é bom x vamos lá mais uma aula hoje vamos falar de algumas técnicas e imunologia essas técnicas então elas podem ser usados tanto para pesquisa científica quanto para diagnóstico e antes de começar com as técnicas no falar um pouco sobre reação de precipitação seria a precipitação o precipitado que é formado a partir dessa reação em química precipitado quando você tem uma substância é formada pela reação química e ela é insolúvel ou seja os pitado é um sólido que se forma e se deposita no meio e uma solução líquida a e na imunologia tecnológicos nós podemos
podemos fazer um precipitado também com a interação do anticorpo e antígeno vejo por exemplo a presença do precipitado com os antígenos e os anticorpos conhecem azuis fazendo essa ligação e essa interação escorpião antígeno forma a rede que pode se envolver um preço de tábua precipitado que é visível o áudio no bom a quantidade de precipitado que vai ser formado depende de alguns fatores são nós temos os fatores físicos e fatores químicos com ph a temperatura da relação se pode ter mais ou menos precipitado com relação à temperatura e ph os fatores imunológicos do tipo de
antígeno títulos de corpo mais principalmente as concentrações relativas do antígeno e do anticorpo se eles são equivalentes ou não quando eles são equivalentes e eles formam a zona de equivalência vocês vão entender melhor essas outras equivalência vamos entender então o que que a zona de equivalência essa zonas de equivalência quando ela é atingida a aplicação então ela é acima entender essa figura então nesse slide aqui eu tenho a presença de um excesso de anticorpo e uma quantidade menor de antígeno então eu tô tenham uma quantidade maior de anticorpo e menos antígeno eu não vejo aqui
nos tubinhos mal classificação muito grande situação ela é baixa no outro extremo e aqui quando eu tenho ao contrário uma quantidade maior de antígeno e a quantidade menor de anticorpo a minha a minha precipitação ela também ela é baixa que não tem equivalente a quantidade desses dois elementos no primeiro caso eu tenho um excesso gente corpo e no segundo caso eu tenho um excesso de antígeno essas duas reações eu não tenho a precipitação a adequada no entanto tenho a zona de equivalência sendo informado ou seja eu tenho equivalente a quantidade de antígenos ela é equivalente
a quantidade de anticorpo então eu vejo que acontece a explicação que ela é máxima no tubo apresentação então ela foi máximo e dentre as precipitações dalton demonologia e de rose muro precipitações a semana precipitações eu tenho de três tipos diferentes a imunodifusão simples a imunodifusão radial dupla ea imunodifusão radial simples de prever um a uma como é que isso funciona o que não lembro difusão simples também conhecida como o método de hoje vim com o cara que se envolveu desenvolvido esse 1946 ser feito muito saio nesse tubo de ensaio você coloca um gel de água
ou agarose agar ou agarose inicialmente ele é um pó e você mistura ele numa no tampão geralmente e de sofre como se fosse uma gelatina já fizeram gelatina se pega o pó da gelatina coloque em água fervendo inicialmente isso é líquido quando você deixa lá na geladeira ela polimeriza ou ela jenny fica e virar a gelatina que vocês conhecem todo mundo acho que conhece gelatina o gel de agarose é o mesmo princípio não pó você mistura alguma solução então geralmente um tampão e quando isso esfria quando você coloca para gente ficar você tem a formação
desse gel e esse jovem possui poros e como é que funciona o tempo ensaio e nesse tubo de ensaio sai nessa faixa azul mais clara é o meu gel e nesse gel quando ele tava na sua fase líquida eu adicionei o anticorpo cuja o qual eu quero achar o antígeno aquela mostra então que que tem nesse gel esse gel ele é um gel de agarose e impregnado nele esse anticorpo é que foi colocado nesse meio aí aqui em cima eu coloco a minha mostra e a minha mostra-se famosa positiva vai ter o meu notícia e
aí essa mostra ela começa a se difundir para dentro já tá lá então se difundindo o oi e aí conforme esse antígeno da amostra do casal nossa positivo vai se encontrando com os anticorpos vai ligando os anticorpos os anticorpos vão se ligando aos antígenos presentes na nossa e quando eu tenho quantidade equivalente de antígenos e anticorpos e forma então a minha zonas equivalência e aí eu consigo observar um precipitado então o teste deu positivo quando eu aperto aparece esse muro precipitado que essa faixa que aparece no meio do céu e tenho aqui no próximo slide
é muito boa grau né mostrando exatamente isso que é um precipitado uma foto real de teste foi feito assim uma coisa que para lembrar vocês pessoal é que esses testes muitos deles com as tecnologias novas e eles vão ter estão sendo deixados de lado para para serem feitos testes moleculares no entanto como o nosso brasil ele é muito grande e disse laboratórios pequenos interiorzão do brasil aí que ainda usam esses testes são os mais baratos de serem feitos do que por exemplo faz mal no teste de pcr é muito mais rápido às vezes muito mais
digno aquele teste mas muitas vezes não têm recursos para fazer uma pcr aquele aquela cidade do interior lá do do acre por exemplo sei lá ah beleza então é só uma certa de uma certa maneira é interessante que vocês conheçam esses testes voltando então eu tenho um exemplo de modo precipitado né sendo difusão simples que também poste bate meta de coaching e vamos falar agora ainda de uma outra irmã pesquisar são que a e morro de fusão radial dupla ou método de auster clone esse mestre foi desenvolvido 947 mesma coisa que vou trabalhar também um
gel esse gel de agarose coloco ele uma placa de petri e espero a gelificação que a polinização gel aqui mesmo esquema da gelatina esperam a gelatina fica duro para comer no eu espero gel ficar durinho também para poder fazer a reação e nesse gel diferente do anterior que a gente colocou o anticorpo dentro do gel nesse jelly tá limpo e não tem acho corpo porém eu faço alguns orifícios no gel então aqui se orifício central que a gente observa eu coloco o anticorpo cujo qual que eu procurando o antígeno nas amostras as amostras e lateralmente
eu faço outros orifícios outros furinhos no céu onde eu vou colocar as minhas eu mostro se trata aqui e quando a gente acompanha eu queria que chama de imunodifusão radial dupla porque eu tenho uma difusão tanto do anticorpo ele vai se espalhar o gel quanto das amostras também não se espalhar o gel vocês concordam quando essas duas soluções que estão em buraquinhos diferentes orifícios diferentes ele se difundem pelo gel vai chegar um aumento que eles vão se encontrar pois tem poderes se encontram e existe a equivalência de arte corpo e de antígeno o forma esses
arcos de precipitação precipitação precipitação as minhas amostras que são positivas as amostras que são negativas como essa aqui ó vou fazer mais eu não encontro esses arcos de precipitação então chega na zona de equivalência no amostra positivos aparece é de precipitação e seus mas dá para ver o pouco melhora aqui tem um anticorpo que masha e aí se difundiu por todos os lados na do orifício entrando no gel e aqui em cima eu tenho meu antígeno a mesma coisa coloquei a amostra que tem um antígeno positivo e essa nossa se difunde pelo gel e quando
eles encontram as zonas de equivalência equivalência do que a mesma quantidade de antígeno equivalência quantidade dele anticorpo então forma o que aquele abrigo de precipitação beleza e e este na chamada de e vou notificação dupla porque ambos se difunda tanto anticorpo tá seja fugindo no gel como antígeno também está se difundindo a rangel quando eles se encontram nas horas equivalência então forma essa esquina é o resultado positivo e hoje steronio ele segue o diagnóstico da candidíase para paracoccidioidomicose e cisticercose uma alimentação desse método ele demora de 24 a 48 horas a ocorrer a difusão ea
reação se processe e o método anterior fogo médio de odin alimentação dele demora uma semana para acontecer a reação então imagina uma semana serão resultado de um teste bastante coisa é bom e o terceiro é a imunodifusão radial simples ele é parecido com o primeiro teste esse método chamado de mancini farei e foi desenvolvido depois em 1965 né que é feito aqui pega uma placa de petri de vidro faço um gel de agarose e nesse gel e eu coloco uma pessoa eu coloco os anticorpos no chão assim como eu fiz no primeiro teste e espero
aconteceu processo de gelificação de polimerização do gel esse gel da polimerizado eu faço um orifício central de pedra e eu coloco a minha mostra esse essa aqui ó é de inglês do inglês tarde simple sempre o inglês é a mostra não coloca aqui o meu a moça que que vai acontecer mais difusão então amostra se difunde pelo gel e vai encontrando o que os anticorpos que foram colocados no no gel antes dele polimerizar antes dele endurecer que que vai acontecer quando eu tenho a zonas de equivalência aparece então esse aro de precipitação e se a
lu explicação aqui embaixo tenho amostra e não diluída está concentrada e quando eu faço diluições aqui de louis duas vezes de lei quatro vezes 18 vezes quando você dilui e você diminui a quantidade de antígenos presentes naquela nossa consequentemente o halo em torno do orifício vai ficar um pouco mais fino porque você diminui ali o espírito da zona de equivalência beleza o teste de difusão radial simples eu consigo fazer diagnóstico de alguns fungos como o coccidioide ites para coccidioide brasilienses e o histoplasma capsulatum en oi beleza e agora gira algumas reações de aglutinação aqui embaixo
tem alguns exemplos né de micro-organismos que podem ser diagnosticados por essa as reações de aglutinação não tem que são nela dos ela késsia aqui são kids já são os nomes dos kits e outros microrganismos com as novas leishmaniose toxoplasmose candidatos estrangeiros etc e vai fazer continuação eu vou ter a presença do antígeno presença do anticorpo e isso forma um agregado o que é aglutinação transformar esse agregado que se torna visível a olho nu eu vou usar eletrócitos que são as massas bactérias as próprias bactérias os próprios fungos ou protozoários e também partículas de látex nós
somos as bolinhas de borracha de tênis a reação de aglutinação e vou trabalhar numa placa e esta parte aqui parece uma placa de elisa aliás são placas de elisa e placas no parque de aglutinação são muito parecidas são placas de 96 poços essa placa aqui no caso é uma placa de elisa se olhar o fundinho aqui do poço só essa visão lateral do senhor oposto ele acha a tábua para fazer uma reação de aglutinação o poço que ontem eu posso dizer isso que eu sigo pra vocês emoção dele gelado e se fosse um formato de
line ver ou em formato de ovo porquê e o que que a gente vai precisar tempo assim formatos de ver que um teste que a positivo por exemplo então o que que eu tenho aqui a presença do material que vai ser originado que nesse exemplo a questão é márcia o que tá em vez de avanço e corpo onde eu coloco o soro por exemplo de paciência em uma solução com a massa que contém aquele antígeno que eu estou procurando na verdade do procurador ante o corpo coloquei o soro e nesse soro eu vou ter a
presença dos anticorpos e na minha partícula e vou ter é aquilo que eu quero achar onde colocando soro então se eu tenho a presença do anticorpo esse anticorpo vai se ligando essas partículas como a gente percebe aqui na sua imagem vai formando uma rede e essa rede ela não vai para o fundo da placa porque esse fundão me ver então ele já até vai descendo né pela força da gravidade mas como ele vê e dá uma enroscada e não desce completamente então quando você observa a placa você vai ver algo parecido com isso aqui apoio
da placa de cima e quando eu tenho um teste de um teste negativo eu vejo que ausência dos anticorpos aquela moça não tinha de corpo não teve que se ligar nessas partículas que foram colocadas aqui consequentemente essas partículas livres elas vão para o fundo do poço e o possuem vê tá vendo que nós só a gente quebra fundo do poço essas participações do fundo do poço e forma um pequeno botão e hoje particular com borracha lá no fundo e olhando de cima a gente vê mais ou menos essa imagem eu coloquei aqui uma foto de
imagem real acho que usei foi eu que fiz um laboratório aqui desse lado tem um teste aqui aplicativo e forma um pontinho lá no fundo da placa porque como g a força da gravidade essas partículas muito profundo da placa mas como mg e forma esse botãozinho aqui olha de cima e aqui no teste do outro lado né de um teste que é um teste positivo e presença de anticorpo formou essa rede esse aqui esse aglutinado e como mãe ver você você observa isso meio que boiando aqui então aqui roscada e aí ele não vai para
o fundo da placa então aqui eu tenho lado esquerdo acho que negativo negativo e do lado de cá e tem um teste de em relações são elas podem ser divididas em relação direta ou indireta vamos ver como é que funciona administração direta administração indireta é quando eu uso diretamente o próprio microrganismo e os seus pesquisar os seus seus padrões moleculares os próprios microrganismos sem usar por exemplo uma hemácia para fazer uma sensibilização e já volto aí massa geralmente a gente usa na água relação direta ver como que a directora então usar a própria partícula que
apresenta os seus epitopos né naturais é só superfície oi e aí eu coloco o o eu amostro juntamente com essas partículas nessa minha mostra que a amostra de plasma soro se tem a presença do anticorpo ela vai se ligar essas partículas e é que que observo observo a formação daquela rede isso não vai profundo se olhar aqui nessa imagem ó eu tenho da mostram até a mostra três são testes foram feitos a continuação direta usando o próprio microrganismo e aí eu não tive a concentração desses microrganismos no fundo da placa porque imprensa gente coloca formou
aquela rede o aglutinado na verdade isso não foi profundo as outras amostras que a gente percebe aqui nessa figuras famosas que são negativas porque como são os da placa em ver essas partículas esses microrganismos por um profundo da palavra e quando observa a placa de cima observe esses pontinhos vermelhos esse vermelho de causa que seja se copo não formou hoje e consequentemente foi para onde profundo da placa esse por exemplo a presença de infecção bactérias dos vai esse tipo de teste dá para fazer agnósticos neste manga por exemplo você coloca para baixo e gotas de
leite mano coloca o soro do paciente caso o paciente tem a presença de leishmania no seu corpo ele vai ter o que é uma de corpo antes da simone protege coloco promastigota de deste mani junto com soro do paciente ele tendo para fazer esse agrotinado não vai para o fundo do poço a sua estimadas que foram utilizadas e a partir daí eu vejo o ar no final como a gente vê aqui na figura as amostras 1 2 e 3 e aí e como é que funciona então a passiva também chamada de passiva ou indireta eu
vou ter a partícula carregadora que pode ser uma partícula de borrachas lápis ou uma hemácia aí eu faço um processo de sensibilização com o antígeno a exposição atingindo o que eu quiser e na sequência vou ter uma partícula sensibilizada ou seja uma hemácia sensibilizada com partículas toxoplasma por exemplo e aí na sequência coloco a amostra a amostra se famosa positiva eu tenho que a presença do anticorpo quando o anticorpo se junta com essa márcia foi sensibilizada eu voltei então a formação de aglutina aos esses alguns de nossos gente consegue visualizá-los diretamente na placa certo um
instrumento a olho nu mesmo bom então eu tinha nosso assim aí márcia foi sensibilizado com artistas toxoplasma mais um este corpo está presente na nossa no caso a vossa positiva então eu vejo que o processo de aglutinação que aconteceu a nação ea gente vê que as hemácias não foram profundos não consecutivos correu a aglutinação é um outro teste que é feito é chamado de inibição da aglutinação como exemplo eu usei um teste de gravidez não é feito o teste de gravidez geralmente as mulheres grávidas ela assim na sua circulação sanguínea presente de urina também o
hormônio da gravidez que o hcg ou beta-hcg então aqui eu coloco mais chá urina e o anticorpo anti hcg faço formação inicial e na sequência eu adiciono uma partícula com essa parte flor de borracha ou é márcia foi revestido ao sensibilizada com hcg com esse hormônio oi e aí vamos ver como funciona esses testes nos próximos slides então eu fiz slide contendo um exemplo de teste teste positivo e no próximo a gente vai dar um teste negativo então como é que funciona isso elenco bar a urina da mulher que acha que está grávida não com
o anticorpo g-hcg e depois de desse primeiro incubação eu faço incubação uma partícula revestida com o pega cg com hormônio a então teste positivo no teste positivo vou ter uma urina com o hormônio essas bolinhas vermelhas eu coloquei aqui ó e as bolinhas vermelhas são para indicar que é o hormônio hcg aí eu faço inculpação inicial com a urina e o anticorpo uma chega às regiões corpo normal depois de um tempo eu acrescente então a partícula revestida com a cg e como resultado eu não vejo aglutinação por quê porque os anticorpos estão presentes na solução
inicial que eu fiz de urina parte corpo eles foram consumidos pela presença do hormônio na urina daí o amor humano ele é muito pequenininho ele não forma aglutinava daí quando eu coloco a particular é márcia e vestida com o hcg esses anticorpos como ele já foram saturados com a presença do hormônio na urina eu não tenho bom então a aglutinação então não vejo a continuação porque elas hemácias ficaram soltas então elas não se juntaram formando um ângulo de nada bom então eu teste neste caso quando eu não vejo nada acontecer a gente tem que pensar
em ao contrário quando nada acontece o teste é positivo e negativo urina não tem o hcg aqui ó sem hormônio fiz aqui embaixo aí eu coloco na sequência e depois dessa primeira incubação eu coloco a minha parte como resultado e observam o que como eu não tinha o hormônio inicial na urina bom então o meu anticorpo e não foi saturado ele não foi consumido então o anticorpo de continuar livre e quando eu coloco então a minha partícula carregadora conjugada com o melhor sensibilizada com hcg vai ocorrer a aglutinação porque o anticorpo anti hcg não foi
bloqueado negócio inicial é porque não abre o maurinho na urina livres os anticorpos então podem continuar essas partículas então ocorre o processo de aglutinação e essa obstinação era visível a olho nu bom agora um outro teste pessoas o outro teste a reação da fixação do complemento e esse trecho ela se separa diagnóstico de alguns bichinhos na como micoplasma não é leptospirose de chagas infecções por alguns vírus respiratórios como um sonho saab para influenza adenovírus e águas como é que funciona esse teste teste de digitação da compensação do comprimento funciona como não entender dinheiro como funciona
o complemento né sistema complemento ele pode ser ativado pela via clássica é aquele que tem a presença de anticorpo nelas irmão problemas e quando ela se liga mesmo eu venho aqui eu tenho aqui a ser um e aí depois vem s4 s2 toda a sequência de proteínas até chegar nessa 99 eu tenho a formação daquele poro se torna chamado de mar ea complexo ataque membrana conheço você você sabe disso microrganismo ele acaba morrendo então os pesquisadores que se mover essa técnica eles esse princípio da farmácia nesse fórum e para fazer diagnóstico como é que isso
funciona o primeiro eu vou trabalhar com um teste aqui é positivo se o teste é positivo então a minha nossa presença de anticorpo aqui na minha mostra cujo ao eu vou descrição daquela doença é na sequência desse teste você me amostra positiva acrescenta o que né acrescento o antígeno cujo qual eu estou procurando o anticorpo na pela mostra que sua vida e paciente e juntamente eu coloco algumas proteínas do sistema complemento neste nesse nessa relação que que vai acontecer com o teste ele é positivo eu tenho presença seguro globulinas os anticorpos e como eu coloquei
um autismo esses anticorpos e não se ligarem sentido e também tem proteínas do complemento que que vai acontecer as proteínas do complemento vamos ligar a esses anticorpos presentes na minha nossa e vai começar tudo a reação do sistema complemento até chegar no final a formação daquele poro é o mack complexo atacar membrana então eu faço o quê e as proteínas do sistema complemento consumo consumir complemento não tem mais sistema complemento livre nessa solução minha aqui tá tudo meio que consumido pela presença do anticorpo na minha mostra e na sequência do teste ainda não sei se
o teste é positivo ou não mas aqui o teste é positivo colocar o que as minhas hemácias essas hemácias elas são revestidas com anticorpos ou seja são é massa já autorizadas com anticorpos quando eu coloco essas hemácias dentro desse tubo onde já tem proteinas o complemento o que que vai acontecer com uma hemácia ela tem esse corpo era para ter era para o sistema complemento se ligar nesse anticorpo que tá né mas se ocorrer todo o processo de fixação das proteínas do complemento na hemácia e no final abril poro na e massa estourar e márcia
mas como já consumir o meu sistema complemento pela presença do anticorpo na amostra eu coloquei da minha última então não tem mais sistema complemento livre as proteínas do sistema complemento foram consumidas então quando não acontece nada no tubo eu falo que meu teste de um teste positivo o dom de ver como é que funciona um teste negativo para a gente entender isso um pouco melhor teste negativo o que que acontece eu tenho ausência de anticorpo então a pessoa não tem não ter contato com o microrganismo não tem aqui nesse corpo quando eu coloco o antígeno
e as proteínas do complemento que que vai acontecer nada acontece nada porque eu não tenho acho corpo o antes não fica livre as proteínas do complemento não vão se ligar sozinhas ao antígeno eu preciso do anticorpo então não acontece nada porém na sequência que eu coloco mesmo a c-max c-max estão opsonizadas presença de uma organização em torno mas é a onde eu coloco ela desde que turco ela vai encontrar o que o sistema complemento que não foi consumido por que eu não tinha anticorpo inicialmente aqui na minha mostra negativa então quando eu coloco a minha
hemácia nesse tubo vai acontecer o processo de hemólise porque hemólise das hemácias se rompem porque elas estão opsonizadas com anticorpos e nessa solução o meu tenho proteínas do sistema complemento livres elas vão se legais anticorpos para acontecer toda a cascata de degradação das proteínas do sistema complemento e no final eu tenho a formação do thor do mar então acontece o que faz o fórum na grobo e humanizado então nessa reação de fixação do complemento a gente tem que pensar mesmo que ao contrário quando nada acontece no tubo o meu teste de um teste positivo e
quando eu observo o tubo e esse tudo isso é muito bom está o que significa que não tinha de corpo não começo da minha nossa cliente corpo quando eu coloquei a e massa com anticorpo sistema complemento ágil e aí as hemácias irrompe tudo bem gente então por aqui obrigado
