Bioquímica Clínica: Enzimologia clinica parte III

queridos alunos bem-vindos a mais uma vídeoaula do professor Sérgio Hoje iremos dar continuidade ao assunto enzimologia clínica para se medir atividade das enzimas basicamente três métodos são utilizados corriqueiramente na rotina Laboratorial métodos que analisam o consumo do substrato aquele substrato que vai ser degradado vai ser transformado em produto é medido outros mos analisam o quanto de produto é formado produto pode ser corado pode ser não corado e os métodos que analisam a variação da absorção de uma coenzima coenzima muitas vezes é transformada nas reações algumas enzimas que utilizam coenzimas transforma as coenzimas E isso também

pode ser medido como exemplo da metodologia que analisa o consumo de substrato nós temos a dosagem da amilase amilase é um enzima que degrada o amido em glicose aose destr entretanto se limitarmos o tempo uma parte daquele amido não não vai ser degradado el vai sobrar ele vai se acumular e esse amido não degradado não hidrolizado que é medido esse amido ele é posto em contato com iodo isso vai formar um complexo coloidal azul que a intensidade é proporcional a ao medo que sobrou então indiretamente nós teremos a medida da atividade da enzima ou a

quantidade de enzima que conseguiu degradar o naquele intervalo de tempo como método para analisar o produto formado nós temos a dosagem da fosfatase alcalina por o método que analisa a eficiência ou atividade da fosfatase alcalina Produzindo um produto corado nós temos a reação na qual fosfatas alcalina vai quebrar o nitrofenil fosfato liberando o fosfato inorgânico é isso que a fosfatas alcalina faz ela em meio alcalino ela quebra ligações fosfato liberando fosfato inorgânico entretanto o nitrofen fosfato produz o composto colorido que é o par nitrofenol composto amarelo que é medido e fotometrica a intensidade da cor

amarela é proporcional à quantidade de produto formado por meio da força atas alcalina outro método também que analisa o produto formado só que dessa vez um produto que não é cor mas que ele precisa ser transformado no produto corado é quando colocamos em contato com a fosfatas alcalina aal monofosfato ess enzima vai quebrar como aconteceu com nitrofenol fosfato vai quebrar o agrupamento fosfato e liberar o indicador de phina que pode ser titulado com a base nessa titulação nós teremos uma coloração azul que é medida também e que a intensidade dessa cor azul é proporcional a

a atividade da enzima fosfatas alcalina que consegue transformar Timor Talina monofosfato em timó Lina livre e finalmente o terceiro método que é é utilizado para medir atividade enzimática é o método que analisa a absorção da coenzima que participa de uma reação nesse caso nós temos um exemplo a lactato desidrogenase lactato des hidrogenase enzima que transforma piruvato ou ácido pirúvico em lactato mas faz a reação inversa também ele transforma ácido lático em piruvato nessa reação a produção tá com a enzima nadh essa enzima ela absorve luz ultravioleta então a intensidade de nadh formado nessa reação é

proporcional a a à atividade da lactate da hidrogenase pela reação inversa ou seja ád pirúvico se transformando em lactato nós temos o decréscimo da absorção que também é proporcional a atividade da lactate des hidrogenase algumas enzimas são de enorme interesse Clínico de interesse no diagnóstico de doenças essas enzimas elas foram agrupadas em tecido específico elas são específicas de alguns tecidos e por esse motivo a dosagem dessas enzimas vai mostrar problemas ou mostrar eh alguma doença que esteja exatamente eh ligada àquele tecido por exemplo doenças pancreáticas nós analisamos amilase e a lipase para doenças hepáticas são

avaliadas a atividade da lanina aminotransferasa Lt da spato aminotransferasa ST da fosfatase alcalina da Gam glutam transferase e da colinesterase que são enzimas produzidas pelos hepatócitos como marcadores de doenças cardíacas nós temos a creatin quinase a desidrogenase lática lactato desidrogenase e a aspartato aminotransferase além dessas enzimas que são são utilizadas como marcadores de doenças cardíacas temos também alguns marcadores específicos para infarto que são esses marcadores clássicos das doenças cardíacas e alguns outros novos marcadores com a troponina e a mioglobina e como marcadores de doenças prostáticas temos a fosfatase ácida vamos inicialmente reportarmos as enzimas utilizadas

em doenças pancreáticas então pâncreas como sabemos é uma glândula que possui duas atividades uma atividade ela é exócrina relacionada a o sistema digestivo e nessa e por essa função as enzimas a a essa glândula nessa esse órgão o pâncreas produz duas enzimas a lipase e aase essas enzimas são produzidas por um tipo celular específico do pâncreas chamadas chamados ácinos Então os ácinos Eles produzem eh as enzimas digestivas entretanto o pâncreas também possui uma atividade endócrina nessa atividade endócrina as células chamadas ilhotas pancreáticas produzem hormônio hormônios como a insulina e também o glucagon Então como atividade

exócrina o pâncreas ele produz enzimas que T interesse no Diagnóstico como amilase e a lipase a lipase é bem mais específica para problemas pancreáticos do que amilase uma vez que não existe um outro órgão produtor de lipase Então ela a lipase ele tem uma especificidade maior para indicar uma lesão da célula pancreática aase ela é produzida pelo pâncreas mas a milas também é produzida pela saliva então elevações da amase podem ser decorrência por exemplo de uma parotidite mas pode ser também em função de problemas pancreáticos o que geralmente é uma pancreatite Entretanto a amilase é

uma enzima bem pequena é uma enzima que consegue passar pelo eh pelo espaço glomerular consegue ser filtrada pelo rim e portanto ela também é encontrada na urina isso é importante porque a o a a concentração de enzimas plasmáticas está diretamente relacionada com a eficiência do R eliminar essa essa proteína elimina essa enzima então insuficiências renais também podem promover uma elevação da amilase não em virtude do pâncreas tá com problema mas em virtude do rim não poder filtrar ela adequadamente carcinoma pancreático também é uma doença relacionada com o aumento da amilase e a macroamilasemia em alguns

casos anticorpos podem se ligar a amilase promovendo um complexo imunológico amilase amilase ligada a anticorpo entretanto esse complexo ele se torna bem maior do que a própria milá ele não consegue ser filtrado como ele não consegue ser filtrado aparentemente existe um aumento da amase no entanto isso funciona como uma insuficiência renal a amase não consegue ser filtrada e assim aumenta sua concentração plasmática bem os níveis séricos da amase pancreática ele se torna elevado no intervalo bem pequeno de 2 a 12 horas após por exemplo o início de uma pancreatite entretanto os pacientes eles em 48

a 72 horas eles T seus níveis de amilase estabelecidos mesmo com a o aumento mesmo com a o a permanência da pancreatite no caso da lipase Esse aumento ele se torna um pouco mais tardio né então os níveis começam a ser detectáveis entre 3 e 6 horas após o início da pancreatite o pico geralmente eh aparece dentro das primeiras 24 horas e ele tende a demora muito mais para ser para voltar aos seus níveis normais dentro de 7 a 10 dias então podemos dizer que os níveis de amilase são para uma pancreatite precoce né Ele

é um marcador precoce de pancreatite enquanto que os níveis de lipase são utilizados para uma pancreatite para determinar ou para diagnosticar uma pancreatite a um prazo um pouco mais longo então algumas doenças estão relacionadas com a pancre algumas doenças desculpa algumas doenças estão relacionadas ao aumento de amilase principal delas é a pancreatite aguda mas também existe com outras e lesões como lesões ou traumas pancreáticos a própria insuficiência renal como eu já falei neoplasias pulmonares e ov e ovarianas lesões de glândulas salivares também uma vez que a própria eh a própria glândula salival também produz um

tipo de amilase ap penicite aguda queimaduras gravidez ectópica e alcoolismo um adendo aí é que no caso da pancreatite aguda há necessidade de se fazer a relação entre clearance de creatinina e o clearance de amilase uma vez que amilase ela consegue ser filtrada pelo rim e o aumento dessa milas tem que ser descartado um insuficiência renal para se dar o diagnóstico de pancreatite se essa diferença entre o clearance de creatinina e o clearance de amilase for maior que 5% é indicatti de pancreatite se a diferença for maior que 5% é um indício muito grande de

pancreatite uma vez que a a a creatina tá sendo filtrada normalmente mas nós temos um aumento súbito de amilase a lipase é outra enzima pancreática que ela tem sua ação no do ela é eliminada juntamente com várias enzimas como peptidases por exemplo e outras enzimas do adeno ela atua nos ácidos no no triglicerídeo quebrando o triglicerídeo em ácidos graxos e glicerol amostra utilizada para dosagem de lipase é o soro está relacionada também a pancrea aguda sendo 30% mais específica do que a milas mas também está relacionado com a pancreatite crônica com traumas e carcinomas de

pâncreas cisto pancreático desordens intraabdominais agudas enfermidades renais e obstrução do ducto pancreático bem para se medir a amilase nós vimos como é que como é que se faz o amido remanescente é dosado com iodo para se medir lipase para cima de lipase coloca-se o um substrato da lipase que é um tioester esse ti wer Ele é cindido pela amilase liberando um tio álcool e o ácido butírico esse ti álcool ao álcool é adicionado novo composto o ácido 55 de ti bis2 nitrobenzoico e nessa reação a formação de um âo com cor amarela a qual sua

leitura é feita em 412 nôm o aumento ou intensidade da cor amarela é diretamente proporcional à atividade alipas que formou o te álcool que reagiu com ácio 55 de ti bis2 nitrobenzoico outra forma de cimed lipase é através da adição de trioleína com colipase trioleína com colipase forma um é uma solução turva Solução essa que é adicionada a lipase e a lipase vai degradar né vai quebrar os lipídios fazendo com que a solução turva fique menos turva leitura no V vai fazer essa proporção entre a solução turva e a menos turva o que dá o

que é diretamente associada com a atividade da lipase bem agora veremos as enzimas utilizadas em doenças hepáticas o objetivo de se medir a função hepática é saber se o fígado está sofrendo algum tipo de obstrução do trato biliar se houve alguma lesão hepato célula aguda ou se o fígado tem alguma doença crônica então algumas enzimas podem ser podem avaliar essas diversas partes do fígado ou uma obstrução trato do trato biliar ou a lesão aguda ou uma doença crônica para avaliação das condições do fígado utilizamos a Alt a lanina min transferase aspartato aminotransferase ST muita gente

se pergunta por que que se faz a LT e a ST só LT só ST seria suficiente talvez a vantagem de ter LT e ST é porque elas possuem localizações diferentes localizações celulares diferentes e a relação a ltst muitas vezes indica o problema mais a nível pontual também para se medir a função hepática C dosa A Gama glutam feras GT e a fosfatas alcalina outras e outra outros métodos para se doar a função hepática estão descritos nesse slide entretanto ISS é assunto de outra aula quando a gente foi estudar eh foi estudar o o diagnóstico

os meios de diagnóstico da função hepática bem as aminos transferasas O que é que elas fazem são enzimas que estão envolvidas com o metabolismo de aminoá os elas fazem a transferência de grupamentos Amina nós podemos ver aqui nesse slide um aminoácido Doa o grupamento Amina Amino transfer transfere esse grupamento Amina para um Alfa cetoácido que geralmente é o alfa cetoglutarato esse alfa cetoglutarato quando recebe esse grupamento Amina no lugar dessa carbonila se transforma no aminoácido um aminoácido chamado de glutamato quando esse aminoácido Doa o grupamento Amino imediatamente ele se transforma no Alfa cetoácido correspondente então

no caso das duas aminotransferases a LT e a ST nós temos que o aminoácido pode ser a alanina ou que o Amácio pode ser a o aspartato a a o aspartato am transferasa está localizada na mitocôndria do hepatócito também está localizada no citosol então com essas duas localizações mitocôndria e citosol e ela está presente não só no fígado mas também no coração e nos músculos já a lina aminotransferasa LT ela está exclusivamente no citosol não é encontrada na mitocôndria e ela é encontrada principalmente no fígado diante disso nós podemos tirar algumas conclusões primeiro se a

ST ela está localizada também na mitocôndria ela vai indicar se ela aparecer grandes concentrações no plasma ela vai indicar uma profunda lesão então a lesão não foi só no citoplasma da célula foi em todas as organelas inclusive na mitocôndria entretanto ela se torna bem menos específica uma vez que tanto fígado como coração como músculos com músculo pode estar expressando essa enzima já LT ela é encontrada exclusivamente no citosol Então ela indica uma lesão menos profunda dos hepatócitos e ela é encontrada principalmente no fígado Então ela se torna uma enzima muito mais específica para medir a

atividade a lesão do fígado do que a ST as Amin transferasas podem ser utilizadas para diversos fins para medir diversas diversos danos do fígado O primeiro é paraa viral durante a crise de Hepatite viral as aminotransferases se apresentam cerca de 20 vezes o nível superior que elas encontram normalmente no soro 20 vezes mais concentradas do que normalmente S encontrada Entretanto a relação a ltst pode indicar algumas características da Hepatite viral por exemplo a ST tiver maior do que a LT e significa maior gravidade da lesão uma vez que a se encontrada na mitocôndria do hepatócito

já se for inverso a LT for maior do que ST não significa maior gravidade Mas significa maior extensão menor profundeza menor profundidade melhor dizendo da lesão mas uma maior extensão da da lesão certo eh as transfer também indicam também são utilizadas para se verificar se a colestase hepática O que é colestase colestase significa obstrução dos ductos que do dos ductos que veiculam a bile né os ductos biliares que estão obstruídos eles também têm essa função colest do tipo intrahepática e do tipo extática principalmente se houver uma as maior do que uma LT também são utilizadas

em doenças alcoólicas hepáticas da mesma forma ST é maior do que LT e se a a aspartato transferase for mais do que três vezes o limite superior pode indicar também o fim de uma terapia hepatotóxica então um medicamento que é utilizado e que tem ação tóxica sobre o fígado quando ele é terminado a ST aumenta pelo menos três vezes o seu limite superior nesse gráfico nós estamos estamos vendo Quais são os valores das aminotransferases em diversas doenças nós temos aqui os valores normais que ficam ali próximo de 20 ou 30 unidades por litro a cirrose

é o nível é a doença relacionada ao fígado que tem níveis mais próximos dos nor mais das aminotransferases então fica um pouco maior do que 30 unidades por litro a hepatite crônica é um pouco maior do que os níveis de cirrose a hepatite alcoólica apresenta níveis maiores do que hepatite crônica Hepatite viral aguda apresenta níveis bem superiores ali entre 300 e 3.000 unidades por lro e a isquemia e a injúria por isquemia ou injúria tóxica ela apresenta os níveis mais elevados das transaminases para se medir transaminases Nós temos dois métodos que são na verdade bem

parecidos para se dosar a LT nós utilizamos a alanina e o alfa cetoglutarato e isso é a reação normal né da Alt que vai transformar alanina em piruvato e o e o alfa set glutarato em glutamato nesse caso o aumento de piruvato vai servir como substrato para lactato desidrogenase que é adicionado na reação a lactato des hidrogenase transforma piruvato em lactato E para isso ele precisa oxidar o nadh a NAD o que nós medimos nessa reação é a é o é é o consumo de nadh o nadh ele é absorvido no ultravioleta o consumo quanto

mais rápido for consumido na th significa que mais a maior atividade da LT nós temos Nael amra para a nós adicionamos aspartato e o alfa cetoglutarato aspartato é transformado P pela oxalacetato e o o alfac glutarato em glutamato o aumento do oxalacetato serve como substrato para o malato des hidrogenase essa enzima vai transformar o oxalacetato em malato e assim como a lactato des hidrogenase vai consumir nadh formando NAD oxidado o som desse nadh é diretamente proporcional à atividade da AST outras duas enzimas também são utilizadas para medir a atividade para medir a função hepática nós

temos a Gama glutam transpeptidase ou Gama glutam transferase que é também chamada de Gama GT é a principal enzima para se medir a colestase obstrução dos ductos hepáticos Nós vamos ver que isso a acontece devido a localização dessas enzimas nos ductos na região do L do ducto mas é a principal enzima também para medir problemas alcoólicos então o o álcool ele produz toxicidade hepática e essa toxicidade hepática é refletida pelo aumento de Gama GT mas não só álcool como medicamentos né como outras doenças hepáticas no solo normal nós temos que o homem e a mulher

tem níveis um pouco diferentes de Gama GT outra enzima também utilizada para medir a função hepática é a fosfatas alcalina na verdade a fosfatas alcalina Não é enzima mais específica para medir a atividade hepática e sim para medir atividade óssea mas também a fosfatas alcalina aumenta na colestase intra ou extra hepática em doenças infiltrativas do fígado como por exemplo tumores e também também em cirrose a Gama glutamiltransferase é uma enzima que é localizada na membrana plasmática do hepatócito que como nós podemos ver e essa enzima ela promove o transporte de aminoácidos da região extracelular pra

região intracelular para que ele possa sofrer diversos metabolismo aí além disso a Gama GT também catalisa uma reação entre o [Música] gluta podemos ver aqui o gluta e o aminoácido esse aminoácido é cisteinil glicina então ele vai liberar cisteinil glicina produzindo cisteina e glicina e a formação do gama glutamil aminoácido então ele catalisa uma reação entre o gluta e o aminoácido vai formar Gama glut aminoácido e uma cist glicina Na verdade essa reação é que é utilizada para dosar a Gama GT né nesse slide podemos ver a localização da Gama GT a Gama GT é

encontrada nos canalículos da Bil assim como no ducto biliar portanto obstruções desses ductos como na colestase produz ou provoca um aumento da Gama GT Gama GT essa que é dosada no soro e pode ser indício de obstrução os ductos as causas da do aumento plasmático da Gama GT então podem ser doenças hepatobiliares principalmente aquelas que são obstrutivas o fígado alcoólico eh mas também indivíduos com com uso excessivo de álcool se danos do fígado devido a indução da sua síntese o uso de algumas drogas que induzem sua síntese como anticonvulsivantes rifampicina n que é um medicamento

utilizado na tu culose e também pancreatite a Gama GT é dosado pro método na qual enzima utiliza como substrato Gama glutamil 3 carbox 4 Anila juntamente com a glicil glicina essa enzima transforma Gama glutamil TR carboxil qu glicina em Gama glutamil glicilglicina e libera o TR carbox 4 nitroanilina esse composto ele é um composto colorido que pode e que absorve luz em 405 nôm e o aumento da sua concentração é diretamente proporcional à atividade da Gama GT já a fosfatase alcalina ela induz né uma Hidrólise do grupamento fosfato e meio alcalino então nós podemos ver

no exemplo aqui o grupamento fosfato de um Ester ele é cindido liberando o fosfato inorgânico e liberando também o álcool essa enzima está presente no fígado mais principalmente nos ossos também encontrado na placenta e encontrado também no epitélio intestinal nos ossos essa enzima Ela É secretada principalmente pelos osteoblastos Portanto o aumento dessa enzima no plasma ela vai refletir aumento a atividade desse tipo celular dos osteoblastos os níveis normais de fosfatas alcalina são diferentes de acordo com a faixa etária então adultos TM níveis de 20 a 105 unidades por lro e crianças tem níveis maiores n

de 0 a 3 anos de 0 a 3 meses pode chegar a 220 unidades por litro 3 mesas 10 anos 256 e 10 anos a puberdade 295 e isso é em decorrência do crescimento ósseo Nessa idade então aumento de osteoblasto secretando fosfatase alcalina né então o aumento fisiológico dessa enzima ocorre na infância e também durante a gravidez uma vez que essa enzima também é secretada pela placenta que são dois casos que podem confundir o aumento da enzima que precisam ser levados em consideração Então as causas dos níveis elevados de fosfatas alcalina podem ser causas fisiológicas

como infância puberdade gravidez doenças ósseas com o hiperparatiroidismo osteomalácia raquitismo doença de Pagé né que é uma doença na Qual há degeneração óssea osteomielite Além disso doenças hepatobiliares como hepatite colestase e cirrose assim como carcinoma dos bronquios nesse slide podemos ver um gráfico na qual mostramos que há diferença da atividade da fosfatas alcalina em mulheres e em homens homens TM níveis de fosfatas alcalino pouco superiores aos níveis das mulheres e mesmo entre os homens e mesmo entre as mulheres existe faix faixas etárias onde os níveis são muito mais elevados do que normalmente ocorre Isso precisa

ser levado em consideração na hora de dosar essa enzima uma vez que podemos ver aí por exemplo que mulheres tem níveis maiores de fosfatas alcalina entre os 12 e os 16 os 15 anos e os homens dos 15 até os 18 19 anos tem níveis maiores de fosfatas alcalina os métodos de dosar fosfatas alcalina é através da sua ação em C grupamentos fosfatos fosfatos A gente já viu em slide anterior fosfatas calina ela quebra o par nitrofenil fosfato liberando para nitrofenol que é um composto Amarelo na qual a intensidade da cor é proporcional à atividade

enzimática já timt leí também no caso timtale monofosfato também é substrato do da fosfatas alcalina essa enzima vai liberar timt Alina né íntegra e esse esse indicador de PH ele vai ser titulado para uma base gerando a cor azul o aumento dessa cor azul é proporcional à atividade da fosfatas alcalina finalmente a outra enzima é utilizada para medir a atividade para medir a função do fígado é a colinesterase colinesterase ela é produzida não só pelo fígado mas é produzida também por hemácias e é produzida também por nervos colinérgicos Essa é a colinesterase verdadeira ou acetilcolinesterase

o plasma o fígado músculo liso e os adipos produzem uma outra colinesterase que é chamada de pseudoceros Mas no fim Elas têm a mesma ação elas vão quebrar a acetilcolina o exemplo do nervo por exemplo né da das terminações nervosas Colinas acetilcolina é um neurotransmissor que sai do neurônio pré para o neurônio pós ganglionar ou sai de um neurônio para uma placa motora por exemplo vai prover uma despolarização da célula seguinte ou do nervo seguinte entretanto Esse neurotransmissor não pode ficar continuamente ativo precisa ser degradado quem faz isso é a colinesterase eh o aumento de

colinesterase tá Envolvida com doenças hepáticas como carcinoma como cirrose mas também tá Envolvida com desnutrição e com envenenamento por inseticidas organofosforados né então os inseticidas eles bloqueiam acetilcolinesterase aumentando assim a a aumentando assim a concentração de acetilcolina