Clase PCR parte I

hola soy víctor moya y hoy día dentro del tema de técnicas moleculares de estudio vamos a estudiar las características de la pcr y vamos a conocer algunas de sus variantes bueno para contextualizar la biología molecular es una disciplina que tiene por objeto el estudio de los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular esta disciplina pretende explicar los fenómenos de la vida a partir de sus propiedades nosotros moleculares y dos macromoléculas centran gran parte de lo que es el estudio de esta disciplina por un lado tenemos lo ácido nucleico

y por otro lado las proteínas y dentro de lo acción nucleico uno de los que va a ser más estudiado es el adn y las proteínas van a ser muy relevantes porque en el fondo son las moléculas efectoras de gran parte de las acciones celulares cuando hablamos de técnicas de biología molecular en el fondo hablamos de técnicas que permiten aislar extraer y visualizar y modificar de distintas formas amplificar el adn sep todas estas tecnologías relacionados con el adn están dentro de lo que llamamos técnicas de biología molecular dentro de estas técnicas una de las más

relevantes y más usadas del laboratorio es la reacción de la polimerasa en cadena que se conoce como pcr por sus siglas en inglés del paul y mary jane watson bueno esta es una técnica específica rápida sensible y versátil que permite amplificar un fragmento de adn de interés a partir de una muestra de adn esta técnica permite obtener millones de copias de un pequeño fragmento de adn en muy corto tiempo para que nos hagamos una idea en cuatro horas a partir de una muestra de adn podemos obtener más de un millón de copias y para eso

van a ser necesario aproximadamente 30 ciclos de lo que vamos a conocer como los ciclos de pcr o ciclos de amplificación bueno esta técnica fue mejorada por el doctor cary banks y había sido descrita por dos investigadores anteriormente pero todas las mejoras que realizó este investigador le permitieron ganar el premio nobel en el año 1993 de esa manera se constituiría en una de las técnicas más importantes la biología molecular esta técnica permite amplificar in vitro muestras de adn esto es muy relevante ya que antes de esto si se realizaba amplificación de adn pero para ellos

ocupaban seres vivos sean bacterias principalmente e ahora bien se puede en esta técnica detectar una molécula una sola molécula de adn o sea va a estar con una sola molécula de adn para que podamos detectarlas ya que esta técnica va a poder amplificar las millones de veces esta técnica nos va a permitir trabajar a partir de muestras de adn es decir moléculas de doble hebra o de cdn a que sería adn complementario es decir adn de hebra simple ok bueno algo de historia este era el doctor cary banks parte de distintas etapas de su vida

en donde podemos decir sobre el que fue originalmente químico y después se doctoró en bioquímica y luego a partir de su mejora y desarrollo de la pcr obtuvo el premio nobel como ya hemos señalado desde pequeño mostró interés no solo en la química sino que también en los organismos biológicos y cómo éstos funcionaban bueno para comparar ahora un poco como antecedentes antes de entrar a lo que es la pcr en sí recordemos que la replicación en vivo es un proceso que permite sintetizar moléculas de adn entonces ya aquí empieza una primera diferencia porque acá es

toda la molécula de adn en la que se sintetiza en vivo en la célula ok y para este proceso es necesaria la participación de muchas enzimas por ejemplo recordemos la casa que rompe los enlaces por puente de hidrógeno abre en la doble hebra luego tenemos proteínas que se unen algunas de las hebras simple para evitar el apareamiento mientras éstas están abiertas esta producimos la replicación tenemos también las topoisomerasa por ejemplo que se disponen por delante de la horquilla de aplicación vienen generando cortes y giros que permiten reducir la atención y permitir y finalmente facilitan que

la doble bra se siga abriendo y requerimos de una o más adn polimerasa para a partir de cada hebra molde ir sintetizando la hebra otro aspecto que también debemos recordar es que está adn polimerasa requieren de cebadores o pranes y que en el caso la replicación esto se valore o breimer eran trocitos de airline otras cosas que debemos recordar es que cuando tenemos adn doble bra ya sea por un aumento significativo de la temperatura o por un aumento en el ph nosotros podemos producir la separación de la doble m esta separación de la doble hebra

por método físico o químico le llamamos de naturación del adn ok y este es esta separación implica solamente el rompimiento de los enlaces por fuente de hidrógeno ya que la unión entre los núcleos dios se mantiene estable luego in vitro si bajamos la temperatura o disminuimos el ph la doble las cada hebra puede aparearse nuevamente y se formará doble entonces ese proceso le llamamos la reina duración este fenómeno hay que tenerlo claro porque se lo vamos a aprovechar en el proceso de crecer bueno otro aspecto es que la adn polimerasa recordemos que agrega los nucleótidos

a la hebra molde de acuerdo a la regla de complementariedad de bases y que esta enzima que encargada de agregar estos nucleótidos el adn polimerasa lasa n polimerasa sabemos que requieren de cebadores o primer ya que los nucleótidos los van a ir agregando al extremo 3 prima o h y por eso entonces que se requieren los cebadores bueno para realizar una pcr vamos a necesitar algunos equipos como este que está acá abajo que es un termociclador y vamos a necesitar generar una mezcla que va a tener nuestra muestra de adn va a tener cebadores prime

ers o e partidores también conocido vamos a necesitar de los desoxirribonucleico desoxirribonucleico va a amanecer necesitar de una enzima que va a ser la tag polimerasa vamos a necesitar de un buffer mix y un tubo en donde va a mezclarse todo eso se va a realizar la pre se va en este aparato luego nos va a permitir realizar una serie de etapas que luego las vamos a encontrar en lo que se llaman los ciclos de amplificación y cada ciclo amplificación va a tener a su vez tres etapas que van a ser la de naturación y

lo que es el alineamiento y la extensión y para entender la pcr entonces tenemos que tener claro que de todo el adn solo un pequeño fragmento va a ser amplificado para definir el segmento que va a ser amplificado se van a diseñar los cebadores o también llamados partidores estos cebadores se van a colocar uno en cada hebra molde y van a flanquear no es cierto de algún modo van a delimitar la región de interés al igual que en una replicación normal la importancia estos cebadores que van a ofrecer un extremo 3 primero h libre para

la acción de la polimerasa ahora bien en la pcr nosotros necesitábamos como hemos dicho de una molécula de adn de muestra o de base y nosotros vamos a agregar aquí los cebadores prime air que aquí aparecen de color rojo los desoxirribonucleico que es un tipo de polimerasa llamado la tag polimerasa y no necesitamos nada más que una enzima que va a ser entonces la tag polimerasa cómo vamos a lograr todo lo demás simplemente produciendo cambios de temperatura entonces vamos a aplicar una temperatura alta entre 94 y 96 grados que va a provocar la de naturación

y eso implica la separación de la doble hebra por rompimiento de los enlaces por fuente de hidrógeno entre las bases nitrogenadas posteriormente viene una segunda etapa que la etapa de alineamiento en donde se baja la temperatura a alrededor de 60 68 grados en donde los cebadores sobre jmr se aparean entonces o se asocian con las hebras molde posteriormente volvemos a subir la temperatura para comenzar la fase elongación llegamos a los 72 grados sergio aproximadamente y a esa temperatura que es la óptima para la pac polimerasa comienza la agregación de los respectivos desoxirribonucleico a partir de

el extremo 3 primate libre de su cebador o prime ok entonces de esa manera se empiezan a sintetizar las hebras hija sobre cada hebra mol entonces la idea es que una vez que se haya duplicado el segmento de interés este proceso se va a repetir con las mismas tres etapas es decir se va a producir un nuevo ciclo de amplificación y a partir de cada una de estas moléculas de adn doble hebra generan t en el final del proceso se van a producir dos nuevas moléculas de adn dobles y así sucesivamente con cada ciclo se

van a ir generando cada vez más moléculas de adn dobles entonces como les decía cada ciclo de amplificación tiene estas tres etapas que conocemos entonces como la 1 que es la de naturaleza de naturalización o de naturación simplemente qué ocurre entre 94 y 96 grados luego la segunda etapa que es el alineamiento que ocurre más o menos los 68 grados y la etapa elongación que ocurre a los 72 grados luego vemos que cada molécula de adn va a ser sometida nuevamente a otro ciclo que tiene estas tres etapas y va a permitir generar dos moléculas

de adn dobles y luego cada una estas moléculas de adn de doble hebra de esta etapa va a volver a experimentar otro ciclo en donde cada molécula va a ser nuevamente amplifica y así sucesivamente y vamos a tener algo como lo que se ve en esta imagen entonces como estimación podríamos decir que para determinar el número de moléculas de adn va a determinar en el fondo producían a partir de una sola va a depender esto del número de ciclos de amplificación se podría estimar como 2 elevado a n en donde n es el número de

ciclos de amplificación por lo tanto después de unos 32 ciclos se pueden obtener alrededor de 1000 millones de copias de adn bueno entonces ya sabemos que la pcr permite hacer copias de una secuencia de adn in vitro dentro de un pequeño tubo es cierto que parece un tubo eppendorf pero de menor volumen y para eso necesitamos este aparato que él termociclador entonces dentro de este tubito que es lo que vamos a tener un adn de interés no es cierto de la n interés vamos a tener la enzima que en este caso es la tag polimerasa

vamos a tener los cebadores partidores o prime es que en este caso son trocitos de adn lo cual es una diferencia con respecto a la replicación ya que en vivo en la replicación los cebadores son de trocitos de aire vamos a utilizar con factores para la enzima qué van a corresponder a magnesio que lo va a aportar concretamente la solución de cloruro de magnesio vamos a necesitar de los desoxirribonucleico norte y gua dora que contiene ciertas sales agua libre nuclear y el termociclador que este aparato que nos va a permitir en aplicar temperatura por determinado

tiempo y en una determinada secuencia o borda pudiendo repetir esta secuencia las veces que uno quiera entonces como les decía porque necesitamos agua libre nuclear para preparar la mezcla al igual que también necesitamos puntas de micro pipetas libres de nuclear porque en el fondo si queremos amplificar de adn lo menos que deseamos es que hayan enzimas en el medio que vayan a degradar estas moléculas de adn entonces por lo mismo debe estar libre entonces está esta agua que vamos a utilizar de hernias así de eneas por otra parte como hemos dicho la vamos a necesitar

de los factores que en este caso van a estar representados por el millones de magnesio esos iones de magnesio van a resultar de esta solución de cloro magnesio ya que al disociarse un cierto se va a generar yo magnesio y éste yo magnesio va a facilitar la unión de la enzima que el sitio de unión especificó el sitio activa la enzima puede reconocer los extremos 3 prima o h en los cebadores prime en que están colocados sobre el adn mol de la verdad moldeada ok entonces se necesita para el adecuado funcionamiento de la enzima por

otro lado como hemos dicho vamos a necesitar de 4 desoxirribonucleico que no tendrán adenina otro intentan citosina otros guanina y otros timming entonces como ya sabemos estado parte de los sustratos que requiere la tag polimerasa luego necesitamos una solución amortiguador a es decir un base que va a permitir mantener un ph constante y óptimo para que la polimerasa pueda actuar a su vez las sales disueltas en usted para proporcionar la fuerza iónica que va a facilitar la máxima activa de la enzima así mismo también esta fuerza iónica va a influir sobre la temperatura de fusión

y la temperatura de hibridación la temperatura de fusión se refiere la temperatura en que se produce la separación de la doble bueno por otro lado como hemos dicho vamos a necesitar de estos cebadores o primer que son necesarios para el adecuado funcionamiento de la polimerasa en ese sentido la tag polimerasa se parece a la adn polimerasa normales ya que también requiere de cebadores prime air en este caso van a ser secuencias como decíamos de adn cortas no excepto en 1825 nucleótidos que van a ofrecer el extremo 3 primero base libre a esta enzima y se

van a unir de manera complementaria sobre las hebras muertas hemos señalado también que estos cebadores van a delimitar no es cierto la región del adn que va a ser amplificada entonces como reiterando esto último el diseño o sea la síntesis in vitro de estos cebadores partidores requiere el conocimiento de las secuencias que flanquean o sea necesitamos a priori saber conocer muy bien las características del gen o del fragmento que queremos amplificar para de ese modo poder diseñar los cebadores adecuados que flanquean en la región de ustedes ok entonces cuando tenemos acá nuestra hebra de adn

doble hebra la de nature amos aumentando la temperatura luego bajamos la temperatura para que se produzca el alineamiento es decir del observador eo prime entonces de esa manera de limitar nuestra región que sería el amplificar y luego aumentamos un poco más la temperatura para iniciar entonces el proceso de elongación entonces aquí se ven los cebadores o primer puesto uno en cada hebra molde de adn y vemos entonces que está kaká la región de interés que se va a ser amplificada y aquí podemos ver la fase de long acción donde a partir de cada cebador se

empiezan a agregar los distintos núcleos vivos de acuerdo a la regla de complementariedad de base por otra parte la tak polimerasa es una enzima y esta enzima lo que va a hacer es permitir la agregación de los distintos núcleos sobre las hebras molde va a requerir de cebadores o partidores que le van a ofrecer el extremo 3 primero h libre y su temperatura óptima de funcionamiento es de 72 grados sense y esta es una de las características más significativas o más distintivas de esta enzima como es posible esto ya que siendo una enzima no acepto

la mayor parte de la enzima como cualquier proteína se desnaturalizaría a una temperatura tan alta y perderían entonces su actividad biológica sin embargo esta enzima fue aislada de un organismo que vive en condiciones ambientales extremas concretamente vive asociado a géiser y a aguas termales también vincula a esta actividad de geisers entonces por lo tanto está especialmente adaptado para vivir en esas condiciones ambientales esta bacteria se llama 'la termos acuática y de ahí es que sé colocó no es cierto como abreviatura a esta polimerasa tag polimerasa el tacto thermophilus a quad entonces esta tag polimerasa aquí

fue aislada en el año 76 es la base para poder realizar esta pecera bueno como hemos dicho entonces es una enzima termoestable requiere de cebadores primers y una cosa muy importante es que carece de función correctora de pruebas tres primas cinco primas es decir recordemos que esta función correctora de pruebas 3,3 prima 5 prima era propia de la adn polimerasa que se dan en una célula cualquiera la mayor parte del adn polimerasa tiene esta función correctora de prueba es decir cuando se incorporaba un nucleótido de erróneo ese último nucleótido podría ser removido y reemplazado por

el nucleótido correspondiente y eso era una característica como una casi cualquiera de polimerasa pero en este caso tendríamos una excepción ya que no tiene esta función correctora de prueba bueno por otra parte tenemos aquí el termociclador que es el aparato que vamos a necesitar para aplicar los ciclos de temperatura entonces este termociclador me va a permitir someter una muestra a un cierto número de ciclos de incubación a temperatura específica o con cambio específico entonces como hemos dicho un ciclo va a caracterizarse primero por una temperatura relativamente alta no cercana a los 95 grados celsio que

es donde se produce la natural y la de naturación del adn luego a bajar a una temperatura entre 55 y 60 grados y luego ya ahí donde se ha producido el el alineamiento del observador es primer y luego vamos a ir a una temperatura de 72 grados que es la temperatura óptima para el funcionamiento del attack polimerasa y entonces se produce la fase elongación con eso se completa un ciclo y este aparato pero permite generar el número de ciclos que nosotros deseamos en este caso estoy repitiendo una y otra vez por ejemplo aquí llegamos al

ciclo número 30 y luego de eso se acaba por ejemplo bueno entonces como ya hemos señalado esto vendría a representar un ciclo de amplificación que me permite entonces a partir de una molécula de adn obtener dos moléculas de adn de doble hebra hijas y luego esto se va a ir repitiendo otro ciclo solo que ahora cada hebra va a experimentar esta misma cambio vuestra misma etapa que estamos viendo acá de esa manera entonces se va a ir amplificando nuestra muestra de adn bueno una vez que se ha producido la amplificación dentro del termociclador tenemos que

pensar que tenemos que comprobar no es cierto como esto ha ocurrido y cómo ha ocurrido y para eso entonces una vez que termine la pcr convencional tenemos que pasar a la fase de detección y eso implica realizar una electroforesis en un gel de agarosa y luego la detección entonces de las muestras de adn dentro de ese gel de agarosa utilizando por ejemplo bromuro de e iluminando con ultravioleta entonces en este caso aquí tenemos el gel resultante de ésta el ispro forest is de adn recordemos que aquí la electroforesis de adn normalmente son ocurren de manera

horizontal ahí está el de agarosa aquí está el electrón negativo y aquí está el electro positivo entonces las muestras de adn se mueven desde electro negativo hacia el positivo recordemos que las muestras de adn tienen carga neta negativa debido a los grupos entonces en el gel vemos aquí en el carril 1 el patrón de adn donde vemos distintos fragmentos de adn de longitudes conocida aquí en cuanto a pared de base y en los carriles 2 3 4 5 6 7 cargamos los productos de amplificación y en este caso vemos que efectivamente tenemos una sola banda

de 574 pares de bases lo que me indica entonces que efectivamente se amplificó el fragmento de interés de adn de interés y que no hay otro tipo de fragmento y por lo tanto no hay ningún tipo de contaminación en la muestra bueno como ya hemos señalado entonces en la electroforesis por las cargas negativas de la molécula aportada por el grupo fosfato las moléculas se van a mover desde el cátodo que es el selectivo hacia el banano que es el electro positivo ok y una vez que ha terminado la electroforesis va a ser removido ayer iba

a hacer pimientos por ejemplo con bromuro de vídeo y luego irradiado con ultravioleta para generar la fluorescencia luego tomamos la fotografía y podemos ver qué es lo que ha resultado todo bueno dentro de las características de esta pcr una vez que hemos amplificado es cierto una muestra de la línea a millones o miles de millones de veces esa gran cantidad de moléculas de adn puede permitir la realización de otras técnicas entonces como ya hemos visto parte de estas muestras se van a correr en un electroforesis en gel y una vez que ya hemos comprobado está

amplificación mediante esta detección podemos enviar a secuenciar o y la muestra de adn o digerirla con enzimas de restricción y clonar las en un plan entonces cómo sería esto al tratar nuestra muestra de adn amplificada con enzimas de restricción generamos y luego el plasma con las mismas enzimas de restricción podemos insertar están este fragmento que hemos amplificado dentro de uno o varios planos ahora esos plásmidos si tienen un genes que codifican por ejemplo de resistencia antibiótico esa resistencia antibiótico nos va a servir luego para aislar aquella bacteria que incorpora en el camino ya que una

vez que hemos incorporado el gen de interés dentro del plan view obteniendo lo que se llama el plasma recombinante este plano lo vamos a incorporar en una bacteria y vamos a dejar que esta bacteria crezca en un medio adecuado y luego al medio por ejemplo si era resistente al antibiótico equis y la incubamos con el antibiótico equis y todas las bacterias que mueren son las que obviamente no incorporaron el plásmido que contiene el gen de interés y por lo tanto de esa manera podemos separar aquellas que sobreviven y que si tienen el gen el gen

de interés puesto que recordemos el plan new tenía genes que codifican para resistencia al antibiótico xxi entonces de esa manera podemos luego amplificar nos cierto o clonar el plan y utilizando por ejemplo una bacteria ok entonces obviamente aquí se trata entonces de una bacteria muy bien jude bueno dentro de la aplicación es de la pcr vamos ya hemos visto en ingeniería genética lo primero es que nos permite amplificar secuencia génica específica es decir a partir de una muestra muy pequeña de adn esta la podemos amplificar y luego detectar se ocupa mucho en medicina forense para

identificación de por ejemplo parentesco posible sospechoso en una escena del crimen en ese caso se trabaja con fragmentos de adn microsatélite y también se puede trabajar no es cierto para de terminar no es cierto o identificar determinados individuos a través de la técnica de huella de adn y por otra parte también pueden ser utilizar las pcd en estudio genética poblaciones en donde por ejemplo uno de los temas de interés va a ser estudiar la similitud genética entre poblaciones y definir las posibilidades de que haya ocurrido una migración también son importantes en estudios de tipo evolutivo

ya que permiten analizar relaciones filogenéticas entre especies desaparecía o especies que están actualmente vivas se pueden utilizar en microbiología ambiental por ejemplo para ver fenómenos conjugación entre organismos la misma población y la población es distinta etcétera también van a ser importantes en el diagnóstico molecular pero para que sirvan en el diagnóstico molecular es muy importante trabajar con controles positivos es decir contar con nuestra probada mente positiva y contar con una muestra que carece del adn de interés que sería el control negativo 10 diagnóstico molecular por ejemplo puede ser para evaluar la presencia de adn de

un patógeno puede provenir de bacterias o de virus puede servir también el diagnóstico prenatal y detectará si alguna enfermedad genética en este caso por ejemplo se puede trabajar con muestras de adn procedentes de biopsias de velocidad crónica o muestras de líquido amniótico también se pueden evaluar marcadores de ciertas mutaciones asociadas determinados tipos de cáncer y de esa manera definir los dignos los tratamientos más adecuados también el pc me puede permitir la identificación de especies entonces en el caso por ejemplo de los animales se va a trabajar con fragmentos de adén pondré al en el caso

de identificación de bacteria probablemente se trabaje con fragmentos de aire en el rigor zonal esto va a ser importante ya que por ejemplo en el caso de especies animales no necesitamos tener al animal entero sino que necesitamos un pequeño fragmento recordemos que podríamos partir incluso con una muestra de cabello o de pelo de este animal bueno la pcr entonces dentro de sus ventajas lo primero es que podemos obtener una gran cantidad de harina a partir de una cantidad ínfima una vez que obtenemos el producto amplificado este puede ser clonado secuenciado y analizado de diversos modos

también una de las gracias que me permite a mí es como me permite amplificar adn yo puedo trabajar con una muestra como les decía muy pequeña de animales vivos o muertos y sus aplicaciones son extraordinariamente diversas como ya hemos visto medicina forense diagnóstico molecular y análisis prenatal etc así como tiene muchas ventajas también podemos hablar de ciertos problemas técnicos que tienen que ver con que la tag polimerasa al carecer de actividad 3 prima sexo nucleasa correctora de pruebas podría hacer que la síntesis de las moléculas de adn fueran inexactas otro aspecto es que dada la

sensibilidad de la técnica se podrían amplificar cantidades minúsculas de adn continuo de adn contaminante que haya llegado a la muestra entonces las desventajas se reducirían en la siguiente bueno lo primero es que solamente podríamos reproducir o amplificar un fragmento pequeño de adn acepto y para eso necesitamos conocer una secuencia de 20 a 40 pares de bases concepto por lo menos lo otro es que necesitamos diseñar muy bien los cebadores prime air ya que estos van a ser complementario al frank al fragmento de adn que se desea sintetizar recordemos que estos van a flanquear a la

zona de interés por otro lado dado las características de la tag polimerasa la polimerización puede tener errores al sintetizar a la vez y por último existe el riesgo de contaminación con otro adn cosa que eventualmente se puede minimizar en la medida que se cumplen todas las normas rigurosamente todos los protocolos para la obtención y procesamiento de la muestra de edad bueno un ejemplo d como podría utilizarse esta técnica es que por ejemplo a partir de una muestra de cabello encontrar una escena de crimen se puede realizar una pecera y luego el producto de esta pcr

puede ser amplificado en esta amplificación que vamos a utilizar se va vamos a utilizar cebadores prime air que permiten amplificar fragmentos de alelos de un gen entonces por ejemplo vamos a usar un observador o primer quien me permiten amplificar el alelo parte del alelo 1 y parte del alelo 2 un fragmento de 200 pares de base en el caso del alelo 1 y el de 300 pares de bases en el anhelo 2 ok entonces qué es lo que vemos acá bueno por un lado aquí vemos que el gel que ha sido ya corrían nueve flores

y se ha sido la producción revelado y vemos las marcas que representan los fragmentos de adn aquí está el patrón de adn y aquí tenemos en el carril 1 una muestra que se obtuvo de la escena x y vemos que solamente tenemos una banda de alrededor de 200 pares de base eso significa obviamente que si hay sólo una banda 200 pares de base entendiendo que en todo organismo o ser humano diploide o va a haber dos alelos significa entonces que es como si voto para el alelo de 200 pares de base o sea para el

alelo que corresponde al marcador 1 después tenemos aquí en el carril 1 2 y 3 muestras de adn en el cabello de tres sospechosos entonces en el sospechoso no vemos que hay una banda a los 300 padres de base lo que sí y una sola lo que significa que este sujeto de homocigotos para el alelo 2 en el caso de surgir sospechoso 2 vemos que éste tiene dos bandas una 300 pares de base en 200 pares de bases eso significa que tiene el alelo 1 y 2 es decir es heterocigotos y el caso del sospechoso

3 tiene una sola base y una sola banda a 200 pares de base lo que significa que vamos y voto para el alelo 1 entonces nuestra muestra de adn en la escena del crimen era de un individuo que éramos y voto para el alelo uno igual que el sospechoso tres entonces de este modo de los tres sospechosos que despiertan nuestro interés es el sospechoso 3 porque eso indica que por lo menos la muestra de adn me dice que es del mismo tipo de la encontrada en la escena del crimen de este modo entonces era en

el tercer sospechoso coincide con el adn de la escena bien nos vamos a tener aquí por ahora para continuar en una segunda parte con las variantes de la técnica de pcr