificamente obtém então o meio que já vem suplementado com soro com os aminoácidos essenciais que o adicionei laboratório Regional de Meio completo tá uma outra cela ch oque é muito comum a Marcela também é uma sala também origem epitelial só que de hamster ela cresce em meio f12 que você já tá com 2 litros laranja vitamina e 10 Por cento de soro fetal bovino

e oque é bom é a célula essas linhagens celulares elas não crescem é indefinidamente somente as células transformadas elas Como Camila parece mas por exemplo Vera o MDB cá essas outras elas não crescem de forma definida Elas têm um gráfico elas crescem de forma com a mão gráfico a primeira fase dessas e Alonso põe eu comprei a célula da TCC né ela veio para mim tô começando a cultivá-la o que que Eu vou fazer como é que essas Elas começam seu desenvolvimento a primeira o primeiro passo delas a primeira fase que elas vão ter uma

frase que a gente chama de fase legging essa fase leg elas elas as células estão crescendo ainda não tá muito devagar elas não estão se dividindo Elas estão só se adaptando às condições do meio tá ela tá sentindo meio primeiro tá bom a segunda fase é a fase logaritima ou de crescimento as células nessa fase tem um crescimento Exponencial lhes confere um ativamente o e rapidamente ela já se encontram confluentes quanto à densidade que ele é confluente quando você olha o seu cultivo e você vê uma cela em contato com a outra mas ela contar

com a outra no fim dessa fase os repiques são necessários da porque a sexta pode começar quando as células começam a ficar com clientes começa a uma célula entrando em contato com a outra pode haver sinais de apoptose então é muito Importante é você não deixa chegar a esse ponto não você começa a perder célula porque aí vem uma fase estacionária ou platô ou na fase estacionária ou relatou que essa fase aqui é a proliferação diminui as células vão se tornando confluentes né e o número de células no ciclo ativo vai diminuindo em até dez

porcento tá então ela cresce cresce cresce depois não passa a crescer mais tão quem pensa que tá mantendo o meio de cultura e água Deixar a cela mais um pouco aí cresce mais eu vou poder Marcelo isso é péssimo para curtir no celular e posteriormente que não é mostrado aqui ó o declínio em que predomina a morte celular o redução no número de células viáveis por diminuição suplemento do Meio se observar o meu meio também marlinho lá qual já não tem substratos para mim trazer células e também para aquilo que eu falei numa cela em

contato com a outra vai gerando sinais de Apoptose das células começam a morrer no meu meio de cultura e gente o meio de Cultura já completamente sem o seu suplemento parcelas também começam a morrer por falta de nutrientes Tá bom olha só um exemplo aqui é uma célula com setenta por cento de confluência uma célula com 90 porcento de confluência uma cela com 100 porcento concorrência não é legal chegar a esse momento não é a maior parte da literatura nos pede para realizar a tripsinização ou Realizar o suco cultivo nessa etapa quando as células estão

e noventa porcento de confluência consigo ver alguns espaços ainda da placa tá vendo sem a minha células em células e o outro exemplo a 10 por cento trinta por cento e cinquenta gente que dependendo do seu tipo celular só se ela tiver bem adaptada esse processo de 50 noventa porcento partes durante por 24 horas só tá então tem que tomar muito cuidado ficar muito de hoje é caras Linhagens diariamente para poder ter noção de como essas células está bom E aí a senhora chegar em 90 porcento de confluência chegou aquele momento em que eu penso

assim bom que o bom curtir o celular o que que eu faço agora para suas células com grande quantidade então eu vou examinar para a saúde está tudo saudável Tá bonitinho eu preciso realizar o processo agora de tripsinização eu vou tripsinizar vou subir cultivar as minhas Células E para Isso existe uma uma um protocolo para vocês agora como é que é a profissionalização própria tensão de cultivo toda vez que eu falar com você esse motivo é a minha célula já tá quase confluente eu preciso de um de um protocolo em que eu posso as novas

células as células acesso para outras garrafas de cultivo tá uma das técnicas utilizadas é a tripsina tripsinização a tripsina na verdade você não usa só a piscina né mas é ela é uma Enzima que promove a digestão de proteínas adesivas da membrana plasmática das células né O que promove a Adesão de uma célula a outra e as células se destacam no meio de Cultura tá essa solução também tem ADP a vai ter Leon quelantes de cálcio magnésio podem estar ali na no meio de cultura e podem inibir a ação da pepsina tá então se elas

vão sendo liberadas individualmente redondinho só tem uma foto melhor ali que mostrar para vocês a medida que o Tempo vai passando elas vão sendo liberadas do meio tá eu acho que umas a isso que mostra direitinho então o que que eu faço eu tiro meio de Cultura nessa serva aí eu vou coloca a solução de tripsina de ter a eu espero um minutinho eu sempre tem que tá olhando e a gente porque aqui a piscina vai agindo aí é quanto tempo que eu deixo eu vou depende Tá quanto você quer que haja que ela fica

aí você pode ter até ajuda de uma pipeta para poder ir rastando Meio para poder ajudar tirar as telas que você quer aquele momento que você vê que realmente não agora já tá bom as minhas células já tem bastante célula no meio de cultura que foram destacadas é o que que você faz você vai tirar o meio de Cultura igual mostrando aqui tira esse sobrenadante com as células coloca no tubo tá vendo esse aqui tá usando tudo sempre aquele você vai sempre focar centrifugar a 4 graus Celsius em centrífuga refrigerada tá você sempre Fuga isso

aí você vai ter o seu pele ti você cuida da sua mente vai pegar aquele perde-se o vai funcionar novo meio vai fazer a contagem dessas células a contagem é em câmara de neubauer eu não quis adicionais para vocês agora logo nos primeiros períodos Mas vocês vão ver o trabalho é diferente disciplinas com se trabalha com essas câmeras na contagem de células nessas câmeras é depois de contado eu transfiro o número de células que eu Quero para tá vendo para o para placa de cultura é importante gente que naquele momento que eu falo olha bom

a piscina já viu já viu suficiente que que eu faço eu pego o meio meio novinho e coloco naquela solução ali por quê Porque ajuda a parar ação da piscina quando eu coloco meios o fetal ele ajuda né a juntamente comigo a inativar proteína então é digere aquelas faz a digestão até aquele momentinho Olha só não é bom deixar muito tempo com tripsina que gera danos Ela tem que ter certeza que aquelas células minha que ficou aquela que eu te dizer é que ela ele ainda vai ter célula sabe né naquela naquele primeiro potinho meu

ainda vai ter células aquela primeira garrafinha eu tenho que colocar meio de Cultura novo limpinho a Center piscina para caçar umas voltem a se multiplicarem novamente naquele momento que eu centrífugo as células é a 4 graus Celsius é importante que os joga o sobrenadante fora e que eu reçus penas Minhas células no meio de Cultura novo limpinho tá Ah é então a medida que eu vou colocar aqui a piscina a 10 minuto um minuto já começa a observar o que olha só como está degradando os espaços em castelos né até que a com três minutos

eu já tenho células com essa aparência arredondada é aquele aspecto dessas células no processo aqui ó a gente até piscina ainda não agiu então eu tenho células ainda de dívidas mas essas que Estão aqui são todas elas que foram utilizadas elas ficam com esse aspecto Redondo né e ficam flutuando no meio de Cultura pô eu tô com aquela quantidade enorme de célula e nesse exato momento eu não quero fazer isso cultivo ou então eu quero saber cultivar assim mas olha só já fiz as minhas duas garrafinhas e ainda tô com célula aqui o que que

eu posso fazer para não perder essas células que estão em excesso eu posso congelar vamos ver aqui ó Ah é Então no momento em que eu já fiz o processo de é de tripsinização chequei as células aderidas responde suspende as células e meio Limpo olha só que eu posso fazer congelar as minhas telas isso é legal a criopreservação congelamento é uma técnica muito legal porque eu vou mantendo uma forma de manter o meu meio de Cultura de manter a minha linhagem celular que por mais que você fique para sua garrafa de cultura e fica livre

Precisando isso cultivar sobre cultivado em algum momento essas células morrem é como eu falei para vocês então de 80 passagem média que uma célula olhava e celular suporta é burro eu tenho laboratório porque eu também posso perder vamos porque aconteceu uma contaminação do nas minhas células eu perdi aquela linhagem Então eu preciso ter alguma de estoque eu faço isso tendo a minha crio preservação a maior parte das células são preservadas a menos 196 Graus por anos tá que é o nitrogênio líquido em nitrogênio líquido tá e gera economia de tempo Jerico no México e também

a gente à medida que se manter muitas garrafas não tem muitas células aí fica extremamente caro por laboratório os meios de Cultura a soluções que são utilizadas os filtros né É tudo isso é bastante caro então você não fizer manteiga Aquele monte Aquela quantidade enorme de célula é só o essencial para o seu experimento E Para isso gente Para gente criou preservar a gente usa uma substância chamada de dmso a e o dimetilsulfóxido ele é um criou protetor ele é utilizado para ele protege né as membranas celulares dos cristais de gelo de modo que observa

aqui quando eu faço congelamento de células condene se os cristais de gelo vão se formando entre as células grandes estrangeiros entre a célula e não dentro da célula porque ela só se forma Cristais de gelo dentro da célula O problema é que na hora que eles congelo o que que aconteceu com essas células antes mesmo né gente Aquele monte de cristal vai rasgando toda a minha perna celular então no final do processo quando eu tento descongelar essas células para continuar o Executivo eu não consigo Então demência Olha é ideal para isso ele é um crio

protetor que impede cristalização no interior das células tá só que ele também ele tem ele Causa dano a célula engraçado porque ele é citotóxico então a gente não pode deixar muito tempo em contar existem protocolos padronizados mas de uma forma geral congelamento é feito lento e de modo que o que que eu pego eu pego as células que eu fico esse design centrífugo E ressuspenso e suspendo essa essas células em um meio de congelamento eu eu me lembro muito de trabalhar com soro fetal bovino e dmso há mais ou menos dez porcento eu não me

lembro acho Que há algo assim mas era bem MS o com o soro fetal bovino e protocolos né gente cada laboratório vai ter o seu aí eu vou responder essas células aquele Pezinho no meio de congelamento rapidamente eu vou ali cortar entre ouvir os que eu vou mostrar para vocês que são os são a nós só somos ideais para para esse processo de criopreservação aí o que eu faço isso aqui tudo a gente eu faço gelo tá aí eu corro e vou colocar as minhas células a menos 80 eu preciso de um Freezer - 80

primeiro aí ele vai ficar nesse freezer por 24 horas depois de 24 horas eu retiro e coloco o nome trazendo ideia as minhas elas estão prontas e aqui ó porque a gente precisa para criar preservação esse aqui ó essa nos criou views que eu utilizo tá vendo eles resistem né ah ah essas baixas temperaturas Aqui tá o freezer - 80 maravilhoso Prime freezer - 80 é mais ou menos assim por dentro tá vendo que a gente lê então fica 24 horas nesse menos Oitenta e depois eu passo para acho específica nessa que temática mistura e

as hastes contém os tubinhos eu posso indicar aí isso tudo é indicado sabe tá em qual kanistem qual a arte em qual localização na haste Onde está o meu tubinho para encontrá-lo depois e que vem do interior né de onde de um de um nitrogênio líquido de um botijão de gás é bom e agora aconteceu isso contaminei as minhas elas vou pensar no pior cenário que a gente consegue mesmo e Células eu preciso descongelar aquela linhagem para eu poder continuar a trabalhar então como é que é feito esse processo de descongelamento o celular o processo

de descongelamento é o contrário do processo de congelamento quando a gente tem assim congelar célula a gente congela de um modo bem lento de moda não formar cristais dentro da célula Bom vamos lá então o que que eu faço eu estabilizo o meio de meio de mim garrafa Na incubadora né a 37 graus por 15 minutos é preciso de um meio bem quentinho aí eu retiro aquele meu aquele me ouviu com aqui Observe com um milhão de cellos Tá vendo porque é importante fazer a contagem é a gente faz a contagem dessas células junto com

uma substância aqui me deixa ver quais são as células que estão viáveis né um corante de viabilidade uma coisa assim e aí a gente conta as células viáveis já coloca naquele naquele vio aquele micro Exatamente ele criou viu Desculpa a quantidade exata de células que eu tenho lido E aí eu levo esse queria ouvir o banho-maria 37 graus gente mas eu tenho que tomar cuidado Eu geralmente não deixava descongelar de tudo sabe eu levava eu transferi-lo rapidamente quando eu vi que eu tinha algum alguns coisinhas de geladeira chava ainda alguns e colocava no meio de

Cultura ainda com um pouquinho de gelo sabe já transferir por meio de cutícula deixava Por 24 horas e só e observe que enquanto a gente leva mais de 24 horas para poder fazer o congelamento o descongelamento questão de minutos quanto menos tempo as telas ficar em contato com a solução de dmso melhor então quanto antes eu dilui esse material no meu no meu na minha garrafinha é melhor tá ó e aqui o desenvolvimento de uma linhagem após o descongelamento é tão no início Pode parecer que as células estão Muito bem mas eu consigo ver algumas

Avenidas Que Elas começam a liberar esse prolongamento e algumas arredondadas porque ainda não se aderiram no meio é o segundo dia Ou serve como já tem a formação desse tapete e a confluência 120 Horas quando o seu protocolo de congelamento Está correto do peito dentro dentro do protocolo é assim mesmo que você vai observar é tu que Fala um pouquinho agora sobre boas práticas incutir do celular porque É essencial os processos a contaminação dentro de um laboratório é extremamente complicada causa muito prejuízo para os e financeiro para essencial que você saiba atrapalhar trabalhar no Laboratório

de curtir o celular para que seus experimentos Socorro na forma mais mais esperada possível é o ideal aqui à disposição dos de tudo que você precisa ali no momento da manipulação dos cultivos seja o mais próximo possível de você então a gente Veio aqui aqui o fluxo laminar um fluxo laminar de ponta mãe tá vendo a pessoa utilizando o cepes Eu também utilizaria óculos tá aqui a gente tem uma estufa de CO2 ela tá próxima a ao fluxo laminar é importante para Que ela possa ter um fácil acesso a tudo e tetas aqui pipeta as

próximas a ela também né o banho-maria também próximos meios de Cultura um ambiente extremamente limpo e organizado os principais equipamentos de proteção individual para curtir o Celular são óculos luvas jaleco é bom que você use sempre seus sapatos sapatos fechados viu em troca de luvas deve ser quando você você observou que houve algum procedimento que possa ter tido contaminação que é o caso dos o jaleco sempre limpo não vou ficar utilizando reutilizando jalecos levar para lavar e sempre Limpo manter bancada fluxo todos os acampamentos limpos né a gente sabe que aquela poeira o abre e

fecha das Portas leva aquela poeira cima dos móveis para dentro da banca do suco né pode ocorrer tipo de contaminação o fluxo laminar ele primeiro começar a trabalhar com células o que eu vou fazer eu limpo com essa nossa trinta por cento e igual uso ver aí você vai vir seu laboratório geralmente são 15 minutos antes e depois do procedimento a desligado está então eu vou utilizar tudo ali tudo que eu preciso ideal é que com telhas fitas o meu descarte né tudo Esteja ali dentro do fluxo devidamente esterilizado já no momento em que eu

for trabalhar a pepeta as fronteiras céu scrapers o ideal é que seja tudo Stereo é por isso que é caro trabalhar com célula né gente usou uma vez jogou fora o que você é um script o céu escrever é uma forma de você ele ele parece um rodinho Então você fazer raspagem do seu curtir no celular ao invés de utilizar a piscina tá é o equipamento para soltar deslocar Células o meio de Cultura meios completos aqueles que já estão com Sorvetão ouvindo extensa esteres eu vou mostrar pra vocês ali a forma que a gente a

gente prepara o meio daí a gente filtra todas as soluções que se prepara filtrar tudo utilizando a outra pura a filtra e ele cota é ideal alicota gente porque você ali corta congela né porque você não vai às vezes você não vai utilizar grandes quantidades de e-mail grande quantidade de soro fetal ou Disposição das suas soluções de laboratório então é importante que se ali por ter tudo esterelizado eh essas figuras elas demonstram Como eu posso limpar lá as cisternas por exemplo dos meus encubados você tem um spray com álcool 70 porcento é ideal dentro das

estufas gente elas tenham essas placas É parece uma como que eu como que eu posso chamar isso ela é tipo uma gavetinha mesmo tá de alumínio e eu coloco água ali cuidava Que acaba seja destilada é uma água que eu tenho que ficar trocando ela de forma mais frequente da uma vez por semana pelo menos essa água que mantém a umidade antigamente pedisse para colocar sulfato de cobre eu sou da época que a gente colocava O sulfato de cobre na água da estufa para evitar a contaminação por fungo que sulfato de cobre é ótimo para

isso é hoje em dia não não se deve fazer mais porque acaba ficando Cobra em suspensão e ele pode Entrar nos cultivos e contaminar células e eles a ser Tá então não é mais utilizada que existem algumas práticas gente é a gente fala em casa dicas né com objetivo de manter né tudo estéreo no interior da do laboratório presente no momento que você vai abrir as suas pipetas Então abre pelo lado de trás e não ter o lado da frente tá por exemplo aqui é uma algo completamente errado Observe que a pessoa ela tá abrindo

a pepeta pelo lado Pela ponta isso não deve ser feito você acaba manipulando a conta. Encostando na ponta e contaminando tudo tá é aqui tá mostrando como você Pateta o meio de Cultura como fazer a troca dos meios de Cultura tá então você vai utilizar pipetas diferentes aqui a gente tem um pecador automática extremamente prático é necessário quando se trabalha com esse tipo de pita essa tem que ter o pecador para você retirar outra forma é você ter pipeta Pasteur e sério aí você compra Sacos e sacos de pipeta Pasteur as férias para poder retirar

no meio mas tem que jogar tudo fora não pode reaproveitar a absolutamente nada mesmo você e tenha o tente autoclavar uma chance muito grande né de contaminação lembra que eu falei para você que os meios e as soluções devem ser filtrados é outra parte cara do laboratório você trabalhar com esses fios né são filtros geralmente de 02 mil km solfiltros que não permitem A passagem nem de bactérias linda toxinas em nada então você tem tanto filtros assim Só Filtros de seringa que para operar por exemplo você quer filtrar o meio direto ali na sua garrafinha

de Cultura então você acha que seu meio contaminou mas só um tubo é você lá você vai e utiliza os filtros de seringa o existem também esses esses mecanismos aqui ó você compra E aí que você pode filtrar 1 litro 2 litros né de meio de uma vez geralmente A por sistema vácuo se associa uma bombinha cria-se um vácuo e o meio o meio que tá aqui não espere o desce O que é que fica o ministério né esses que se esses momentos que você passa tanto comprar e alguns você já joga fora utiliza uma

única vez quanto existem sistemas que podem ser autoclaváveis tá eu prefiro sempre e sistemas aqui apesar de serem mais caros né É me garantem ligaram 30 contaminação que eu não vou utilizar mais uma vez que você tem essa Quantidade enorme de Meio completo por exemplo já foi pra daí você ali cota tudo guarda no refrigerador e é bom agora interessante água pura a água reagente que aquela utilizada em laboratório ela tem diferentes graus de Pureza água que a gente usa pra curtir o celular é a mesma tem que ter a mesma coisa que a gente

usa para a biologia molecular por exemplo tá a água profecia é a mesma pureza a gente chama essa água de água Ultra pura e essa esse tipo de Água reagente ele tem algumas especificações tá vendo com relação a resistividade a presença de carbono orgânico sódio etc é é é uma água tipo um não é extremamente pura e você só consegue ela em laboratório adicionando por vários sistemas de filtração na com um sistema único e aí você vai na empresa e pede Olha eu preciso de água ultra-pura então é ela que vai desenvolver o sistema mais

mais apropriado pela boratório esse aqui Por exemplo no laboratório muito pequeno então tem sempre a água é água da torneira E você tem um pré-tratamento pode ser processo de filtração de ionização E aí você já copo aquipamento para alugar outra por tipo 1 é utilizado no laboratório a água gente é essencial laboratório de cultivo celular eu acho interessante que tudo que você trabalha eu vi uma vez uma pessoa falando que você não se preocupa com a água como você colocar gasolina adulterada um Combustível adulterado no ar Ferrari Exatamente isso você tá utilizando isso elaborar os

equipamentos caríssimos você mantém as células a costura super super alto e você não se preocupava né que é o componente fundamental reagente essencial os seus meios de Cultura para manutenção das suas estufas o banho-maria então não faz o menor sentido né então falar um pouquinho sobre contaminação das linhagens celular Gente um verdadeiro problema um laboratório a gente não fala quando isso vai acontecer ela vai assim e sim como porque com certeza trabalhando com linhagem algum momento você vai ter confinante nela acaba acontecendo gente é muito comum tá eu posso ter contaminem contaminantes que são divisíveis

como bactérias eu digo microscopicamente bactérias e leveduras fungos contaminação com outras linhagens celulares e posso ter aqueles que são Menos visíveis ou invisíveis com por exemplo micoplasma vírus contaminantes químicos como as vezes contamina com as a mais que você utiliza para esterilizar alguma coisa que você vai colocar dentro lá do lado do fluxo laminar tá e o que que acontece com as células de uma forma geral resultou em pobre morfologia rápida mudança de cor do meio o meio pode ficar turva as células se destacam e por fim ocorre Pedro assim a gente tá e de

onde vem a contaminação é das Minhas células gente pode vir n locais mas a principal origem de contaminação no laboratório vendo operador a geralmente de células de bactérias ou da nossa própria microbiota Vamos fazer vamos pensar os então é o falar próximo das culturas e não utilizar duas Acredite Se Quiser pedir isso processos de pipetagem altamente incorretos equipamentos que não foram esterilizados corretamente a infraestrutura que não está adequada para trabalhar com célula Tá e os próprios meios de Cultura podem ser contaminados nesta temos aqui alguns exemplos de cultivos celulares com contaminação aqui a gente tem

leveduras todas essas que vocês estão segunda questão de verduras aqui são bactérias os fungos filamentosos já tive contaminação por fungo filamentoso é triste de ver gente uma coisa muito triste de ver contaminação cruzada com outra linhagem na hora que interessante Né que você tem uma linhagem e aqui você tem outra isso acontece gente laboratório quando você trabalha inadvertidamente né com duas linhagens ao mesmo tempo troca o meio de uma depois no meio da outra se não é correto não é adequado Você pode ter é o que a gente chama de contaminação cruzada tá E aí

essa aqui é uma charge bem legal que mostra o que acontece na contaminação cruzada tudo estava dando certo eu ficar bem legal até que eles Descobriram que as suas células fila expressavam marcadores promoção repente como a gente fila ela tem cromossomos femininos apenas só tem x não tem isso então ouvir a sua cultura ou uma contaminação cruzada na sua cultura é a tá com mais de um tipo celular Alice é realmente triste gente o micoplasma é um problema muito grave é posso trabalhar para curtir o celular a maior parte das contaminações ocorrem por micoplasma e

que quer tão difícil É por micoplasma Porque ao contrário de bactérias ou fungos de outras bactérias e diz fungos né você não tem uma substância altamente efetiva contra micropilar ela é uma bactéria Só quarta interessante vai botar é muito pequeno então ela passa pelos filtros de 02 em micrômetros e ela não pode ser detectada microscopicamente você precisa fazer testes é como por exemplo Elisa nessa de PCR cultura para você saber que tem a essas bactérias presentes ali tá E Por não terem parede de celular elas são extremamente resistentes aos antibióticos são utilizados o que que

acontece com o micoplasma ele geralmente não causa mudança no meio não o meu não fica Turvo é nem sempre as células ficam alteradas Tá mas pode dar alteração por exemplo nos resultados que você quer vamos pouco você está cultivando uma linhagem é que você tá ali com uma linhagem por exemplo de vão pensar de linfócitos né não precisa ser aderente Uma linhagem suspensa em que você quer avaliar a resposta imunológica do indivíduo Você retirou aquelas células do próprio de vida tá cultivando elas ali e você quer avaliar a resposta imunológica quando você coloca daquele divido

quando um determinado e se elas tiverem contaminadas com o plasma os seus resultados não vão ser filha de um grande Laboratórios o que se faz é monitorar continuamente a pureza dessas Linhagens né com técnicas como essa Elisa né sente né é grandes Laboratórios Precisam fazer isso especialmente aqueles destinados à produção de biofármacos mais para frente tá bom vamos por fim falar das aplicações de cultivo celular como eu falei para vocês no início ele pode ser um sistema modelo a gente estudar ciclo de vida metabolismo relação parasito-hospedeiro de determinado organismo que por exemplo a gente tem

cultivos celulares decisão Supervielle em diferentes linhagens celulares né que a gente observa é presença de pode ser explosões números 8 centenas de células formando vacúolos parasitóforos tá vendo que já consegue observar o tipo de reprodução que é primeiro agonia O que é uma vez que hora tem essas células cultivadas eu Existe protocolos para eu fazer a por exemplo é a microscopia eletrônica dos tipos celulares eu consigo ver se para agir Como um todo né toda a sua maquinaria para entrada no cultivo celular as organelas que ele apresenta guia é É essa mesmo sistema modelo para

pesquisa sobre mecanismos do Câncer validação de drogas quimioterápicas né como eficiente essa toxicidade dessas drogas é é interessante observar que a maior parte dos tumores que existem já contém as suas linhagens celulares estabelecidas e montagem estão disponíveis comercialmente precisa para Se trabalhar para se fazer estudos né uma coisa que vem crescendo muito ultimamente a utilização de cultivo de célula primária ou originária do paciente né Então aí porque aí você tem um Pool de células que você pode fazer teste de medicamentos e tudo mais É como se você é isso aqui gente é uma abordagem super

interessante para que se possa fazer uma o paciente ele possa receber a medicação de forma bem com certa identidade né de forma é de forma Mais adequada recebendo a quimioterapia mais apropriada que me conta o que é suas células cancerígenas mais não as viagens primárias são importantes porque elas reproduzem esse esse ambiente tumoral né de modo as células respondem de forma mais autêntica possível é sempre em estudos pré-clínicos essas que são utilizadas né mas nesse já observa já se prevê aí uma possibilidade da medicação ser personalizada para vocês paciência o Meio desses modelos né crescimento

de vírus que a obtenção de vacinas eu mesmo falei para vocês que as telas filas Elas têm essa função né é produção de vírus para poder produzir vacina que que acontece esses vírus Ele se replicam nos cultivos Há uma possibilidade de produção em larga escala essas células geralmente crescem em suspensão em biorreatores urgente em comum são como tanques muito grandes aqui a gente observa essas células em suspensão então Com que esse processo ocorre e Então como que ocorre isso né aqui é esse essa figura ela ela demonstra como se obtém por exemplo da vacina trivalente

A vacina que o Enzo né geralmente a Organização Mundial de Saúde que define acertos que devem ser escolhe acerca da produção das vacinas né De acordo com a prevalência delas mesma população uma vez que a Organização Mundial score essa separação separadamente cultivadas em células em Suspensão como poder mostrar aqui depois os vírus se eles são recuperados desse sobrenadante por processos de centrifugação e filtração né cromatografia e tudo isso permite também a eliminação dos deveres celulares né você para os vírus o restante das células dos componentes das células né E aí depende por exemplo vai ser

vai ser por vírus inativado vírus morto então por os pedaços o vírus né então existem protocolos específicos para se criar Cada uma dessas condições por exemplo vai fazer a solução dos vírus tão somente o que é como é a prover os influência nessa tem que partículas virais e daí eles produzem essas partículas virais todas separadamente então por exemplo eu tenho três cepas cada uma é produzido E purificar as forma separada e se junta para poder fazer a vacina tá isso em grande escala né gente tá falando com eles para vocês em grandes que atores é

que outros Exemplos a vacina da HPV ela é produzida assim também vacina pólio né anteriormente produção de medicamentos né eu não vou explicar o processo de da expressão de como é como é possível mas é acreditem que acredita em mim essas células elas passam a expressar por meio de protocolos específicos né em Minas recombinação para uso terapêutico por exemplo uma célula passa a expressar uma proteína que depois vai ser purificado e vai virar um Medicamento existem em torno de 140 proteínas recombinantes que estão disponíveis para uso terapêutico hoje em dia tá a maior parte dessas

proteínas elas são expressas por células HC o porquê que é tão importante quando a gente fala esqueçam de proteína recombinante que isso o que é que isso seja feita em células especialmente célula eucariótica a gente viu né que essas células eucarióticas elas tem todo uma maquinaria lembra retículo Endoplasmático rugoso depois complexo de golgi fazem Todas aquelas alterações modificações possam dos traços do xamanismo glicosilação fosforilação Então as proteínas elas são os mais próximo possível das proteínas encontradas em humanos isso gera uma baixa imunogenicidade né como elas são muito semelhantes a proteína humana Então já era quase

nenhum quase nenhuma bom então são medicamentos produtos e medicamentos de forma segura e a gente Tem que lembrar que a gente fala de terapia molecular né Essa é a terapia molecular é importante a gente falar que isso é produzir em alta escala aqui eu mostro pra vocês alguns exemplos de proteínas que são recombinantes o nome do produto tá indicação para qual tipo de doença que a companhia data da aprovação então a gente vê que você quer um negócio e muito muito lucrativo né gente é eu vou ligar para vocês um falar rapidamente para vocês do

tipo de Alteração por exemplo para doença de gaucher doença de ela é uma doença de depósito né que que acontece indivíduos com doença de bruxelles eles têm uma alteração cromossômica mais precisamente no cromossomo 1 no Gene de uma enzima que se chama grupo celebridades essa glucocerebrosidase ela não é produzida ou é produzida de forma anômala E por que que as enzimas é importante o clima ela quebra os grupos cerebrosídeos só produzir os lados Lisossomo tipo de lipídio que é produzido lado eles alguns meses os sonhos se essa gordura ela não é privada adequadamente ela passa

a se acumular nas você tá nesses indivíduos ele tem acúmulos dessas células de desse desses dessas gorduras eles têm acumula dessas duas obras na medula óssea é na nos ossos um demais no fígado no baço e é alguns tipos até no sistema nervoso central eles têm subtipos da doença é alguns indivíduos têm pouquíssimo tempo De vida mesmo tendo terapia mesmo com a terapia e muitos tem uma sobrevida ótimo com o uso da terapia enzimática aí eles fazem uso da medicação por exemplo é a cada 15 dias ele toma a injeção injeção desculpa uma medicação que

você Divino Soro Oi e ele faz essa terapia de reposição enzimática a cada duas vezes por por mês de 15 em 15 dias então vem o frasco gente com a proteína recombinante lá e utilizada pontinha é para ela para poder Ser utilizado aprendi você só fazem reconstrução dela com água Ultra pura E aí você já utiliza no paciente gente ir de uma sobrevida absurda para os pacientes combo Gente esse é só um exemplo a medicação se chama é produzida pelo laboratório chamado de ensaio Se não me engano medicação medicação se chama e aí mudou de

nome algumas vezes eu acho que é ser design ser usada não tem muita certeza é algo assim bom então o que a Gente vê por exemplo como que é produzido em grande escala essas Esses medicamentos não fala biofármacos bom Como você produz então em alta escala primeira coisa que se faz ao desenvolvimento da linhagem que você quer para Que ela possa expressar proteína que você quer proteína recombinante então não vou entrar em detalhe nesse processo mas eu chamar de transfecção que você pega o gene de interesse o gênio que por exemplo o gene Para grupo

celebridades que aquela ensina que tá faltando no consciente aí o que que você faz existe todo um protocolo para você é transfectar células Então esse esse Genoma este novo não desculpa esse Gene vai ser incluído no cromossomo né no material genético da célula da célula eucariótica você depois seleciona todos os clones celulares que tem um gene específico que você quer é porque só quero aquelas aquelas células que vão expressar os genes que Pegaram Gene vamos dizer assim tá que tem o gene que eu tentei incluir por exemplo de da Globo será velocidades uma vez que

eu consigo me isolar apenas as células que eu quero também para cálculos adequados eu passo a produzir aquela proteína em grande quantidade né então eu preciso desenvolver o meio de cultivo determinar Qual é o tipo de biorreator mais utilizado para que o produzem grande quantidade então eu vou desenvolver o processo aí eu começo a Produção do processo na escala vejo Qual é o processo de purificação é um processo de purificação que tem que ter ao rendimento que se for muitas etapas e nessas etapas ficou perdendo o material não vale a pena oposto isso gente é

caro e leva tempo observa aqui em média 12 meses desde o desenvolvimento da linhagem até a produção daquele produto que a gente tem que lembrar que aquele produto e passar por vários testes clínicos A ser dispostos né para a população e é aqui tá biografia gente é do que utilizei para aula eu espero que vocês possam entender direitinho eu tô disponível para qualquer dúvida Essa foi a nossa última aula do módulo dela disciplina de biologia celular e molecular e eu espero que todos tenham uma ótima semana estudem bastante até mais