Extração de ácidos nucleicos

o olá tudo bem com vocês protetor essa uma pandemia qual estamos vivendo observamos várias notícias falando de laboratórios que não conseguiam processar as amostras e os testes para detecção da com 2019 com eficácia e velocidade mas qual é o ponto e qual é o passo do nosso teste molecular que mais envolve esforço é justamente a etapa de extração de rna ou seja aqui eu pego a mostra que viram meu paciente amostra clínica coletada e eu preciso daquele mar de proteínas ácidos nucleicos e outras moléculas biológicas separar exclusivamente os assuntos veículos para a realização dos testes

moleculares o google faça esse processo precisamos então partir aqui da nossa situação de eu queria por exemplo uma molécula molécula não mas um vírus não se devia ao completo nessa nossa moto eu acho que e no interior do mesmo aqui eu teria a minha molécula de rna eu preciso fazer algum procedimento que me levem a ter apenas o rna dessas minhas partículas virais isolado em laboratório para que eu possa realizar as técnicas de detecção do mesmo porque nós conseguimos quantidades muito pequenas e precisaremos utilizar métodos moleculares que nos permitam detectados pequenas quantidades como nós fazemos

isso então vou fazer uma analogia para vocês imagine que cada uma dessas partes sociais ou melhor cada um de cada uma das entidades biológicas porque a extração de ácidos nucleicos ela pode ser aplicada para qualquer entidade biológica possível se você já como se fosse um baú meio velho fechado que eu preciso abrir mão de alguma forma primeiro passo então a primeira necessidade depois eu encontrar este baú se trazê-lo para perto de mim é justamente realizar a abertura olha o abra esse baú qual vai ser o meu problema eu vou descobrir que ele estava cheio de

entulho lixo e outras coisas mais que não são do meu interesse sendo que o meu objetivo específico é encontrar basicamente duas moedas de ouro aqui dentro nós temos molhar uma delas está aqui e a outra está a rodar está aqui e a outra está aqui tirar essas duas moléculas primeiro encontrar aqui tirar essas duas moléculas do meio de todo o lixo seria o nosso objetivo final é basicamente essa ideia do processo de extração de rna ou dna são de ácido nucleico significa feira e abrir nossa célula no meio do mar de proteínas e outros músculos

retirar os o que nos interessa assim nós temos alguns passos necessários para realização de uma estação de assuntos primeiro deles já obviamente a obtenção desta amostra nós teremos métodos e estratégias específicas para cada tipo de fonte de material biológico segundo passo vai ser justamente se preparar essa mostra para que possa ser realizado o processo molecular específico não necessariamente amostra da forma que ela é coletada já está apta a passar pelo processo de extração a terceira etapa vai ser justamente charlize o abertura do nosso bom quando eu vou pegar a minha mostra biológica e eu preciso

romper as minhas células ou romper as minhas partículas virais para acessar o ácido nucleico que está ali dentro a quarta etapa vai ser já que o rompe essa célula isso usa essas minhas proteínas ácidos nucleicos vídeos de outros componentes eu preciso separar todos eles descartaram que nós no endereço a única e exclusivamente com as minhas moléculas ao eu vou ter essas moléculas ao volume muito grande e eu precisaria de alguma forma concentrar as mesmas em volume muito pequeno para que eu tenho mais sensibilidade nos métodos de detecção e com essa na minha amostra biológica então

tecnicamente qualquer fragmento de ser vivo pode ser uma amostra biológica desde que ele contenha uma célula ou uma partícula com a simples por exemplo nós começamos nosso sangue aqui as células brancas o mesmo que apresentam elas podem ser uma fonte de material entretanto nós não precisamos diretamente acessar o organismo em si o mesmo não precisamos ter certeza que estamos coletando nós partimos um princípio da genética forense de que todo contato deixa um traço saber isso daqui por hermes blocker a ideia de se fosse encostava determinado material se você interagir com algo você vai modificar você

vai de alguma forma deixar uma marca seja uma marca uma massa química o nosso caso uma marca biológica este material vai testemunhar compra você caso você seja um cremoso ou no caso do nosso vírus contra ele e a gente vai poder estabelecer uma estratégia e fica mais adequada para aquele paciente assim sendo não somente o sangue essa mensagem viva sem em cabelos tecidos urina dentes e até mesmo ossos podem ser fontes passível de extração de assuntos sem utilizados na detecção de material genético nós podemos por exemplo encontrar esses materiais no extramente nossas fontes primárias hoje

nós nossa é uma mancha de suor na camisa no barbeador uma bituca de cigarro não vou né que acabou entrando em contato com o cabelo ou seja esses contatos podem estabelecer uma transferência de material e esse material pode eventualmente ser extraído nós pensarmos então nós podemos dentro de um contexto criminal estranho este material de outros locais onde houve um tipo de interação e essa molécula este material ficou lá tem uma forma rítmica e eu posso também obter uma amostra do ambiente quer dizer com isso o sol e uma pequena quantidade de solo como essa eu

tenho bactérias e outros organismos então eu posso extrair nem a extrair rna do solo não da parte por inorgânica mineral mas a partir biológica que está ali presente outro tipo de amostra ambiental podemos avaliar é justamente a coleta é feita para o coronavírus nós estamos tentando encontrar os organismos que vivem a nossa nasofaringe ou seja eu quero eventualmente também tem que tá material humano ali mas meu objetivo não é detectado descobrir se aquela pessoa realmente é você não é eu quero naquele momento da nasofaringe detectar redes sem fios e mais se o vírus que está

ali presente o coronavírus da nova leva de sake of dois a ideia como se fosse uma ambiente no qual que era extrair material genético coleta então é um pouco desconfortável porque certamente a maior quantidade de ir ao está presente nas células do fundo da nossa nasofaringe então um suave ele deve ser introduzido pela narina pessoa até alcançar o assoalho lá nas varizes por isso não como vai longe né é relativamente desagradar esse suave nada mais é a última arte plástica muito fina que em sua ponta apresenta o material sintético chamado de rayon é como se

fosse um algodão mas esse algodão ele acaba tendo uma capacidade de absorção diferenciada e não interfere nos testes moleculares realização essa massa então ela pode ser conectada com o atrito desse sobre lá no fundo da sua na frente e o que podemos perceber não é uma exclusividade dos seres humanos nós podemos fazer coletas de jipe também animais animais que eventualmente são acometidos também ponto determinado os tipos de gripe por exemplo aqui numa galinha nós estamos realizando um suave oropharyngeal pode na enfiada na área e normal mas enfiado na o bico ali e vai fazer uma

cor epa de material para detecção de algum tipo de conta ameaça eu já obtido minha nossa eu preciso preparar mesmo imaginar que em várias situações a nossa mostra é um conjunto de células como está aqui um conjunto de material biológico que ele está relativamente compactado que essas células estão funções ali que as mantêm unidas e não é somente acessíveis para o nosso método de extração nós precisamos fazer então algum tipo de preparo que vai facilitar e aumentar a qualidade do nosso procedimento sua casa tentar realizar uma análise química o povo passo aqui com masinha células

dessa eu nunca só pensa superfície ao redor aqui para poder interagir quimicamente em realizar os procedimentos ou seja eu vou ter uma baixa eficiência eu preciso preparar a minha mostra de alguma forma para que ela se individualiza e ao está individualizada eu consigo então atuar quimicamente de maneira mais eficiente em cada uma dessas avós para tanto eu preciso pegar a minha nossa coletado aqui está aqui e prepará-la de alguma forma para obter um resultado mais satisfatório na nossa essa é uma das maneiras de fazer isso e separar fisicamente o nosso material então aqui nós temos

um cadinho seja como se fosse um local para poder mas será ou fizeram um estilo nitrogênio líquido para deixar uma mostra de tecido vegetal esse tecido então ele é adicionado aqui com um pouco de nitrogênio milho para congelar a amostra e movimentos de maceração respectivos são realizados para literalmente um o largo grosseiramente esse nosso material estando ele quebrado nós podemos realizar os procedimentos citação de maneira mais eficiente porque agora eu tenho um pó como vocês percebem aqui tá indo e não mais uma mostra inteira que eu por exemplo um tecido foliar que era a amostra

hoje em original aqui avaliar casa não tive de um procedimento de congelamento e maceração eu posso por exemplo fazer mais deslocação com agitação a imagine que eu tenho aqui um tubinho fechado onde eu tenho a minha mostra eu posso também ter dentro desse tubo alguns beijos metálicos ou de algum material que você mais resistente com auxílio de um equipamento como por exemplo isso aqui embaixo designado normalmente the vortex que é um mais ditador mecânico eu posso chacoalhar com bastante a cinco este meu tubo e fazer com que pequenos materiais aqui vou simpatizar contra a nossa

nossa eu acho que acabar separando é um canal água ao que é feito na maceração conjunto de amigos mas maneira mais prática eventualmente até mais eficiente se nós pensarmos na nossa amostra coletada para um teste de coronavírus que acontece aqui nós temos um suave nasopharyngeal no qual nós vamos ter células humanas nós vamos ter secreções que eventualmente podem atrapalhar esse nosso processo e mais que isso nós temos aqui na ponta aquele rayon que eu comentei eu não preciso do raio é preciso me livrar disso então uma primeira preparo de amostra que pode ser realizado que

é de certa forma bem simples é simplesmente introduzir esse nosso suave dentro de uma solução de transporte adequado que vai manter a viabilidade do vírus ou seja uma solução na qual controle ph controle sai para que o molaridade fica adequada e eu vou simplesmente realizar uma torção do meu suave ali dentro para que a nossa nossa nossa se dispersa nem a solução e passa então a ser processada no laboratório e tendo sido mentira nossa mostra e já preparada para o processo de extração eu preciso desse análise você já abertura do meu processo biológico se eu

preciso abrir essa minha identidade como eu posso fazer isso posso utilizar uma estratégia meramente física como por exemplo vamos realizador do tipo de aos esses homogêneo utilizadores eles são na verdade fico dois tubos de vidro e sim acham dentro do outro mas com um espaço muito muito muito diminuto entre as paredes o que acontece aqui eu tenho uma situação como essa onde a minha mostra biológico estarei aqui no fundo o espaço na parede ele é muito que tinha lilian tá muito justo e ao realizar uma pessoa né tendência achatar a minha mostra biológico de uma

maneira muito intensa esse achatamento essa pressão acaba levando ao cisalhamento na zona e que vai conter ou seja é começou arrebentasse na força bruta o material biológico está sendo avaliado outra possibilidade oi marlise química ou seja eu vou utilizar vamos procedimento químico biológico para que este meu material acaba acaba em cima do aberto ou seja minha célula passe pelo processo denise exponha os ácidos nucleicos que estão dentro dela uma das maneiras e utilizando um processo enzimático posso utilizar proteinase k posso utilizar algum tipo de enzima algum tipo de protease e se eu tiver trabalhando com

material vegetal algum tipo eventualmente de celulase outra molécula outra em cima catalítica que venha a auxiliar o processo de cultura da semente da de biópsia ou então eu posso utilizar um outro processo mediado por detergentes lembrando que eu posso inclusive combinar essas duas estratégias detergens isoladamente eles vão dissolver membranas biológicas e esse processo de dissolução de uma delas justamente pode auxiliar na cultura e na exposição do material deixa eu pegar e aí bom e dar uma olhada mesmo se nós formos olhar o componente ativo aqui eu tenho linear alquil benzeno sulfonato molécula como essa que

está aqui o nosso rabo essa molécula ela vai apresentar uma porção a pula e longa e uma porção pular essa força tripolar então ela vai que interage muito bem com a água no meio aquoso ea porção apolar pode interagir com moléculas como por exemplo os nossos fotos de pedir lembrando ela vai interagir com a parte lipídica dele e vai auxiliar esse processo de tintura e aventura molecular normalmente nós não utilizamos esse tipo de detergente para fazer análise muito parecido com ele como oco dodecil sulfato de sódio percebo que ele é uma cadeia linear nosso tudo

se o vapor de sódio ele não tem essa entrada aqui no rio da mesma no caso do de um hs mas ele é a mesma lógica eu tenho uma porção longa aqui apolar como vocês podem perceber que ela vai terminar aqui nesse ch3 e aqui nessa última posição eu tenho a minha cabeça quieto lá onde eu tenho o sódio aqui em teresina tem o lado iônico do meu detergente e que esta posição aquela interage muito bem com água e esta posição aqui então a gente muito bem com a porção lipídica celular o que esses nossos

detergentes fazem então pensando aqui numa simbolização um pouquinho mais esquemático do mesmo com a minha cabeça hidrofílica aqui em cima é a minha cauda hidrofóbica aqui embaixo eles podem interagir para gente dar de biológicas seja por exemplo com proteínas que apresentam um envoltório levemente grow forma minha cauda hidrofóbica que ela pode interagir com a minha proteína isolada mesmo não sendo uma planta que tava dentro da membrana eu posso extraído tá melhorando então eu posso pegar a membrana propriamente dita e com a entrada desses e começar a dissolver a mesma forma de micelas menores o formando

outros tipos de organizações lembrares de organizadas de acabem por emitir liberar os ácidos nucleicos estavam dentro daquela nossa céu e última instância eu posso combinar processos de química distintas inclusive com processo deles e física só posso adicionar cima que vai realizar uma catálise e quebrar uma molécula biológica eu posso adicionar inteligente que vai de alguma forma atuar solubilizando proteínas ou então solubilizando o mesmo gramas e de alguma forma auxiliando nesse processo de lisa e cultura naquela célula também posso por via das dúvidas utilizar um processo físico para quebrar esse material justamente depender da dificuldade que

é usar a amostra biológica que está sendo avaliada isso é uma mostra mais simples de uma estrutura proteica e lipídica menos complexa com vírus eu não preciso usar um e estratégicos para certeza tá valendo pin ou com o microrganismo que a gente na parede celular por exemplo ou com uma planta com células vegetais eu preciso usar mais estratégias para conseguir fazer uma análise eficiente estão então com o nosso material já obtido amostra já preparado ou seja acionada de alguma forma análise realizada eu tenho basicamente uma solução na qual dna está presente o rna está presente

proteínas também estão presentes pedidos em geral são presentes além de outros componentes celulares o problema é que eles não estão assim organizadinho cê distribuídos no meu microtubo eles estão todos reunidos em uma única solução eu preciso agor de alguma forma separar aqui nesse contexto apenas os ácidos nucleicos seja ele deem ao rh de alguma forma eu preciso utilizar processos físico-químicos que teria então essa separação ba e nós temos três processos distintos que podem nos auxiliar na separação das nossas moléculas de ácidos nucleicos dos demais constituintes celulares salting-out o segundo ele seria uma separação orgânica ea

terceira interação consiga ser cada um deles de madeira um pouquinho mais detalhado para compreendermos o processo de sorte em áudio eu preciso avaliar esse gráfico aqui com vocês nós seremos no eixo y a solubilidade das proteínas dentro de uma solução e aqui no eixo x nós temos uma quantidade crescente de sol ou seja quanto mais para lá mas só eu tenho na minha mostra quanto mais para cima mas sou horrível as minhas proteínas então o perfil que nós vamos obter mas seguirão mais ou menos essa ideia aqui ou seja um pouco sal tem um baixa

solubilidade com muito sal eu tenho baixa solubilidade e um ponto intermediário nos dá uma solubilidade ótima a sua viradinha e olha como isso acontece aqui nesse nosso ponto um gritinho pouco sal presente na nossa eu ainda não consigo fazer com que as minhas proteínas deixe de interagir entre si e acaba interagindo com esse sal para que seja um solvatadas pela água que está ali ao redor ou seja a difícil de uma certa dificuldade de interagir essa nossa proteína com a água e portanto ela não fica tão soro essa camada de solvatação ou seja essa água

que está ali compreendendo o redor da proteína não consegue intervir de maneira torta eficiente então conforme eu vou adicionar o sal eu passo um processo chamado salte em vinho porque porque a minha proteína está entrando em na minha mostra na minha solução ali presente eu vou crescendo a quantidade de sal comprado aqui pela linha vermelha eu vou aumentando a solubilidade da minha proteína até eu chegar aqui então eu faltou esse meu quarto é o ponto ideal onde eu tenho moléculas de proteína as quais aquelas moléculas de só presente representada pelas minhas bolinhas pretas se mostrem

no máximo da sua solubilidade por acaso continuaram aumentando continuar adicionando sal nas a minha solução qual vai ser a consequência vai chegar um determinado momento em que essas moléculas de salas vão começar a disputar a nossa camada de solvatação da proteína ou seja eu tenho tantos óleo presente que ele rouba a água da proteína e a proteína não consegue mais ter que entra giro ela acaba voltando a interagir consigo mesma e tende a sair da nossa solução ou seja passar pelo processo de sal fim aos ela sai dessa solução ao sair dela nós podemos utilizar

algum processo físico para separar porque ela deixou de ficar surdo e para realização desse processo nós podemos utilizar por dentro do acetato de potássio em grande quantidade de todos ou salte em alta saída de solução com grande eficiência de moléculas proteínas outra possibilidade é utilizar algum outro tipo de sal que sejam a gente calcular fico muito forte como por exemplo o que o cianato de guanidina o que é o agente que é o outro é um sal que têm uma altíssima capacidade em desfazer pontes de hidrogênio você tava de potássio que eu mencionei agora a

pouco ele é muito eficiente também não tanto quanto tiocianato de guanidina faz ele consegue de maneira bem eficiente remover essas proteínas a diferença é que o tiocianato de guanidina ele tem uma propriedade muito grande de desnaturar complexos proteicos ou seja se eu tenho uma asinhas e mais especialmente uma hérnia em asa ou seja enzimas capazes de degradar respectivamente dna e rna a presença do tio cenário de guanidina vai inibir as meu é isso que muitos kit de extração especificamente para rn a eles apresentam os seus primeiros são bons uma grande quantidade de tiocianato de guanidina

porque esses tiocianato não só auxiliar desnaturar as proteínas que estão ali no envoltório seja no nosso riso ou na membrana celular de nossas células mas também inativar as enzimas que poderiam picotar todo o nosso material genético o processo de salting-out então que começa ele com a nossa mostra já preparado ela vai passar por um processo de liziê adição desses ao tópico que vai tentar fazer as pontes de hidrogênio seringues feitas as ligações de hidrogênio as redes feitas eu tenho o que uma grande quantidade de material celular fragmentava e os nossos ácidos nucleicos com essa grande

quantidade de sal aqui que foi adicionada as proteínas e outros elementos celulares tendem a sair de solubilidade sair dessa nossa solução eu posso realizar um passo de centrifugação de e em altas velocidades eu vou acumular aqui no fundo do nosso tudo que nós vamos chamar de pet o nosso de brilho nossos esquecer os celulares incluindo proteínas e outras moléculas que precipitaram e na solução a tere alguns remanescentes de proteínas que não foram adequadamente prospectados e continuaram ele contaminando mas eu tenho que um enriquecimento para mim amostra de ácido nucleico além da nossa separação por salting-out

nós podemos fazer uma separação orgânica como funciona isso usamos utilizaram a gente eu dele como por exemplo o fenol fenol e uma gente te extremamente desnaturante ou seja ele vai pegar uma proteína vai desfazer a sua estrutura terciária wagner avisar só porque não vai bagunçar com as interações quinta e intermoleculares ou seja dentro da própria que eu tenho da proteína com outras proteínas ele é também altamente hidrofóbica ou seja ele não gosta de interagir com moléculas de água qual que é a com além disso interage muito bem com dicas e com proteínas que se dão

muito bem com lipídios que nós vamos fazer então nós temos novamente aqui a nossa célula nossa molécula misawa nós temos aqui ácidos nucleicos presentes dna e rna por exemplo do som altamente polares nós temos aqui a nossa proteína representada usualmente tende a ser resíduos apolares no seu interior e resíduos polares na sua região externa se ela for uma proteína solúvel citoplasmáticas sempre foi uma proteína de membrana ela vai ter ali na região de interação caminhando os seus resíduos apolares ou seja os seus resíduos hidrofóbicos acho que não gostam de interagir com água a partir dessa

nossa solução aqui que passou pelo processo de mim eu vou adicionar uma um composto por exemplo este composto vai de alguma forma interagir de luz natural essas nossas proteínas quebrando-as suas interações ou seja o lado azul hidrofílico para fora agora eu tenho lado verde hidrofóbico para fora ele acaba interagindo muito bem com esse nosso final com essa nossa monofone delicadinho com algum momento de agir passam eu intensifique esse processo é eu consigo desnaturar separar agora o final da minha porção aquosa que estava originalmente no youtube e ter o aço no clipe do lado se nós

olharmos aqui para carinha real da nossa extração com p novas teremos o que aqui embaixo depois de um processo de centrifugação a nossa amostra orgânica na qual ele tem uma grande quantidade de proteínas eu tenho aqui uma religião de interface como vocês podem perceber que ela está levemente esbranquiçada você aqui em cima tem uma porção aquosa você é isso essa fase superior é uma fase hidrofílica e pô-la na qual vão ter os meus ácidos nucleicos e algumas proteínas que sejam altamente polares de acabaram não ficando nas outras fases a de baixo eu voltei do que

uma fase hidrofóbica e a pro lado onde o próprio final vai ficar e a maior parte das proteínas que interajam com regiões do forma que vocês que tenham aminoácidos se não gostem de água essas proteínas vão ficar todas concentradas aqui junto com vídeos e outros constituintes celulares nessa fase aqui do meio normalmente nós vamos ter alguns componentes que seja uma fração tanto polar conto apolar eventualmente interagir um pouco no final um pouco essa nossa fase aquosa eles ficariam ali no meio que seria uma posição que os agradaria só o nosso interesse todo seria nessa fase

superior nessa nossa fase hidrofílica que vai conter os nossos ácidos nucleicos e você a subtração então seria mais ou menos milagre tem aqui o nosso a molécula nosso nossa molécula biológica ele na sua vida nossa partícula viral por exemplo ela seria um passarinho então para um processo deslize consecutivo sequente é um solvente orgânico essa adição levaria uma fragmentação nosso na sessão assim entidade biológica e essa fragmentação um a presença do solvente orgânico levaria a uma desnaturação das proteínas que acabaria interagindo pessoalmente e após um processo de centrifugação nós teremos duas frases formadas aqui embaixo é

safado hidrofóbica e aqui em cima essa fase hidrofílica aqui em cima nós seremos a nossa moléculas de interesse de aço clico a qual deveria ser removidas cuidadosamente e transferida para um novo tubo onde o processo de extração de purificação console no terceiro passo separação de assis empregos é o que utiliza química muitas vezes essa cínica ela vieram assinada em pequenas colunas como essa então tem um microtúbulo e dentro desse microtubo eu tenho encaixada uma pequena com linha que apresenta nessa posição do funil zinho aqui formado um pouco a prisão do assassino que nós podemos fazer

a interagir com um ganhar usar uma olhada um pouquinho mais de perto aqui nessa nossa se liga nessa nossa região aqui entender o que está acontecendo eu pensava mas fica com pouco de água ali quando eu faço uma solução aquosa na mesma eu vou ter aqui os nossos átomos de silício interagindo aqui tem um oxigênio uma ligação covalente esse oxigênio com uma carga levemente negativa poderia interagir com moléculas de água em geral quando eu confronto essa minha se fica com uma solução que contenha por exemplo ácidos nucleicos na presença de um sal caotropico que esteja

ali o bando já tenha precipitar as proteínas mas esteja interagindo bastante com a água e deixando e sim o ácido nucleico - acesso ao mesmo ele pode vir aqui e através dos seus fosfatos carregados negativamente interajo dando um fora o outro tipo de comprar impositivo que esteja presente na solução e acabaram se tornando uma ponte salina aqui com a nossa molécula da sílica presente que acontece esse óxido desse dica que interage com o nosso dna na forma salina e ele fica fixo aqui literalmente preso nessa nossa seguir nós temos o dna ou rna ao nosso

ácido nucleico que representado pelo bem a polícia perfeita e no cássia desoxirribose também como açúcar nós temos um friozinho onde eu posso realizar alguns passos de lavagem e remover quaisquer outros constituintes sabia que estejam contaminando e não tenho interagido com essa nossa molécula disse é a vantagem das indica que não necessariamente eu preciso trabalhar com um funil como aquele eu posso utilizar lá outra estratégia mas estratégia de colocar essas fica um pequenas bolinhas que sejam ferromagnéticos e eu consigo trabalhar com limão aprendeu mesmo vamos utilizar como exemplo aqui essa nossa barrinha magnética e esse nosso

turminha aqui nesse tubinho nós temos no fundo um pouquinho de limalha de ferro basicamente que eu fiz foi pegar bombril pegar uma palha de aço e queimar mesmo que eu vou fazer aqui agora é dar uma leve agitadinha aqui nós temos esse animal ele assim de festa pequeno pode ferro mais ou menos espalhados nessa minha solução é por acaso que fosse uma solução de cínica presa nesse material ferromagnético quando eu utilizando o meu ímã fizesse isso eu acabaria aproximando todo este ferro e eu poderia simplesmente e tirar a solução líquida que sabia como vocês podem

perceber eu fiz essa remoção que ela ficou preso todo aqui em cima encontre o líquido desceu pela força da gravidade posso então fazer lavar a gente começa e consequentemente utilizando o imã eu não preciso mais a minha centrífuga porque eu consigo manipular as minhas moléculas de madeira ferro magnético como se dá esse procedimento então eu vou começar aqui com a minha mistura complexa da célula alisado onde eu tenho proteínas e os molecos mas tem o meu dna ou meu r amo eu acho um público ali presente eu vou adicionar essas vídeo magnéticas que contenham circa

e as mesmas vão interagir com a nossa molécula de ácido nucleico e ao aproximar a ju lima e cima vai prender as medidas aqui no fundo all star empresas eu posso realizar passo de lavagem os mesmos não posso remover o sobrenadante tirar outras moléculas que não seja de mim a pesquisa soluções do sequência depois o simplesmente consigo aqui na água por exemplo deixar esse milzinha liberasse na cínica interagir direto com a água pela baixa concentração de sal então eu posso evitar passos de centrifugação utilizando esse método assim sendo fica muito mais fácil para automatizar ainda

mais se eu pensar aqui eu posso utilizar um eletroímã ou seja a placa fica parada minha mostra fica parado meu micro não fica parado e eu tive o meu irmão desativo meu irmão quando eu preciso os passos que eu preciso e eu consigo consequentemente automatizar o processo e aumentar a escala de extração por não precisar dos passos de centrifugação se eu tivesse ainda com a minha mostra com uma grande quantidade de líquido por exemplo obtida lá da minha da minha purificação seja processo orgânico ou salte náutico eu precisaria concentrar está me amostra de ácido nucleico

o meu último passo do processo de purificação onde eu coloco um volume menor grande quantidade daquele material ali concentrar tão chegando aqui você já caminha fração superior da minha o processo de purificação orgânica ou então todo meu volume aqui em cima do meu perde no processo de salting-out eu poderia pegar essa solução adicionar um pouco de sal se fosse necessário se eu ainda não tivesse de falar dos ao nesses passos anteriores e álcool seja ele tá bom ou isopropanol um outro tipo de álcool após fazer essa lição um processo de educação física eu conseguiria precipitar

essas minhas moléculas de ácido nucleico com precipitar no significa literalmente ir para baixo mas sem sairde solução eu simplesmente faço um processo de centrifugação e esse processo de centrifugação daqui original pele ti mas agora este perde que ele é composto de ácidos nucleicos ou seja esse sobrenadante aqui não é essa e apenas o material que está aqui não perde é o curso justamente buscando posso descartar o sobrenadante que vai ter sal e etanol eu vou ter aqui então pede final produzido apenas com os ácidos nucleicos que são do meu interesse mas como que cetanol ele

atua fazendo com que o ácido nucleico precipite na presença de um sal o etanol ou isopropanol o álcool que estou utilizando ele vai reduzir a constante dielétrica dessa minha solução que quer dizer isso a constante dielétrica um bom isolante o material é como bloco não isola também essa interação ali entre as minhas moléculas com a água isola bem e acaba permitindo que não mais a molécula de água interagem diretamente com sódio como acontecer na solução aquosa original mas a presença do álcool essa molécula de sódio vai acabar conseguindo interagir com os fatos dna lado aqui

primeiro empate a tecla de água vai ter a gente o etanol uma molécula altamente solúvel em água opcional também altamente solúvel em água e queridos essa nossa constante dielétrica e permite com que essa interação que elas mais falha o que ela é mais fraca ou corra com eficiência ao realizar isso então tem agora mal no fosfato do miudinha obrigado por exemplo sal aí presente seja ele o sódio e você deixa aquela molécula precipitada ou seja não tem mais água de solvatação e com um passo de centrifugação eu consigo falar esse meu pele de aço não

sei se vocês já tentaram durante a classificação eu sempre falei de extração de ácidos nucleicos e não de dna ou dr especificamente porque o que o processo em si ele acaba sendo umbigo ele extrai tanto bem a culpa é ri happy que estava baseado em propriedades que são comuns as duas moléculas juntamente com essas moléculas são muito parecidas vamos lembrar url e vai a farinha da sua ribose e desoxirribose aqui a presença de oxigênio lá no carbono de número dois como a diferença é muito pequena pensando estruturalmente as novamente da arrogância de timina por uracila

na base nitrogenada nós temos que ter algum outro tipo de processo que consiga se diferenciar essas duas molas começa a tag isso é utilizar aqui uma extração ácida com tiocianato de guanidina fenol e clorofórmio essa solução de três concorrentes às vezes é chamada de trizol nome comercial na mesmo só nós vamos partir novamente aqui na nossa situação onde eu tenho dna e rna em solução e essa nossa solução aqui contém ainda as proteínas que estão contaminando a preparação eu vou adicionar uma solução com o nosso canal com esses nossos compostos aí caso eu tenha uma

solução normal como assim que a internet a pensa no final eu vou ter uma separação tal após a centrifugação e aqui na minha face inferior e na fase superior outreaching a rna foi o cenário anteriormente observado agora tá seu faça esse processo em condições ácidas e na presença de tiocianato de guanidina o que vai acontecer aqui na fase inferior eu terei proteína na fase superior outro r a e o dna vai agora interagir na fase intermediária porque ele vai estar parcialmente ali e deu forma interagindo nessa força intermediária eu poderia remover apenas essa fase superior

que eu remover a fase superior e o com teria um aquecimento para a linha vocês já devem imaginar aqui pensando no laboratório que se tubinho vai ser um tamanho bem de luto não é tão simples você remover apenas essa fase superior você eventualmente ainda acaba contaminando a nossa final com linha mas a diferença que você tem um cresce grande quantidade o dr ali na solução e você começa a ter uma infração que prioriza o rna em relação ao dna gusttavo na aula de hoje se vocês quiserem acompanhar em voltar em algum trecho específico da mesma

é só vocês descerem aqui na descrição do vídeo e olharem na minutagem do mesmo ou então andar em pelos capítulos aqui viu tu me passando o mouse em cima da nossa barrinha de progresso do vídeo bons estudos e até a próxima