A ciência deu mais um passo em direção à cura da Síndrome de Down

nós estamos mais perto para a cura da síndrome de Down a síndrome de Down é uma condição genética também conhecida como a trissomia do 21 é uma condição muito importante porque ela é a principal causa de deficiência intelectual nas pessoas que acontece a mais ou menos de um a cada 700 Nascimentos aqui no Brasil problema é que essa síndrome até hoje ela não tem cura não existe como reverter o que causa essa síndrome que eu vou explicar para vocês daqui a pouco que é a trissomia do 21 significa que as pessoas T um cromossomo 21

Extra dentro das suas células quando elas têm essa síndrome até hoje não existe cura para essa condição no entanto um grupo japonês publicou um estudo muito recente mostrando que há um caminho para esta cura é sobre isso eu quero falar com você nesse vídeo mas é daqui a pouco depois da vinheta [Aplausos] [Música] [Aplausos] muito bem vamos lá antes de começar eu quero dar o meu recado de sempre aqui falar sobre a Locus a empresa de biologia molecular que serve para você que trabalha no laboratório se você trabalha em laboratório de biologia molecular não só

biom não só biomol mas principalmente biologia molecular se você trabalha num laboratório como esse a lox tem a solução que você precisa Com certeza porque a lox oferece soluções de todos os tipos e todo o fluxo trabalho da biologia molecular Desde da col vai dar amostra até lá na outra ponta falando de detecção de PCR PCR em tempo real de eletroforese alguma coisa para sequenciamento também passando por todos os equipamentos necessários aí para o seu laboratório dos mais simples como um vorttex uma pequena centrífuga até os mais complexos como eu falei para você PCR PCR

em tempo real e assim por diante eu vou deixar o link do site da locs aqui embaixo acessa aí o site Dá uma olhadinha no site deles que eu tenho certeza que tem alguma coisa ali que vai servir bastante para você com isso a gente pode começar o vídeo de hoje na verdade na verdade antes de começar aqui eu preciso te falar duas coisas a primeira delas é a seguinte eu respeitosamente não estou preocupado nesse vídeo em usar os termos mais socialmente aceito Politicamente correto em relação à síndrome de Down ou qualquer outra síndrome tá

Eu não estou preocupado nem a preocupação aqui com você é passar o conhecimento explicar o que foi feito nesse experimento falar Tecnicamente cientificamente e divulgar a ciência para você então então presta atenção se você é uma pessoa de bom senso e eventualmente se sentir ofendido com algum termo errado que eu usei posso estar falando cura que eu sei que tem gente que não vai considerar síndrome mal como uma síndrome prisa de uma cura eu vou falar o termo normal para alguma célula se você eventualmente ficar ofendido com algum termo que eu utilizei aqui nesse vídeo

eu já de antemão te peço desculpas mas se você é uma pessoa que não tem bom senso cara nem fica fica nem fica vai fazer outra coisa porque talvez esse vídeo aqui não te faça bem não que eu V fazer alguma coisa de propósito por desleixo não é porque eu quero usar a minha didática da melhor forma possível para que você entenda o que tá acontecendo aqui né O que aconteceu nesse experimento Beleza então dado esse recado Vamos para o segundo esse vídeo aqui a gente vai fazer num formato diferente eu vou começar contextualizando um

pouco desse experimento então ele serve para você para qualquer pessoa que não tem conhecimento sobre biologia molecular não tem conhecimento sobre genética ele serve para lei se você é uma pessoa técnica vai servir pra sua avó pra sua tia pra sua mãe assistir Se você tem conhecimento técnico vai servir para você também Então a primeira parte do vídeo eu vou explicar de forma resumida que foi feito nesse experimento e todo mundo tem condição de entender agora na segunda parte do vídeo eu vou fazer para você que é um profissional e quer aprender mais entender mais

profundamente o que foi feito nesse experimento aqui se você é uma pessoa leiga não é da área tá aqui de curioso para aprender sobre genética pode ficar na segunda parte do vídeo eu vou explicar aqui talvez você entenda alguma coisa umaa coisa outra ou não eu vou deixar outros vídeos complementares para você assistir vai ser muito bem-vindo mas eu vou me aprofundar mais Tecnicamente no artigo Nesse artigo que eu tô mostrando aqui na tela para vocês é esse artigo que que eu vou mostrar para vocês na segunda parte do vídeo eu vou destrinchar a parte

de resultados dele que acho que é uma das partes mais interessantes e a parte discussão também obviamente a introdução vai ser aqui mais relacionada à primeira parte do vídeo então beleza então esse vídeo aqui em duas partes primeira parte mais superficial com cara de divulgação Científica e a segunda parte mais cara de aula vamos destrinchar o ar artigo científico aqui você é mais que bem-vindo para ficar em qualquer parte que você quiser belezeira então vamos começar então eu falei para vocês né Nós estamos eu estava comentando aqui sobre a síndrome de Down também conhecida como

a trissomia do 21 essa é uma condução genética que acontece lá na formação do gameta né quando um óvulo espermatozoide aqui mas no caso o óvulo tá sendo formato acontece um tipo de divisão celular nesse processo chamado de meiose é durante a meiose que parte do Genoma vai para uma célula parte do Genoma vai para outra célula nessa divisão né Para que essas células sejam utilizadas na formação de um embrião lá na frente então a a os gametas eles contém metade do Genoma de um indivíduo aqui no caso nós estamos falando de humanos certo então

os gametas eles conterão metade do Genoma Metade dos cromossomos de uma pessoa beleza acontece que algum problema pode acontecer nesse processo da meiose quando os cromossomos eles estão sendo separados para suas para as respectivas células filhas e o cromossomo 21 aqui no caso Em vez dele separar e um e um cromossomo para cada uma das células filha dois cromossomos 21 eles vêm pra mesma célula filha e essa célula ela passa a ter Metade dos dos cromossomos metade do Genoma de um gameta normal mais uma cópia cópia Extra do 21 se esse gameta ele for utilizado

durante a reprodução humana né se esse se for o caso um óvulo for fecundado por espermatozoide essa fecundação vingar acontecer gerar embrião esse embrião que virá ser um bebê ele terá a trissomia do 21 significa que ele não tem as 4 os 46 cromossomos convencionais que uma célula normal deveria ter ele tem 47 ele tem as 46 23 que vieram do pai 23 que vieram da mãe mais uma cópia do cromossomo 21 uma cópia exra Extra que não deveria estar ali mas está e essa cópia Extra que causa a síndrome de Down a trissomia do

21 que é uma condição que era deficiência intelectual problemas cognitivos e vários aspectos físicos são bem típicos da da pessoa que tem síndrome de Down e como eu tava falando para vocês até então não existe a cura para essa síndrome só que esse grupo japonês eles fizeram um experimento muito interessante que eles conseguiram num ambiente de laboratório remover Justamente esse cromossomo Extra que não deveria estar ali Teoricamente ele não deveria estar ali e eles removeram esse cromossomo extra sem prejudicar a célula fazendo que a célula voltasse mais ou menos a funcionar normalmente esse Esse foi

um processo experimento extremamente complexo com vários Passos utilizando diversas técnicas de laboratório um experimento muito bom feito com muito cuidado pelos pesquisadores é bonito de ver o cuidado que eles tiveram nesse experimento e receberam um resultado bastante interessante que eu vou mostrar aqui para vocês para eles conseguirem realizar esse procedimento ou seja remover seletivamente um cromossomo não é um cromossomo qualquer veja dificuldade nós temos uma célula essa célula ela é normal com exceção de um cromossomo 21 que tá ali a mais não deveria est ali deveria ter duas cópias e tem três cópias do Cromo

um que veio do pai e duas que vieram da mãe provavelmente eh e tem ali essas três cópias que não deveriam estar esses pesquisadores eles conseguiram eh eliminar um cromossomo 21 específico de dentro dessa célula não foi um cromossomo qualquer e não foi um cromossomo 21 qualquer foi um específico que era justamente aquele que não deveria estar ali vamos dizer assim nesse momento e eles utilizar numa técnica que ela não é conhecida por fazer isso que é a técnica de crisper se você tá aqui no perfil mais tempo se você é da área de biologia

molecular já conhece a técnica de Cris prcas né que é uma técnica que talvez tenha sido aí o último grande feito em termos de laboratório em termos de manipulação genética A Última Grande descoberta as pesquisadoras que desenvolveram essa técnica elas ganharam o prêmio Nobel inclusive é uma técnica muito promissora porque quando ela foi difundida quando ela foi divulgada e ela serve muito bem para isso mesmo ela foi muito divulgada com como uma ferramenta para edição genômica que é fantástico né porque se a gente tá falando de DNA que é o livro de receitas da vida

se você consegue corrigir ajustar e arrumar esse texto o DNA o Genoma você consegue ajustar muitos elementos relacionados à vida então a técnica de crisper que ela é muito utilizada para edição genômica edição gênica que ela é conhecida para isso ela serve para outras coisas também se você não sabe o que é a técnica de crisper vou deixar dois vídeos aqui para você de recomendação primeiro é como funciona na técnica de crisper é um um vídeo que qualquer um consegue entender ele é super simples super didático que eu vou deixar aqui para você e a

outra é como a técnica de crisper pode ser utilizada quais aplicações podem ser realizadas por meio desta ferramenta tem um vídeo sobre isso aqui também né eu falei sobre edição genômica Só que nesse caso eh nesse grupo japonês nessa pesquisa japonesa eles utilizaram a técnica de crisper para fazer remoção seletiva de um cromossomo 21 Extra a técnica de crisper é uma técnica é eu eu eu deixei o vídeo aqui para vocês mas fazer um resumo só pra gente ter um um raciocínio organizado é uma técnica que utiliza uma nuclease nuclease é uma enzima que corta

DNA dupla fita aqui nesse caso tá nesse caso é uma é uma enzima que corta DNA dupla Fit então se você tem a molécula de DNA existe uma enzima que funciona com a tesoura ela vai lá no DNA pum e corta ele é uma nuclease ela faz isso ela tem essa capacidade só que existem diversas nucleares que fazem isso o sistema todo é chamado de ou só de crisper ou de crisper cas ou de crisper cas 9 porque existem diversas variações né mas o complexo a técnica crisper cas 9 ou crisper cas quem faz o

corte quem funciona como como tesoura Genética é a cas é o nome da enzima cas9 aqui no caso a cas9 existem diversas cas mas estou falando aqui da cas9 especificamente é a enzima que faz o corte lá no DNA beleza mas como eu tava falando existem outras diversas enzimas que fazem exatamente a mesma coisa vamos lá no DNA do pla fita pum e corta ele Por que que o sistema crisper cas é diferente de uma outra nuclease é justamente porque essa enzima ela não está sozinha essa enzima ela está associada a uma molécula de RNA

que é uma molécula parecida com o DNA ela diferente um pouco mas ela é parecida com a molécula de DNA ela está associada a um RNA e esse RNA chamado de RNA guia é uma molécula de RNA que serve como um GPS paraa caça quando a gente fala de uma nuclease convencional a gente tá falando de uma enzima que vai cortar o DNA dupla fita aqui dupla fita porque elas podem cortar diversos tipos de DNA fita simples RNA também mas não importa aqui eu falando de DNA DNA dupla fita aquele DNA convencional que a gente

vê nos geralmente aí nos esqueminhas né Eh essa enz essas enzimas elas cortam o DNA de maneira praticamente aleatória n elas não vão e cortam no lugar específico quando a gente tá falando de crisper cas a diferença é essa a cas ela é guiada por uma molécula de RNA que serve como se fosse um GPS e é um waz da C E que vai levar a c para uma região específica do genô ela não vai cortar qualquer região do DNA é uma região específica ela vai encontrar uma região específica um gene específico uma porção específica

do Gene vai fazer o corte Ali onde ela foi encomendada para fazer o corte então ela não se ela não corta em qualquer lugar Essa é a grande vantagem desse sistema ela é uma é uma enzima que faz cortes em regiões específicas do Genoma isso é interessante porque toda vez que uma casa ela vai lá e pum e corta o Genoma qualquer nuclease na verdade dentro da célula a a naturalmente aquela célula ela libera vários mecanismos de reparo da aquele DNA porque a quebra de uma molécula de DNA dentro de uma célula é algo extremamente

grave Isso não pode acontecer então a célula ela ela tenta reparar esse dano imediatamente só que quando ela vai fazer esse reparo ela comete alguns erros o sistema ele não funciona bem o reparo não funciona muito bem e é e e o a edição genômica o sistema crisper cas utiliza dessa propriedade dessa capacidade Meia Boca da célula reparar o DNA para fazer o que a gente faz aí com com essas diversas ferramentas diversas aplicações o utilizando o sistema crisper cas então no caso né geralmente o que acontece ali a enzima eh cas ela é guiada

por um RNA chamado de RNA guia que vai levar ela para uma região específica l de Genoma um gene por exemplo vai fazer o corte o DNA a célula vai tentar reparar aquele dano que foi causado quando ela repara esse dano ela repara Pode reparar aquilo de uma maneira meio errada meio banho à boca e aí acontecem diversas coisas nesse processo diversos feitos podem ser realizados a partir desse processo você pode por exemplo nocar um gene é um gene que tava lá funcionando você corta ele ele para de funcionar por exemplo ou você pode editar

um gene ele tinha uma sequência ali defeituosa uma mutação que não deveria est ali nesse sistema de corte você utilizando outros elementos ali DNA homólogo não importa agora ele consegue fazer a o ajuste a correção daquela região que estava ineficiente e nesse experimento aqui eles utilizaram esse sistema só que em vez de eles utilizaram utilizar um sistema Cris perc fazendo o porte de uma região x lá do Genoma eles utilizaram diversas dezenas 18 aqui no caso são 18 enzimas cas associadas com rnas liias diferente que foram diretamente no cromossomo a ser deletado eles não foram

nos outros cromossomos da célula nem nos outros cromossomos 21 que estavam corretos dentro da célula Eles foram no cromossomo 21 extra e eles fizeram vários cortes nesse nesse cromossomo nesse processo foram tantos cortes que muitas essas células não conseguiram recuperar esse cromossomo extra e ele se desfez dentro da célula a célula até Tenta recuperar a gente vai falar isso na segunda parte da aula até Tenta recuperar esse dano causado pelas enzimas ali massivamente no cromossomo 21 mas foi tanto dano em várias dessas elas foram tanto dano que a célula não consegue recuperar E aquele cromossoma

Ele se perde ele ele é clivado ele é destruído nesse processo restando somente os dois cromossom as duas cópias do 21 que deveriam estar ali então foi isso que esses pesquisadores japoneses fizeram eu tô aqui falando o resumo do resumo do resumo do que aconteceu ali dentro né mas o sistema todo que eles utilizaram o experimento ele utilizou diversas técnicas de laboratório para quem entende de laboratório a gente eu vou mostrar para vocês foi utilizado sequenciamento de Genoma RNA se sequenciamento de RNA foi utilizado Fish foi utilizado até análise de cariótipo né que é uma

técnica mais tradicional mais antiga né por meio de microscopia foi utilizado nesse experimento então Belo experimento extremamente elaborado utilizando os vá várias técnicas eu tô fazendo o resumo aqui é importante dizer que esse procedimento esse experimento ele foi realizado em células células cultivada em laboratório então não foi utilizado em um humano num bebê num embrião num animal não ele foi foi feito realizado em células no laboratório que obviamente uma limitação do experimento mas ainda assim foi a primeira vez que isso foi realizado e com vários controles na segunda parte da aula eu vou explicar os

diversos controles que eles utilizaram nesse experimento para garantir eh que a o cromossomo certo fosse removido que a não sofresse dano se sofresse que eles detectasse esse tipo de coisa aí então é um belo avanço aí para um passo muito importante paraa cura da síndrome de Down tá no começo ainda tem muita coisa a ser realizada mas foi um passo significativo diferente de tudo que tinha sido feito até este momento e claro que você não precisa limitar essa descoberta ou essa realização somente paraa eliminação do 21 você pode utilizar isso expandir esse raciocínio para outras

síndromes também para outras neup loidi né que são aquelas variações cromossômicas grandes dentro da célula então um belo experimento um grande feito com isso eu finalizei essa primeira parte desse vídeo dessa aula onde eu queria falar mais superficialmente sobre o que foi realizado agora eu quero entrar em detalhe um pouco maior sobre que como esse experimento ele foi realizado Quais foram os passos os cuidados os controles que os pesquisadores tiveram para conseguir realizar esse belo feito então mais uma vez todo mundo é mais do que bem-vindo para ficar na segunda parte da aula mas aqui

eu vou me aprofundar um pouco mais na biologia molecular de como o experimento foi realizado eu vou eu vou falar aqui do experimento Mas é óbvio não dá para dar todos os detalhes dele se você ler esse experimento esse artigo você vai ver que tem muito detalhe ali dentro mas é muito detalhe mesmo então que eu vou servir aqui mais ou menos se você quiser se aprofundar quiser ler o artigo ou entender um pouco melhor essa essa aula vai servir para você eu vou te ajudar eu vou te guiar na interpretação do artigo científico el

tem bastante informação ali Beleza então vamos lá vamos começar aqui eh então a gente táa falando né o problema da da trissomia do 21 a necessidade de escolher um alvo ali dentro a gente falou eu falei isso aqui para vocês né que a trisom do 21 ocorre quando há três cópias cromossom 21 no lugar de das duas cópias para corrigir essa anomalia os pesquisadores precisava eliminar uma dessas cópias é mais uma específica não é qualquer uma das três né Ele queria Eles escolheram um cromossomo falou Esse vai ser o nosso alvo depois que Eles escolheram

Esse vai ser o nosso alvo nós vamos fazer o corte eliminá-lo para para isso eles utilizaram células eles utilizaram dois tipos de células células já diferenciadas e eles trabalharam com células tronco induzidas então foi isso que eles utilizaram e o sistema de crisper cas como eu expliquei para vocês para fazer a eliminação né então aqui no caso objetivo vaganti que a eliminação não prejudicasse genes cuja expressão depende da origem materal paterna então no final das contas é vamos eliminar o cromossomo alvo não quero eliminar os outros cromossomos Esse era o objetivo aqui como que que

eles selecionaram o alelo esses caras esses pesquisadores eles anteriormente a esse experimento eles já tinham desenvolvido e modelo celulares essas células que eles utilizaram com todas as configurações de cromossomo células triploid que foi os que eles utilizaram no experimento células diploide no qual um dos cromossomos Extra que veio da mãe foi eliminado o células outras células de diploide com outro cromossomo Extra que veio da mãe eliminado e células diploid no qual o cromossomo paterno foi eliminado eles já tinham essas células já parados que eles tinham realizado em outro experimento isso foi importante para eles conseguirem

desenvolver o que eles vieram fazer aqui tá E aqui nesse experimento eles chamaram essas células n de de p m2 M1 e eles os alelos também o nome das células eram esses o nome dos alelos dos cromossomos nas células também eles chamaram de p m2 e M1 e Eles escolheram não eliminar o p que é o que tinha vindo o pai e e eliminar um dos da mãe ou M1 ou m2 e aleatoriamente Eles escolheram o m2 beleza aí conhecendo esse cromossomo m2 eles desenharam Os rnas guias né porque o RNA guia ele pode ser

customizado ele pode ser desenhado em laboratório é o RNA que vai guiar a casa até o alvo lá então e quando você trabalha com crisper você desenha um RNA guia assim como se desenha um primer numa PCR numa PCR em tempo real você pode desenhar um RNA guia para colocar aí dentro do sistema então Eles escolheram o m2 e eles sequenciaram todas essas células que eles tinham ali com isso né com essa variação de de informação do sequenciamento eles conseguiram identificar a sequência do m2 a sequência do cromossomo m2 que era o alvo de de

destruição deles que é uma dificuldade né porque se você pega uma célula e você sequencia o Genoma de uma célula você não sabe se tá sequenciando o cromossomo que veio do pai ou o cromossomo que veio da Mãe você vai tá sequenciando tudo misturado né dado vem misturado não vem estratificado é difícil separar então eles precisavam dessas células aí para descobrir a sequência específica do m2 para depois que eles tivessem essa sequência eles desenhassem o RNA guia para clivar para cortar para fazer o dano somente nesse cromossomo Beleza então aí depois que eles tinam a

sequência eles conseguiram desenhar o RNA guia tiveram a sequência ali do do m2 dos outros cromossomos também eles tinham a sequência obviamente Mas eles tinham do m2 que era o alvo deles eles desenharam uma cacetada de RNA na verdade el eles desenharam na em só software né Primeiro eles desenharam em software esses RNA guias não produziram diretamente no laboratório mas desenharam ali uma cacetada mais de 1000 E aí eles foram eliminando que não eram bons alguns Alguns RNA guias não eram específicos porque você pode desenhar um RNA guia para chegar a numa região específica do

cromossomo do Genoma mas ele pode eventualmente se ligar em outro lugar especificamente também então eles foram eliminando todos esses que não eram bons e deixaram ali só aqueles que funcionavam mesmo de vários testes que eles fizeram eles acabaram dos milhares que eles desenharam eles acabaram produzindo 18 e foram esse esses 18 que eles usaram para picotar o o cromossomo extra lá cortes cromossômicos induziram a perda do cromossomo já falei isso aqui para vocês então eles pegaram esse Eh esses 18 RNA guias rnas guias Associados às suas devidas cas colocaram isso dentro da célula não importa

agora lá eles fizeram eletroporação enfim você enfia esse negócio dentro da célula e o RNA guia vai guiar a casa até onde que ela tem que cortar e esses esses eh rnas nessas casas fizeram os cortes al nas regiões específicas e os resultados mostraram que quanto mais corte maior a atxa de eliminação isso aqui foi um negócio interessante porque eles testaram eles queram saber pô quantos desses 18 RN que a gente tem aqui que a gente vai precisar usar para chegar a eliminar um cromossomo né Será que um corte serve Será que eu desenhar um

RNA guia colocar ele associado a uma C fazer o sistema crisper C cortar um pedaço do cromossomo é o suficiente para eliminar esse cromossomo então eles testaram com um corte com dois cortes com três Eles foram testando com vários até 13 acho que n uns 13 cortes eles testaram eles viram que quanto mais corte o cromossomo sofria maior era a taxa de destruição desse cromossomo Então os resultados mostraram que quanto mais cortes maior a taxa de eliminação com 13 cortes resultando numa remoção de cromação de 13% da célula então quando eles faziam os 13 cortes

que foi o máximo né que eles utilizaram 13% das células tinh o cromossomo extra e eliminado Então as outras células não tiveram ali o cromossomo né então não foi 100% de eficiência n isso aqui também é um problema desse método pô não dá nem falar que é um problema os caras estão começando agora mas é uma limitação né então não tem 100% de eficiência mas quanto mais corte maior a taxa de eliminação do cromossomo além disso a estratégia específica para o alelo aa O que significa o seguinte eh eles fizeram dois tipos de de corte

né dois tipos de RNA guia foram produzidos ali uns rnas que iam especificamente pro cromossomo m2 que é o que eles queriam destruir e outro como um sistema de controle eles utilizam Aram eh RNA guias que cortavam todos os cromossomos em diferentes porções para ver o que que acontecia eles descobriram quando você fazia essa essa abordagem específica RNA guia pro m2 em região específica a taxa de eliminação era muito muito maior do que quando fazia essa abordagem mais aleatória a inibição de gênes de reparo aumenta a eliminação induzida do cromossomo isso aqui também foi um

negócio interessante que eu falei para vocês né que quando o DNA ele sofre um dano vai lá o sistema crisper cas pum faz o corte no DNA a célula tenta reparar aquilo imediatamente né que é um erro grave acontecendo ali existem diversas enzimas que fazem seesse processo de reparação do DNA que que os caras fizeram aqui foi muito interessante beleza vamos dificultar a vida da célula eles pegaram dois desses genes que são responsáveis pelo reparo do DNA quando ela sofre um dano e silenciaram esses genes utilizando RNA de interferência né nem comentei então Ó eu

já falei lá atrás eh de técnicas que foram utilizados aqui eles eles começaram com sequenciamento de Genoma eles precisaram fazer o sequenciamento de Genoma para para identificar a sequência dos cromossomos todos eles trabalharam com clonagem aqui que eles trabalharam com vetor e etc que eu não tô dando detalhe fizeram eletroporação sistema crisper cas aqui eu já tô mostrando RNA de interferência que eles utilizaram para silenciar RNA de interferência é um sistema que silencia genes temporariamente aqui no caso eles selecionaram dois genes que estão relacionados ao reparo do do de dano e do DNA né quando

o DNA sofre um dano eles fazem um reparo do DNA eles silenciaram desses dois gênes para dificultar eu vou quebrar Dee Jou pra célula eu vou quebrar um dos seus cromossomos e vou dificultar que você Resolva o pepino foi isso que eles fizeram aqui eh então foram esses dois genes aí né esse nem sei como é que fala po lq e o Lig 4 não sei se assim pronuncia eles inibiram esses dois gênes aí para dificultar a o reparo do do dano e aumentou e deu certo quando eles fizeram isso quando eles silenciaram esses gênios

aumentou em 2.65 vezes a taxa de eliminação do cromossomo alvo muito bom e aí como exatamente o cromossom 21 foi eliminado após o corte Beleza o cromossom 21 foi cortado ele foi picotado ali pelo sistema crisper cas em diversos pontos né de 13 pontos 18 né 18 pontos diferentes não 13 13 pontos diferentes e beleza como é que eles como é que isso aí foi cortado então eles descobriram que os cortes levavam a perda do cromossomo inteiro Eles não sabiam né se o corte ia só quebrar ali um pedaço do cromossomo se ele se ia

rearranjar se ele ia reestruturar se ele ia se quebrar por inteiro eles descobriram quando eles faziam o corte ali eles faziam a perda do cromossomo inteiro e eles eles fizeram um experimento para detectar a a quebra do cromossomo inteiro utilizando Fish que é outra técnica mais uma técnica aqui que são sondas que se associam ao cromossomo Elas têm elas emitem uma fluorescência uma cor específica você consegue identificar regiões específicas do cromossomo não é uma análise de DNA um pouco mais macroscópica vamos dizer assim é tudo microscópico a mas estamos falando de biologia molecular lá especificamente

em tubinho então é uma uma técnica visível né com microscópio Mas ela é visível E aí eles chegaram à conclusão que a quebra acontece porque o centrômero do cromossomo Em algum momento ali Acho que ele se não me engano ele é destruído e a célula não consegue durante a divisão celular puxar o cromossomo porque ela quando acontece a a mitose tá acontecendo né os os cromossomos eles são puxados para as extremidades das células filh para dentro das células filhas que serão formadas pelo pelo centrômero como havia destruição do centrômero esses esses cromossomos eles não conseguiam

ser levados para células filhos foi assim que eles descobriram como o cromossomo 21 foi eliminado aí depois eles tinham que ter certeza que o cromossomo que foi eliminado era o m2 e não o outro CR que eles sabiam que era o m2 né aí nesse caso eles isso aqui foi legal para caramba é outra técnica aqui já eles pegaram e criaram um sistema de marcação fluorescente daí cada um dos dos dos os cromossomos 21 que eles tinham eu falei para vocês que eles tinham lá as células que eles produziram anteriormente né então eles conheciam muito

bem a sequência do P que é o orcom paterno né que veio do pai o M1 e o m2 Sabi muito bem a sequência só que não só sab a sequência eles modificaram esse Genoma esse cromossomo geneticamente e esses cromossomos eles passaram a a sintetizar eles tinham um gene que passava a sintetizar uma proteína fluorescente um que emitia fluorescência então cada cromossomo emitia uma cor diferente eles eles geraram esses cromossomos geravam luz que eram proteínas fluorescentes né então aqui eles criaram um sistema de marcação fluorescente onde cada copa do cromossom emitiam brilhava com uma cor

diferente aí depois da edição né depois que eles fizeram corte lá nas células aí eles verificaram que somente a cor verde desaparecia a cor verde era do cromossomo m2 os outros cromossomos ficavam ali brilhando ainda bonitinho então eles confirmaram que o m2 era o cromossomo de interesse né monte de controle para saber você nós estamos falando de célula de cromossoma é muito controle que você precisa ter para saber o que que tá acontecendo ali e edição genética causou alguma anomalia cromossômica porque quando o sistema crisper atua Talvez ele não atue somente naquela região eh que

ele foi desenhado para atuar Pode ser que ele atue em regiões inespecíficas são os cortes offsite que acontec ão região são cortes inespecíficos que não deveriam acontecer ou e se você faz uma um corte mesmo que seja na região específica né Será que tem alguma anomalia que acontece na célula eh né Depois que esses cortes acontecem Será que existe alguma aneuploidia que pode ser gerada ali uma perda de uma perna de um cromossoma restante fica inteiro então eles pegaram e fizeram para verificar se os outros cromossomos né os outros cromossomos que não eram Alf do

sistema Cris perc se eles tiveram algum tipo de dano E para isso eles utilizaram cariótipo mais uma técnica técnica mais tradicional zona aqui de genética né mas utilizando um cariótipo banda g a primeira coisa que eu fiz no laboratório na na minha vida foi isso daqui cariótipo por banda g e a eles verificaram que não não teve nenhuma nenhuma modificação estrutural neolia cromossômica nos outros cromossomos mas beleza não é somente grandes variações cromossômicas ou grandes anomalias cromossomas que importa Será que pequenas mutações também eh não foram adicionadas em outros cromossomos que ficaram remanescentes na célula

Ou aquelas células que não tiveram 21 é destruído completamente né que isso é interessante também mesmo raciocínio né crisper cas ele é específico mas tem os seus erros e eles verificaram que sim algumas células realmente o cromossomo 21 m2 que não foram completamente destruídos eles tiveram mutações a a o sistema causou mutação na verdade era até esperado né que causasse algumas mutações ali e o que que essas mutações podem ocasionar num indivíduo né na célula beleza mas e no indivíduo se eventualmente isso aí fosse extrapolado por uma pessoa né Tá longe disso né Tá longe

disso mas é eu acho que é a ideia né é fazer isso Então esse foi um problema que de experimento também a remoção do cromossomo Extra restaura expressão normal dos gênes na célula isso aqui é outra pergunta Beleza você foi lá cortou o cromossomo que tava a mais e aí que acontece com a célula ela volta normal ela continua com comportamento que não deveria Será que geneticamente ela fica funcional Será que seus gênes voltam a se expressar normalmente E aí para isso aqui foi mais uma técnica técnica de RNA Sec sequenciamento de RNA né E

e aí eles verificaram receberam um resultado muito interessante os resultado mostraram que os gênes voltaram a ser expressos em níveis normais depois que o cromossomo foi eliminado o cromossomo Extra foi eliminado especialmente isso aqui que é legal eh os genes relacionados a metabolismo e sistema nervoso que é justamente são justamente eh áreas que são prejudicadas pela síndrome de Down né interessante isso aqui que eles receberam como resultado muito bem mas mas aí eu esta falando para vocês né que esse experimento aqui ele foi realizado alguns tipos de células que eu tô mostrando aqui para vocês

até agora foram as células tronco induzida Mas será que célula diferenciada também o processo funciona aí eles utilizaram fibroblasto uma célula já diferenciada porque uma coisa você fazer essas modificações Numa célula tronco que ela se divide mais rápido ela tem um mecanismo de reparo mais interessante é uma célula diferente né ela tá é uma célula que tá pronta para acontecer uma célula que já parou de se dividir ou se divide muito pouco é uma célula que não se divide ví mesmo Será que ela será que o processo funcionaria ali e aí eles fizeram isso em

fibroblasto e verificaram que sim resultado mostraram que mesmo uma taxa muito parecida né 3.9% das células que perderam o cromossomo eh perderam o cromossomo Extra após o tratamento confirmando que funciona em outros tipos de células também e isso aqui tudo que eu tô falando para vocês É voltado aos resultados do experimento tá então eu mostrei aqui os resultados do experimento isso aqui se você for ler a parte de resultado que é a maior parte do do artigo é isso que eles estão discutindo ali de uma maneira muito mais profunda né que foi um resumo eh

mas aqui fala um pouco da discussão do artigo então o que que foi descoberto nesse estudo né um resumo do que a gente viu até agora então é possível eliminar seletivamente um cromossomo esta usando crisper cas um negócio interessantíssimo n é qualquer cromossoma é um específico E aí eles utilizaram esse método específico e o método não específico o método específico foi aquele que funcionou melhor n não são cortes aleatórios em qualquer cromossomo é corte específico em cromossomo espec cífico então funcionou melhor a perda do cromossomo Corrige a expressão gênica a gente viu ali né agora

recentemente e o método funciona não apenas célula tronco também funciona para células diferenciadas muito bom esses achados provam que a tec pode ser uma abordagem promissora para tratar tsom do 21 e outras aneuploidias de novo né não tá pronto para utilizar isso na clique nada disso tá longe disso mas pô é um primeiro passo muito importante Dan disse que pode ser uma abordagem interessante no futuro e os desafios e limitações primeiro a gente tá falando de uma eficiência ainda muito baixa né 13% ali um pouco mais de 13% que acontece com as outras c tem

que aumentar essa eficiência de algum jeito ainda é aquelas mutações que aconteceram né como corrigir essas mutações mutações não pode acontecer você vai corrigir uma célula na uma célula ela tem que todo o resto que não foi atacado pelo sistema tem que se manter em ordem né não pode ter mutação gerada Alin como garantir que a remoção do cromossomo aconteça de forma controlada eh não não basta você remover um cromossomo tem que ser aquele cromossomo específico certo não você não quer causar danos dentro da célula e o desafio para aplicações humanas tem vários ainda né

Nós estamos falando de alguns tipos de célula aqui tem que testar em outros tipos celulares e cara tem muita coisa para fazer Tá longe disso mas de novo né promissor e como ela pode ser utilizada no futuro pode ser utilizada paraa terapia na trissomia do 21 odc não sei como é que isso vai se desenvolver talvez a gente veja e aplicação para outras anid dias eu falei também lá no começo não necessariamente precisa focar só na síndrome de Down nessa trissomia existem outras condições genéticas que se podem tirar proveito desse desse estudo aqui também dá

para fazer estudo sobre o impacto da perda do cromossômica até um pouco nesse estudo aqui fala né sobre isso dá para ter algum umas análises como foi feito lá por RNA Sec da expressão gênica e do impacto da perda de um cromossomo e a possibilidade de edição genética em embriões eventualmente no futuro para corrigir aneuploidias alguma alteração genética que não deveria estar ali muito bem Olha só se você chegou até aqui nesse vídeo eu entendo que você gosta de crisper você tem interesse saber mais sobre isso eu vou te dar uma excelente oportunidade de aprender

crisper mais profundamente não sei se você conhece o clube do DNA Clube D é uma escola online de biologia molecular tem diversos cursos aulas tudo voltado paraa biologia molecular para profissionais que querem se aperfeiçoar nessa área e querem aprender mais querem se capacitar se diferenciar aí no mercado de trabalho afinal de contas aprender saber biologia molecular não é um diferencial profissional ele é um pré-requisito de tão importante que é saber essa matéria e Existe um curso específico dentro do clube DNA que é sobre crisper introdução a técnica de crisper é um curso básico introdutório para

você quiser saber mais sobre crisper Assiste esse curso vai lá no clube DNA assina o clube DNA se você não quiser assinar você pode testar por S Dias grátis Testa o clube ver se você gosta mas assista o curso que eu tenho certeza que você vai aprender muita coisa que eu falei aqui você vai ver lá é em muito mais detalhe obviamente eu tenho certeza que você vai gostar então Conheça o clube DNA vou deixar o link aqui na descrição do vídeo também corre lá Lembrando que nem tudo na vida é genético mas quase tudo

[Aplausos] [Música] tchau n [Aplausos]