Aula 12 - Bioprospecção de Microrganismos de Interesse Agrícola II

é muito bem meus amigos é com alegria que a gente encaminha para a nossa última aula eu quero fechar aula de hoje com chave de ouro falando mais uma vez e aprofundando o tema que Bill prospecção de microorganismos de interesse agrícola Então essa é a segunda aula do termo e ela serve para aprofundar na verdade né o tema que a gente abordou na primeira aula e trazer outras coisas que não deu tempo da gente falar naquele primeiro momento bem vamos lá qual é o conteúdo da aula de hoje eu quero basicamente falar sobre três vertentes

a primeira vertente são sobre inovações na bio prospecção na primeira aula a gente falou sobre como funciona Abril prospecção O que é a bioprospecção né Mais ou menos quais são as etapas mas hoje eu quero dar uma pincelada em algumas formas que a gente tem hoje para Inovar nem eu peço e que muito importante a gente não vai no seu processo tá a final do prospecção tem sido feita há muitos e muitos anos né e tem muita coisa ainda para gente descobrir mas para isso a gente precisa se mexer e fazer algumas coisas um pouquinho

diferente do que tem sido feito historicamente bem depois disso eu quero falar um pouco sobre uma coisa que eu gosto muito que é sobre o estudo do microbioma então eu quero falar sobre o conceito do microbioma aliado a bioprospecção E então hoje a gente tem uma ferramenta muito boa e a parte do sequenciamento genético de nova geração que nos ajuda a entender os comunidades microbianas de uma forma geral e isso vencer estudo dos microbiologia né eu quero mostrar como isso pode ser uma olhada importante para a gente no processo é Bíblia prospecção e por fim

eu quero falar eu vim para vocês porque afinal a gente não falou nada né sobre a avaliação da eficiência de um inoculante né então assim eu quero falar na verdade sobre testes in vivo quero falar sobre testes por exemplo uma caso de vegetação sobre testes das nossas bactérias numa planta como isso funciona o que que a gente pode esperar então vem comigo e vamos falar um pouquinho mais sobre esses temas na aula de hoje que tá super legal muito bem lembra desse mapinha né esse caminho Zinho aqui do tesouro que eu falei para vocês falei

para vocês que o desenvolvimento de uma colante é uma coisa muito simples Apesar de muito trabalhosa bem ele consiste na coleta de uma amostra no isolamento né dos fungos bactérias o enfim Dependendo do que você tá trabalhando ali da avaliação in vitro do potencial meu tecnológico né Desse nesses Mix e até chegar no teste in vivo legal esse é o processo natural é do desenvolvimento do inoculante E aí o que que eu quero falar para vocês vamos falar um pouco de novo ação eu quero começar a falar de inovação para vocês na parte de isolamento

dos microrganismos isso para mim é o talvez primordial no nosso processo de Bill prospecção tá a minha ideia é vamos Inovar no isolamento de novas estirpes microbianas e porque simples e vocês se lembro daquela velha história que a gente fala da microbiologia já há muito tempo de que a enorme maioria dos microrganismos não é cultivada atualmente com os métodos que a gente usa né então por exemplo para solo a gente tá falando aí que 99,9 por cento das bactérias por exemplo nunca foram cultivadas com a gente olha ali por exemplo uma mostra qualquer sabe o

número de células que tem ali sabe o número de espécies que tem ali por exemplo por sequenciamento genético quando a gente vai para placa de Petri quase nada cresce em relação à quantidade original de micro-organismos que tem naquela mostra né então eu trago aqui para vocês um artigo eu gostaria muito que vocês lessem este artigo tá ele fala sobre o fenômeno da em cultivar habilidade microbiana em si Art é muito bom essa mulher é esse lava ela é realmente uma pessoa sentir estudo esse esse processo há muitos anos e esse artigo Ele é bem mastigadinho

ele fala bastante sobre o processo né mas onde que eu quero chegar em uns se a gente sabe que a maior parte dos microrganismos não é cultivado e a gente sabe que historicamente as pessoas usam sempre os mesmos meios de Cultura para cultivar as bactérias O que que a gente espera a gente espera que a gente sempre vai pegar os mesmos tipos de bactérias e isso é muito ruim porque a gente acaba chovendo no molhado Olha tem tanta coisa nova por aí a gente se aprender a pegar essas coisas novas né então que eu tô

instigando aqui vocês é vamos sair do lugar comum e vamos tentar alterar as nossas formas de cultivo eu vou dar um exemplo pra e na parte de desenho de meios de culturas diferentes a vocês se recordam de um projeto que eu já falei algumas vezes voltar a falar dele daqui a pouco para vocês que é um projeto que a gente trabalha com a ervas ao que a atriplex nummularia e essa é planta a gente foi lá para Pernambuco para coletar amostras dela bem nessa nesse esse projeto que aliás eu botei o vídeozinho na primeira aula

de Bill prospecção para vocês um dos meios de culturas que nós usamos foi meio de Cultura baseado na própria planta então por exemplo eu já tinha essa planta cultivada na minha casa de vegetação e sua antes de ir lá para Pernambuco né atrás dela eu já tinha ela lá e aí a gente consegue por exemplo pegar essa planta aqui então aqui tem uma solução dela com o folhas a gente consegue fazer um está o like no extrato dela que legal esse extrato da planta é um suco igual um suco verde que a galera toma de

manhã por exemplo né mais duro de torradinho aqui do que normal então por exemplo eu fiz um leite cultura com base nesse extrato vegetal suplemente com um pouquinho de glicose tá ok e a gente testou por exemplo na verdade várias composições diferentes e fui testando como que as bactérias por exemplo do Jardim lá do Instituto se comportavam ou não no desenvolvimento desse meio de Cultura ó esse aqui é o resultado de um isolamento a das bactérias baseadas nesse meio então vocês estão vendo que o meio esverdeado né Ele tem alguns resíduos Olha a diversidade enorme

de bactérias que a gente tem aqui Que coisa linda um monte de morfotipos né e eu vou dizer para vocês que em alguns lugares é o em vários meios de cultura que nós testamos o maior número de unidades formadoras de colônias que nós obtivemos foi por exemplo com esse meio Com base no extrato da planta que significa que eu tô falando para todo mundo fazer um meio de extrato de planta não é só um exemplo um exemplo de como sair por exemplo de um lugar comum e fazer alguma coisa diferente para tentar isolar algo diferente

Então nesse projeto especificamente a gente desenvolveu esse e-mail olha só as morfologia das colônias né parece um desenho parece uma coisa pintada dá até vontade de tatuar isso daqui na pele tão bonito que é né mas são as morfologias que as próprias bactérias formam ao se desenvolver no meio como esse mas por exemplo nesse projeto especificamente cada uma das amostras elas eram é hackeados em diferentes meios de culturas então a gente testou vários meios de culturas para que a gente pudesse ampliar ao máximo o número de bactérias diferentes que a gente pudesse ter a primeira

dica que eu tenho para te dar na parte de inovação É saia do lugar comum na hora de cultivar e quando eu falo saia do lugar comum na hora que cultivar as vezes eu quero que vocês vão além disso daí e olha aí eu quero trazer uma outra coisa mas tecnologia por exemplo que a gente está começando a trabalhar lá no laboratório mas algo é uma coisa que já tem alguns Laboratórios o exterior que já fazem algum tempo especialmente em outros ambientes né a gente tem no nosso instituto por exemplo para chorar que eu Peixoto

já estava trabalhando com isso também e a que a gente tô falando é de incubação in situ Então se vocês forem pegar aqui artigo é que eu citei para vocês ali dita mais lavar apps tem ela já fala disso lá e o que que é incubação in situ olha incubação in situ é a gente incubar os nossos as nossas isolados né no ambiente onde a gente um dia eles são normalmente encontrados por quê o que que acontece porque a maioria dos microrganismos não cresce quando a gente bota numa placa de Petri e é muito simples

porque as condições que lhe requer para crescer não estão ali representadas quando eu falo as condições pode ser que esteja faltando algum nutriente pode ser que esteja no te nutriente demais além do que ele precisa pode ser por exemplo Que esteja faltando um cofator pode ser que ele esteja falta sentindo falta de uma outra bactéria ou outro micro-organismo pode ser que ele sinta a falta de uma flutuação de um determinada de uma determinada temperatura ou por exemplo uma concentração específica de gás coisas que nós não temos como prover dentro do laboratório mas lá onde ele

normalmente se encontra Você pode então o que que eu tô olhando aqui né O quê que vocês estão olhando aqui se ficar esse negocinho aqui na ponta do meu dedo SSD dar um esquisito aí eu meu tá bom o que que é isso daqui olha isso e pode acho tá bem pequenininho obviamente cheio de furinhos Na verdade são três chapas de Aço como se fosse um sanduíche Zinho ali Clube Social tá toda furada Qual é a ideia aqui essa vai ser a nossa Câmara de cultivo né De que forma bem funciona mais ou menos assim

ó é dentro dessas dessas três camadas de Aço né na camada interna a gente coloca por exemplo o nosso agr com uma quantidade baixa de células um sejam pega o meu inóculo que normalmente por exemplo e a colocar ali para fazer um espalhamento na placa para desenvolver vamos voltar alguns slides atrás e aqui ó para crescer essas bactérias aqui que que eu fiz eu peguei o meu inóculo coloquei na placa espalhei né agora imagine que eu invés de eu fazer isso eu peguei esse mesmo e não óculo coloquei uma quantidade de água antes pouquinho antes

dele solidificar e Mergulhe a minha plaquinha ali dentro da minha placa ela vai ter dentro de cada um dos furinhos é a ver com um óculo e aí eu coloco uma membrana muito fina muito mesmo quanto Fina 0.03 micrômetros de poro E aí o que que acontece pessoal nesse processo Olha a gente vai ter células aprisionados dentro desse poro dentro desse buraquinho né E a gente vai ter uma câmera de difusão aqui então nessa câmera a gente consegue trocar gás a gente consegue trocar amor o que a gente tem troca de moléculas troca de substâncias

químicas troca de várias coisas mas não tem troca de microrganismos micro-organismo inoculado ficar aqui preso e vai se desenvolver aqui dentro sob a influência do ambiente no qual ele está colocado E aí esse esse que mim que a gente tá vendo onde fica uma membrana uma placa né aqui nosso nosso Suada com as nossas células outra membrane ó tá placa cada coisinha dessa é como se fosse um furinho desse ó Então vamos voltar aqui para gente lembrar Olha aqui eu não tenho três plaquinhas a gente bota aqui uma membrana no meio dessa uma membrana aqui

ó e vira uma câmera de difusão e isso daí pode ir para qualquer lugar que você queira bom então por exemplo aqui tá um dispositivo desse que é um pouquinho maior mas basicamente aqui o tamanho desse daqui ó é tão pequeno quanto Então como você que tivesse dois daqueles ao mesmo tempo né E eles estão aqui enterrando ela para que ele possa fazer isso e que possa ser incubado sobre o solo sob a influência por exemplo das raízes é aquele microrganismo que cresce melhor em um solo rizosférico que precisa por exemplo de Judá dos radiculares

que precisa por exemplo de uma sinalização com micro-organismos próximos da raiz ou por exemplo com fungos que estão ali presentes que fazem por exemplo uma associação do tipo mycorrhiza esses microrganismos eles vão conseguir crescer dentro desses dispositivos E aí depois que ele cresce ali dentro ele pa o estágio que a gente chama de domesticado E aí você consegue eventualmente fazer ele crescer no laboratório Então essas são técnicas que têm sido desenvolvidas para aumentar bastante o número de microrganismos que a gente nunca conseguiu antes é cultivar Então olha só Nesse artigo aqui com um artigo bem

legal né é relativamente simples mas que eles aplicaram esta técnica eles mostram a aplicação deste dispositivo para a seleção de microrganismos com capacidade de promoção do crescimento vegetal e de fato eles selecionam vários isolados tanto aqui o número de isolados que ele se relacionam tá vendo por exemplo com capacidade for usar fósforo produção de auxina né que são hormônios vegetais fixação de nitrogênio produção de sideróforos entre outros né E que os gêneros bacterianos que eles produzem e quem começou a estudar por exemplo esse tipo de coisa vai ver que normalmente o tipo de microrganismo que

a gente isola por aqui é totalmente diferente do tipo de microrganismo que a gente isola numa forma tradicional de cultivo Então qual é a qual é a mensagem que eu quero deixar aqui para vocês ousem na forma de cultivar seja de um jeito seja de outro seja de uma forma que eu nem estou aqui apresentando ainda mas ou sem cultivar para que a gente possa ampliar o número desses micro-organismos que a gente nunca cultivou e quem sabe a gente achar o nosso Santo Graal aí dos inoculantes que com certeza ainda tem muita coisa boa por

vir Ok legal que beber uma água deve uma água e depois vamos em frente E aí e vamos continuar falando de inovação mas a minha inovação agora é no outro processo eu não quero falar mais de inovação na forma do isolamento eu quero falar de inovação na forma de avaliar potencial bioquímico o potencial biotecnológico que esses microrganismos apresentam para a gente tá É porque bem a gente precisa ter ganho de escala na seleção das estirpes Olha a gente teve umas grandes evoluções em termos de biologia então por exemplo quem acompanhou sequenciamento genético viu que a

gente deve um ganho de escala absurdo né então a gente passou por exemplo para poucas sequências para milho hoje de sequências genéticas para a maioria das análises que a gente tinha a gente fazia pouco e escalou isso para a quantidade então a gente ganhou muito na maioria das formas de avaliar coisas laboratório uma das coisas que a gente é não evoluiu muito é na parte de avaliação de microrganismos então por exemplo eu já falei para vocês que normalmente a gente vai fazer uma seleção de microrganismos para promoção de crescimento vegetal a gente vai fazer alguns

desses testes né sendo que alguns desses testes na verdade são várias testes a coisa Às vezes calúnia e fica bem difícil bem e esses processos feitos da forma tradicional que eu particularmente só conheço laboratórios que fazem da parte tradicional e eu vou me incluir dentro desse processo Porque hoje eu tô fazendo a migração Mas até então eu sempre fiz isso de uma forma muito tradicional é sempre como é sempre colocando é muitas placas de Petri Então a gente tem 300 microrganismos são 300 para placas de Petri e vai fazer um teste tá beleza a gente

vai pregar sincronize vai passar para mais outras 300 placa de pré placas de Petri eventualmente você vai dividir uma placa no meio você vai dividir a plaquinha três quatro Mas dependendo do teste não não adianta fazer mais do que isso se você vai por exemplo fazer um teste quantitativo Então você vai crescer cada microrganismo por exemplo é no tubo eventualmente Não és neymaier esses e eles vão ficar ali às vezes em duplicata triplicado você tem um shake só vai caber por exemplo 10 microrganismos por vez porque 10 vezes esteja da 30 quando você começa a

pensar na quantidade na praticidade você vê que a seleção de microrganismos ele é um trabalho muito grande na verdade né Aí você vai avaliar esses caras aqui tá por exemplo teste colorimétrico aqui ó é PP thanou um por um preparando colocando um por um aqui ou no espectrofotômetro Mas você vai passar uma tarde inteira ele lendo no espectrofotômetro para ler uma dezenas algumas dezenas de microrganismo isso é um processo muito lento trabalhoso fora no preparo tudo né então assim só pra gente fazer aqui um exercício de imaginação Vamos pensar que que você tá lidando com

300 bactérias que você vai fazer apenas cinco testes peixe-pb nelas né bem Olha se você os dois testes decidiu placas que apesar de 600 placas possuir dois desse extensão tubo de aço 600 turbos se um desses testes e molecular já são 300 PCR só que daí você tem que lembrar e esses testes você nunca pode pegar se uma placa velho estirpe velho e fazer você tem que ser pegar uma estirpe nova cresci recém crescida tá cê vai fazer isso é para quando você fizer esse outro você vai voltar para cá e replicar de novo e

aí o que que acontece que esse processo ele vai repetir escalonando É quando você ver o número de placas que você vai gastar tempo e o dinheiro ele vira uma coisa assim realmente muito grande só quem trabalha com isso sabe e o pior de tudo é que você fazer um trabalhão enorme para no final Às vezes você teve uma tabela né eu tava assim ó é um trabalho um pouquinho grato quem trabalha com o cultivo sabe que é um trabalho um pouco ingrato ainda que é de extrema bom então eu falo a gente precisa melhorar

nisso e como que a gente melhora nisso né e venho de escala trabalhando no grandes quantidades todos de uma vez tá uma forma disso é por exemplo parar de trabalhar com grandes placas e com grandes quantidades e miniaturizar tudo por exemplo para placas de 96 Poços atualmente no meu laboratório tô migrando tudo para trabalhar com placas de 96 Poços e nada mais é diferente disso né claro que quando você trabalha com algumas poucas estirpes você precisa aí sempre que você precisa verificar a pureza a morfologia que se atentar você vai ter que ir para o

tradicional mas quando você tá fazendo seleção de um monte de coisa ao mesmo tempo dá para trabalhar tudo de uma vez como vamos dar uma olhada Olha que legal então por exemplo às vezes eu pegar cada de criotubos com gelatinas e passar para um tubo passar por uma placa começar a história toda ela só vem direto para placas de 96 Poços que a gente chama de gripe uau se você as placas mais profundas aqui ó tá bem até mais ou menos o e-mail e-mail 2 ml de acordo com cada placa todas as placas aqui a

gente pode preencher tem interpretador já mas automáticos que você consegue colocar tudo alguns que não são muito precisos São relativamente baratos né E aí olha aqui elas crescidas aqui que bonito a gente olha por baixo delas dá para ver direitinho onde que tá acrescido onde não tá você pode manter por exemplo controles para saber por exemplo se não está contaminado Então você mantém alguns poços onde você falou aqui só nos controles negativos aqui não pode crescer nada e você vai repicando eles inúmeras vezes e nesses lugares tem que se manter os controles negativos funcionando o

e desses carinhos aqui você pode eventualmente já passar eles vários meios de culturas então por exemplo exeque pode ser o meio para testar por exemplo a solubilização desculpa a minha ela minha realização de fitato aqui pode ser o meio para fazer solubilização Opá é o que fosfato é uma letra incrivelmente boa né pessoal e o sapato aí por exemplo esse cara aqui ó ele já pode ser um meio A por exemplo com apenas ACC para você é saber se ele tem atividade essa se verminase já esse daqui ele pode ser um meio por exemplo com

um grande quantidade por exemplo de uma substância que limite a atividade de água como por exemplo uma alta concentração de sal ou de um de um outro o de glicerol ou de um outro álcool por exemplo que mantenha uma atividade de água reduzida então com cada um desses meios você já vai fazer um teste específico esse aqui por exemplo já vai fazer um meio Onde você vai avaliar a produção por exemplo de ácido acético e as a repicagem desses caras né ela pode ser muito mais acelerado se você já vai usar por exemplo uma pipeta

multicanal ou até mesmo dependendo da disponibilidade de verbas do laboratório num pipetador automático jamais moderno né então só para gente tem ideia do ganho de escala disso por exemplo é o repicado 96 placas com certeza vai no mínimo uma tarde inteira aí uma pessoa bem treinada mas para você replicar 96 placas aqui basta 12 pipetagens com atenção com uma pipeta multicanal E olha que legal né é crescido nesses meios Você pode passar para testes quantitativos então por exemplo você tira uma alíquota desse meio de Cultura acrescido bota uma placa de Elisa coloco reagente e já

bota no espectrofotômetro que ele é uma placa inteira invés de uma amostra E aí ele te dá que a leitura de cada um desses pó é para falar Olha esses dois caras aqui são grandes produtores de uma substância x esses daqui são poucos produtores esses daqui são médios produtores e assim por diante Então você consegue ter um ganho de escala muito grande a Caio e a parte molecular a mesma coisa né então daqui direto você consegue por exemplo vou fazer um processo de extração de DNA e a parte de PCR ou por exemplo fazer um

PCR direto de colônia que depois pode ser submetido a uma eletroforese ou se você já tem uma maior disponibilidade de recurso essa pessoa ela já vem com uma PCR em tempo real e já tinha forma na hora que tá correndo se a presença desse Gene aqui ela é positiva ou não né se ele tem ou não um gênio no momento que ele tá acontecendo a reação Então são formas que a gente tem de Inovar e ganhar em escala a tua presença se tiver disponibilidade de verba você compra já um pecador automático como esse e faz

esse processo todo acontecer de uma forma muito mais acelerada e com controle muito grande né Depois você pode procurar isso YouTube Quem quiser me dar de aniversário eu tô querendo bastante um desse daqui tá bom Top Show respira tava mais uma aguinha e a top restaurou as energias legal então vamos em frente gente a gente entendeu aqui algumas coisas de inovação na parte de isolamento e a gente entendeu algumas coisas de inovação na parte de avaliação agora eu quero mudar um pouco o rumo dessa aula eu quero para outro tópico que eu queria falar com

vocês que a parte dos micro biomas tá bem eu já falei que um processo natural de trabalho é com inoculante segue esse fluxo né E aí também já falei para vocês que muitas vezes quando chega aqui ó nos testes in vivo que acontece muitas vezes o processo falha Caio Por que que o processo falha bem uma série de razões que processo Pode falhar mas eu vou dizer a principal razão pela eu sou falho o processo falha porque a bactéria funciona muito bem aqui ó na condição de vir in vitro uma plaquinha de Petri numa placa

de Piel no tubo de ensaio isolada do mundo numa condição de alta quantidade de nutriente de temperatura constante onde era o centro das atenções para funciona muito bem assim e na hora que vai para situação real onde o mundo é selva onde ela tá em junto com uma série de os organismos ela não consegue se adaptar porque o processo de inoculação ele envolve sobretudo a necessidade de adaptação que inocula uma planta É mais ou menos isso daqui ó e esse daqui a bactéria inoculada bom então é muito diferente trabalhar com ela sozinha no laboratório ou

pedir para ela funcionar bem nessa condição aqui então pode ser que ela caia da multidão a nossa festa de outro curto Pode ser aqui só galera a Buraca caia se esborracha no chão a festa da Carne por aí né tá a verdade é que uma das primeiras coisas que a gente tem que se preocupar é inoculante consegue se estabelecer nessa condição isso talvez não talvez mais essa é a pergunta na verdade mais importante de todas porque não adianta eu ter uma bactéria um sussurro Ultra efetivo se quando eu coloco ele na planta ele não se

não se instalar ele não se adaptar no chá da vida Inclusive tem autores que dizem que a qualidade do nosso produto é verdade mais depende do tempo que ele consegue se manter ali do que efetivamente se muito um pouco alguma coisa encontrei ou não muito mas ele tá falando junto comigo então vamos voltar para nossa história e aí por que que eu tô contando esse historinha aqui ó desanimar todo mundo tá fazendo aqui prospecção não é para contar para vocês que hoje a gente tem uma coisa maravilhosa que ajuda muito gente entende o que que

vai acontecer antes da gente fazer tá quer dizer que Deus tem bola de cristal não mas a gente já tem mais ferramentas para ajudar a gente avaliar a possibilidade de uma bactéria se adaptar ou não quando ela chegar aqui no meio da multidão como o sequenciamento genético olha só tá vendo esse buraco que eu tô mostrando para você né se melhor por aqui no gráfico real gerado por dados meus tá E aqui o que eu tenho o nesses pequenos que estamos aqui ó são gêneros tá só vários gêneros aqui ó vários e vários vários o

Misterio ideia esse primeiro que é mycobacterium tá só preciso saber pois aqui são os gêneros existentes dentro da raiz de uma Eucaliptos adulto lá em Seropédica dá um pouco mais a gente já publicados já é E aí o que que acontece né nesse trabalho aqui a gente envia o que a gente vê a maioria das Comunidades pouco no organismo esses caras aqui ó e eles representam uma proporção muito grande da Comunidade Há muitos organismo e eles não representam nada e estão praticamente número tá então é tipo distribuição de renda no Brasil ou no mundo todo

na verdade viu e o que acontece eu fiz questão de apontar dois caras que são muito conhecidos como promotoras de crescimento vegetal azospirillum e contou eventualmente esses caras se adaptam muito bem numa placa de Petri mycobacterium por exemplo não se deve ter também por exemplo esse cara aqui gente nunca valor nesse ambiente Então apesar desse cara ser muito algum grande ele não é isolado mas esses caras aqui eventualmente eles vão ser apesar de ser muito raros na realidade essa figura aqui obtida por sequenciamento genético e ela mostra mais próximo da realidade do que um cultivo

né então como é que foi feito isso daqui fui lá pedir amostro é mas seria mostro extraiu DNA de lá mandei você conhecer um gênio com bactéria descobrir como é que era comunidade no lugar é você que é um estudo de microbioma tá Oi e aí é o que eu quero chegar olha vamos supor que você curtiu o essa bactéria aqui ó o Joel E aí você fez os testes você viu poxa ela é mais isso é mais Aquilo é mais aquilo mas aqui o nosso legal essa daqui mesmo colégio Aí você pega ela e

joga ela na sua planta será que vai dar certo em cima comment e pode até dar certo eu particularmente acho que vai dar errado porque no meio de tantos micro-organismos Olha a capacidade de adaptação dele ó e o ranking de abundância nega o quanto estou na frente dele eu termos de abundância eu sei lá um cara tão raro seria o cara que fica tão pouco presente na comunidade Será que ele tem força para se impor ali Quando eu colocar aqui tem força para fazer o papel dele é sobrepor sobrepujar a força dos outros essa é

a questão que geralmente a gente pega né então o que que eu falo hoje é importante e que a gente ainda tá muito Capela inteiro nos assim de pesquisa no Brasil nesse tempo né que hoje a gente tem uma tecnologia incrível que não é tocar mais e a parte de sequenciamento genético de Nova Geração e que ela precisa ser aliada ao nosso processo de bioprospecção tanto por exemplo se lembra desse processo aqui a gente vai mudar então eu vou continuar fazendo a minha coleta o isolamento EA avaliação do potencial e vidro antes de ir para

teste no vidro eu vou fazer uma comparação Tá eu vou pegar aquelas aquelas minhas amostras na verdade é que as minhas amostras e eu vou mandá-los para sequenciamento né vou fazer você conhecimento você conhecimento para entender o microbioma E como que é isso eu vou pegar presente eu tô trabalhando com sorriso esférico pegar o solo rizosférico Você tá trabalhando com ele eu fico tenho sempre estimulando trabalhar quando eu fico eu vou pegar ele a comunidade não fica E aí eu vou dar sequenciar a comunidade microbiana dentro e entender como um quadro com uma foto como

que é a composição daquela comunidade mais do que isso eu quero saber várias amostras diferentes eu quero saber como que é a reprodutibilidade dessa comunidade o que que o que que está presente em vários organismos e várias plantas diferentes O que muda o que que varia de solo para solo o que que ele aguaria isso é muito importante para mim esse processo de extração sequencial e ele vai me dar uma avaliação do padrão do microbioma Isso aqui vai gerar uma informação muito valiosa essa informação ela tem que ser um critério de seleção para mim vamos

vão pensar naquela naquelas bactérias Olha se eu tenho várias bactérias como possíveis candidatos para o inoculante e ainda aquelas Não quando eu olho aqui no meu quadro né eu falo assim olha esse cara aqui tá lá atrás no ranking de abundância esse cara tá bem mais na frente tem que eu devo escolher olha e o cara que tá bem mais na frente ele tem muitas estrelinhas a mais porque a chance ele chegar lá e se instalar e fazer um serviço é muito maior a gente sabe que ele já tem uma tendência de ficar mais abundante

na planta aí você vai colocar ele numa condição fazendo jovem crescido bactéria tô falando né É é uma alta abundância populacional Aí sim ele tem uma condicionado tubo de brigar se estabelecer faz o serviço que ele precisa é esse essa informação que você precisa para trazer com o processo teste Vivo para aumentar as chances de sucesso aqui ok então vamos avançar de que forma que esse conhecimento do micro bioma pode me ajudar ele algumas perguntas que eu coloquei aqui para viagem né algumas delas quase microrganismos são raros e quais são mudas já deu para entender

os microrganismos a bumbum grandes em tese eles representam uma maior adaptação que eles conseguem se estabelecer frente ao juntos então eu vou postar algo mais as minhas fichas dos caras que são mais abundantes né outra coisa os quais ocorrem em muitos lugares e quais ocorrem só de vez em quando olha eu posso pegar um olhar cinco amostras daí eu faço uma média e vejo que de repente tem um organismo que ele é por exemplo sei lá quinze por cento da minha comunidade mas quando eu vou olhar direito é porque uma das amostras tinha oitenta por

cento da comunidade com ele e as outras amostras não tinha em direito por é provavelmente Aquele caso livro um carro de uma disbiose por um processo de um equilíbrio microbiano que causou é aquele caso estouro daquele microrganismo tô não só importante ser abundante mas é muito importante que ele ocorra em várias amostras diferentes várias plantas diferentes e me mostra que ele é um cara cosmopolita eu acabei de detectar um problema no show aqui mas voltamos muito bem continuando esses conceitos pessoal vamos lá é outra coisa sabe é muito importante a gente entender de como como

ele afeta o é afetado por outros organismos é Mais ainda como ele é afetado pela presença de uma determinada substância seu vou dar uma um exemplo prático já já para vocês e até mesmo com eficiência de colonização do meu inóculo então por exemplo é fiz um experimento e no colei minha bactéria dei um tempo para ela tá ali presente uma das formas saber se ela está ou não presente no meu na minha planta retirar uma amostra daquela planta e fazer você conhecimento para tentar encontrar de novo a bactéria que eu coloquei certo então essas sua

informações muito importantes que o conhecimento do microbioma pode e pode nos ajudar no processo de bioprospecção então tenham isso em mente Estudo e mais essa técnica que ela pode ser de extrema valia para vocês eu estou só um exemplo prático vamos relembrar aquele projeto no qual a gente viajou eu e a Carol a gente viajou aqui ó por tudo essa região aqui vamos voltando para poder pegar algumas amostras trouxermos para o laboratório fizemos a bioprospecção bem a gente pegou amostras atrapalhada Ibimirim e Caruaru né Cada uma região climática estilo diferente plantas cercados de formas diferentes

e a gente olho folhas raízes e solo rizosférico eu comprei mostra muito rapidamente para vocês a gente conseguiu fazer bem descrição de como era o processo é da composição taxonômica de cada uma dessas amostras bem aqui tá em nível de classe mas a gente água Isso aí até o nível de gênero não vou apresentar os dados porque não tem cabimento aqui a gente conseguir entender por exemplo né então mostrando aqui separadamente para vocês olha só que interessante né para gente ver como é que o microbioma funciona né É esse daqui eu vou começar por aqui

ó esse esse gráfico ele mostra como que a comunidade microbiana baseada no solo né que eu falo rizosférico esses gráficos a gente interpreta assim ó é quanto mais próximo mais parecido quanto mais longe mais diferente ó tá vendo que tem um monte de vermelhinho próximo significa que essa comunidade que Aparecida entre si aqui ó azulzinho Aparecida entre si e o verdinho Aparecida entre si com exceção dessas duas e para cá bem que a gente tá olhando aqui ó as amostras de solo de Ibimirim é as amostras Caruaru E o outro lugar já me esqueci qual

que era o nome da da outra cidade mas enfim cada cidade ela tem um padrão de microbioma muito específico o solo de cada lugar o microbioma do solo de cada lugar é diferente quando a gente olhava raiz né O Incrível uma da Raiz e já estamos nesse processo aqui ó olha só invés de cada um tá num canto eles o núcleo de todos eles já tá aqui ó no conjunto aqui ou no clube o que tá aqui o núcleo de outro já tá aqui ó já tem um processo de intersecção muito maior por isso que

eu falo trabalho quando eu fico apesar do solo ser diferente né É que eu tô falando de microbioma e microbiota do solo é diferente o microbioma da raiz é muito mais parecido e aqui ó microbiol E aí Tico endofítico das Folhas totalmente sobreposto tá vendo com exceção de algumas amostras que vão para fora maioria dos Amores está aqui no meio totalmente sobreposto a influência do solo na raiz tem menor influência ainda na folha menor influência ainda tá já mostrava para gente como é que era e os padrões de distribuição E olha que legal a gente

pediu para ele construir aqui ó como que eram as amostras dos gêneros que ocorriam que a gente chama de cor entre setenta e oitenta por cento das amostras ou entre 80 e 90 ou entre 90 e 100 olha se ocorre entre 90 e 100 porcento das amostras ocorre em quase todo mundo né então uma difícil ver essa daqui vão da somos um aqui para gente dar uma olhada Olha que legal que a gente tem um conjunto de gêneros né Então tá mostrando por exemplo que dentro desse banco de dados inteiro a gente tinha 152 unidades

está funcionando com as operacionais Então vamos falar assim a grosso modo né como se fosse 152 espécie gêneros é aqui que eram compartilhadas entre 90 oitenta por cento das amostras só para vocês terem ideia no total me mostras a gente tinha mais ou menos oito mil dessas unidades taxonômicas operacionais de 8152 eram compartilhadas Poxa Olha que ferramenta incrível que eu tenho aqui ó quando eu fizer minha prospecção de microrganismo e chegar lá no final eu vou sequencial DNA dele para saber quem é quando eu sequencial DNA eu vou conseguir atribuir aquele DNA sequenciado saber qual

o tio que ela pertence eu não conseguir saber qual o teu ela pertence eu vou saber por exemplo cada uma daqueles nos isolados se ela vai estar por exemplo entre essas 152 aqui ó se ela estiver já é uma ótima para não falar outra palavra é uma ótima característica para seleção da minha PGP vocês concordam final que imagino o centro de todas as moças comparadas e Aqui foram muitas amostras compradas tá só para vocês terem uma ideia Geral de como isso tudo pode nos ajudar E aí e a outra coisa né dizer que o experimento

que está sendo rodado agora é como um experimento que envolve sai é de salinização de solos que a gente é retirar o sal do solo que utilização dessa planta aqui ó que atriplex nummularia a gente quer botar bactérias para ajudá-la nisso que a gente fez lá o laboratório gente ali na casa de vegetação em três aqui uma foto que eu tirei esses dias a gente fez um experimento com dois tipos de solo e três níveis de salinidade ou seja nenhuma salinidade 10,5 cm por cm e 20 mil esse mês por centímetro é é uma medida

de condutividade elétrica seja salgado e muito salgados Vamos colocar assim a gente colocou essas plantas aqui para crescer a gente sabe que a planta tolera isso mas eu quero saber quais os microrganismos toleram então quando essas plantas tiverem mais adultas a gente vai olhar o microbioma e se determinadas bactérias estão presentes aqui ó Mas de repente quando chegou aqui ela sumiu essa bactéria Não serve por exemplo para compor o meu consórcio porque ela é sensível ou sol então mais uma das formas que a gente pode usar os estudos e me conta bioma para entender é

e nos ajudar no nosso processo de Bill prospecção top curtiram Espero que sim que é bom demais a hora do café respira medita a 16 legal último tema da aula vou falar sobre testes in vivo né não falar sobre testar as nossas bactérias que a gente selecionou com tanto carinho vamos ver como que isso acontece não estudar que legal só porque porque uma das coisas que mais surgem dúvidas né A maioria de vocês que estão assistindo as minhas aulas são de ônibus não são agrônomos e fazem pouco ideia de como cultivar uma planta É eu

também sou biólogo e apanhei bastante Até aprender o que hoje já acumulei ao longo dos anos né Tem um amigo meu Fabiano Balieiro lá da Embrapa deu aula no curso Ele falou que vai me dar um diploma de agrono porque já estou sabendo mais do que a maioria deles é pelo menos os que se informar bom mas voltando à nossa aula a partir de testes em vivo ela é muito legal pessoal porque é de fato quando a gente começa a ver as coisas funcionando ou não né e é legal porque mexer com planta é um

universo toda parte então primeira coisa que eu falo para você se você pretende mexer com um planta e o seu experimento comece a mexer com ela muito antes de precisar mexer com ela que você vai aprender com o tempo como trabalhar com ela é mas vamos em frente que eu quero falar sobre testes em vivo né então vamos abordar alguns desses itens aqui eu quero falar um pouquinho com vocês depois vou mostrar algumas coisas práticas né primeira coisa que algumas pessoas me perguntam né como eu posso ir no ocupar como eu posso pegar o meu

minhas bactérias e inocula a planta bem não existe uma única forma de fazer isso tá Existem várias formas para começar a primeira coisa que a gente tem que saber é como é a forma de reprodução da sua planta por exemplo a sua planta ela nasce a partir de sementes rosto a planta nasce a partir de mudinhas né então isso daqui já faz uma diferença danada no método que você vai usar para inocular a partir de sementes é um pouco mais simples a maioria das pessoas que utilizam e não óculos semente simplesmente bota um as sementes

e numa solução com o documento por algum tempo antes do plantio mais importante aí você trabalhar dentro de um protocolo tá E esse protocolo ele vai por exemplo levar em consideração Quanto tempo você deve deixar é em contato por exemplo Qual é a concentração de bactérias que você deve colocar nem sempre mais bactéria é melhor tá a gente já testou e a gente já viu que a resposta por exemplo no nosso caso gente trabalhando com o kaliptos em relação a concentração de bactérias ela é mais ou menos uma parábola assim ó é poucas bactérias tem

poucos efeitos uma concentração X tem uma resposta ao ótima uma concentração maior que isso passa ter um efeito deletério o sejam efeito prejudicial então isso tudo são coisas que a gente tem que utilizar a não meu processo na verdade eu prefiro inocular o O gato é uma opção viável também né então a inverso por exemplo de você no cla semente Você pode procurar o substrato Ah mas na verdade o meu no coração é no campo já então é melhor você no cla semente Ah mas o meu inóculo é Kombi o controle então às vezes é

por pulverização meu inóculo é sobre uma planta a gente vai criar uma muda bem pode ser simplesmente uma imersão da sua muda ou você pode fazer as duas coisas podem emergir muda jogar no substrato que quer dizer que não tem um único jeito tá o ideal é que vocês testem a gente já fez experimento só para testar formas diferentes de inocular e o que eu tenho aprendido é que faz bastante diferença é uma coisa interessante né que também pessoas me perguntam é o que que eu vou medir na planta que que a minha resposta da

planta eu vou dizer algumas coisas né as coisas que a gente mede com frequência é altura da planta são coisas legais que você pode acompanhando conforme ela tá viva mas isso depende do número de plantas que você acompanha é um certo número que dá para você medir a partir de um certo número já não dá mais para medir porque começa a ficar impraticável eu vou dar um exemplo mais tarde para você e outra coisa interessante de rede por exemplo taxa de sobrevivência especialmente se você começa com mudas né é uma resposta muito legal é saber

se as mudas morrem mais ou uma em menos com introdução do seu inoculante E aí não processo já destrutivo é muito legal a gente vê a biomassa a biomassa de duas formas a biomassa aérea Então você vai cortar as suas plantas vai deixar ela secar em né então ali mais ou menos entre 40 a 60 graus para secar mais perto de 60 não muito mais que isso para não perder carbono e aí ela seca você vai determinar o peso seco dela entendeu massa seca e a biomassa radicular que é muito importante mas é chato para

caramba porque você tem que lavar lá lavar a raiz minimamente para não tirar a parte da raiz mais fina tô dependendo de onde você cresce as raízes elas vão formando um emaranhado ia ser maranhando às vezes é muito difícil de você diz fazer sem quebrar mas a biomassa de raiz é uma coisa bastante legal de você minha e se você já tem uma planta que produz uma alguma coisa como por exemplo você tá trabalhando com soja o milho você pode por exemplo medir a produtividade dela você vai pedir por exemplo a quantidade de soja a

quantidade de milho que ela produz né no caso tá só é muito comum medir por exemplo é o número de nódulos enfim não tem um único uma única coisa que você pode acompanhar mas muitas coisas diferentes são interessantes também você pode pedir uma avaliação nutricional da planta entre outros fatores em quanto tempo devo levar um experimento e não muito não não não muito pouco porque não muito pouco porque as bactérias demora um certo tempo para colonizar e efetivamente fazer um efeito nas plantas Tá então não faça um experimentos com menos por exemplo de 30 dias

porque duvido que o dúvida é muito difícil a palavra mas dificilmente elas vão trazer uma resposta interessante para vocês quanto mais é por exemplo se você algumas plantas Elas têm tempos respostas mais ou menos padrão então chega na época da floração o na época do fruto etc e tal procura informações a respeito do tipo de planta que você tá levando né Às vezes você trabalha com a árvore Como é o meu caso não dá tempo da árvore chegar até adultidade dela até o fim do experimento né não nos que eu tenho feito mas às vezes

a gente faz pelo menos uns 90 dias 120 dias para ver o que tá acontecendo ó e aqui o mais importante de tudo quantas mudas eu devo usar a resposta é quanto mais melhor porque porque é muito variável uma resposta a gente é mesmo você partindo por exemplo de uma mesma genética mesmo você partindo de mudas etc e tal é efeitos biológicos são muito variáveis se você partir de sementes onde a gente tem variação genética ainda é pior ainda então quanto maior o seu número amostral mais fácil você detecta algum efeito mesmo assim é difícil

porque as variabilidades são sempre muito elevadas tá O Pulo sempre práticos que eu separei para vocês vou mostrar um experimento que começou pequeno e hoje tá enorme né com os meus a gente começou estudando eucalipto algum tempo atrás a gente desenvolveu um consórcio de bactérias para eles e a gente fez um experimento com 27 réplicas para cada um dos tratamentos para a gente ter controle que não tinha nada consórcio fertilizante e consórcio mais fertilizante tá isso aqui foi monitorado por 77 dias pela sua interessante né Isso aqui é a resposta na curva de crescimento bem

rápido para vocês então aqui é controle consórcio logo um pouquinho acima do controle mais nada demais fertilizante um pouquinho acima do consórcio nada demais e destacado na curva a gente tem o consórcio mas fertilizante ou seja o efeito dos dois ao mesmo tempo é um efeito de crescimento muito grande nas mudas e começou a ser significativa a partir do 35º dia por isso que eu falo olha cuidado com o tempo é importante dá tempo para as coisas acontecerem tá E só foi ampliando essa vantagem essas montagens elas acontecerão também por exemplo para biomassa de folha

de caules e de raízes algumas coisas por exemplo chegando a 65 por cento maior a presença do consórcio mais fertilizante em relação apenas ao fertilizante por exemplo próximo gente vê que é feito grande mostrando nas análises estatísticas estatísticas que a gente fez o efeito tanto do inóculo conto do fertilizante ou seja mostrar ficar importante botar os dois bom e que essa parte é importante não só para o aumento de biomassa mas é importante também na parte de sobrevivência olha que legal você quer o controle sobrevive a 70 porcento das mudas é que o fertilizante chegava

85 agora as que aplicavam o consórcio o consórcio mais fertilizante a gente tem uma sobrevivência que chegava a noventa e três por cento então superava e bastante é o crescimento né esse aqui era as foram as fotos dos experimentos e o queria que vocês repararam assim o seguinte né olha que todos os experimentos todos os tratamentos esteja quero Contra o Olho vou escrever aqui né ao contrário o tentar escrever melhor olha só Eu prometo que atrapalha aqui também esse negócio de fator de fugir pode viu Siqueira fertilizante ó e aqui era consórcio mais fertilizante Olha

só de olhar já dá para ver uma biomassa bem maior aqui né mas o que que é interessante se você reparar na foto que não tá das das melhores acho que eu vou fazer uma ediçãozinha vou botar um videozinho para vocês verem aqui tinha mudas Muito pequenas nesse tratamento e tinha mudas grandes desse tratamento mas tinha muitas mudas grandes nesse tratamento e tinham poucas muitas grandes desse tratamento mas a variabilidade enorme então é importante usar um número grande mudas para você conseguir ver porque é é invariavelmente a gente vai ter essas variações olha aqui ó

quantidade de mudas pequenas que a gente tem aqui no comércio ó subdesenvolvidas e algumas Bem desenvolvidas então isso essa diferença é o efeito biológico né então não importa o trata tô fazendo vão ter coisas que crescem muito bom ter coisas que crescem pouco por isso o número grande de mudas é muito importante e aí vou mostrar para vocês o que que aconteceu com esse experimento a gente se calou não daqui a gente foi para esse vídeozinho e com ele eu encerro aula de hoje e eu espero que vocês tenham gostado e se interessado por esse

tema que tem um legal que a parte de viu prospecção tá bom vejo vocês em breve beijo e até mais e isso é um concentrado de cinco bactérias cuidadosamente selecionadas levadas para viver de uma das maiores empresas de eucaliptos do país e diluídas no volume suficientemente Grande para que a gente pudesse fazer a inoculação de mais de sete mil mudas essa mistura cada uma das cinco bactérias foi reunida e bem misturada adicionadas a um regador e todos substrato foi generosamente regado a partir de então foi só plantar as mudinhas Olá neste experimento foram testadas várias

genéticas para avaliar o efeito das bactérias na promoção do crescimento delas se tudo der certo esse pode ser um passo importante para contribuir com a produção de mudas no nosso país