estimadas y estimados estudiantes les doy la bienvenida a una nueva práctica en el laboratorio de reproducción animal el día de hoy aprenderemos cómo procesar y evaluar y congelar semen de diferentes veces el procedimiento que nosotros debemos seguir para culminar con esta práctica es el siguiente en primer lugar vamos a realizar una extracción del semen la cual tiene que ser pues de preferencia con una vagina artificial el segundo paso va a ser un análisis tanto macro como microscópico en donde vamos a ver la calidad de semen que tenemos y vamos a realizar varios cálculos el tercer paso de no hacer una pre de ilusión 1 a 1 vamos a ver si lo realiza el cuarto todos restos acondicionamiento posterior a eso vamos a realizar la dilución final el empaquetado y el sellado del semen la congelación y por último podemos realizar un análisis dentro de los equipos y materiales que nosotros necesitamos para esta práctica tenemos cómo les había dicho vaginas artificiales existen varios modelos dependiendo de la especie de en la que vayamos a trabajar pues tenemos una máquina artificial para bovinos esta es una vagina artificial para caprinos para bovinos tenemos todo el equipamiento de lo que tiene que ver artificiales también necesitamos agua destilada esta tiene que ser un agua de alta calidad agua destilada ocupada en el laboratorio necesitamos también diluyentes de semen ya vamos a conversar acerca de los tipos de diluyentes existen diluyentes que utilizan yema de huevo otros que no la utiliza necesitamos material de vidrio vasos de precipitación probetas también necesitamos unos tubitos de micro centrífuga necesitamos un separador de yema de huevo papel filtro también un agitador magnético con su respectiva varita de excitación necesitamos un termómetro un termómetro para medir las diferentes temperaturas y además un termómetro ambiental que también nos va a servir para tomar la temperatura del ambiente un pequeño término de transporte que vamos a utilizar al momento de de media ley acumulados un contador digital decir unas necesitamos un perímetro digital o papeles o tiras de ph una platina calefactor para microscopio un microscopio óptico en el caso de que no tengamos un contador digital de células vamos a utilizar las cámaras de newark conjuntamente con el contador manual de espermatozoides necesitamos placas portaobjetos placas cubre objetos la tinción de osimani resina necesitamos un set de micro pipetas puntas para micro pipetas para la parte final necesitamos una bomba de evasión necesitamos una jeringa también partidas que es donde vamos a trabajar sm tenemos dos tipos de dos capacidades partidas de 0. 5 centímetros cúbicos y partidas de 0. 25 de primeros cúbicos necesitamos polvo polivinílico para el sellado de las patillas entrar es el lugar en donde nosotros vamos a colocar cada una de las páginas un cooler o una caja de espuma pues para hacer la congelación esta vez lo vamos a hacer de forma manual y también necesitamos tanque un tanque de nitrógeno líquido que contenga precisamente el nitrógeno líquido que va a ser nuestro congelante en este caso para la preparación de los diluyentes y la dilución del semen necesitamos usar estéril en este caso nosotros vamos a utilizar un área que tiene lámparas con los ultravioleta luz que es provista por más lámparas de cuarzo entonces estamos ultravioleta va a cumplir la función de mantener todo el procedimiento este es así como se debe hacerlo en este caso la recomendación es utilizar gafas que tengan protección ultravioleta no se puede reservar a la luz durante mucho tiempo directamente siempre con el uso de gafas y guantes como nosotros habíamos visto ya en el vídeo anterior en donde les expliqué la evaluación de machos para mejorar su fertilidad pues nosotros vamos a utilizar una vagina artificial la cual pues es un tubo que puede ser en diferentes materiales en este caso es un tubo de caucho el cual a su vez tiene una camisa tiene también un color recolector el tubito recolector el cual es un tubo graduado y además tiene unos aros de seguridad el proceso para armar tradición artificial pues es muy sencillo no lo que se hace es introducir la camisa por el interior de la vagina artificial para nosotros tener esta forma una vez que está así lo que nosotros vamos a hacer es con la ayuda de otra persona doblar estos extremos para a su vez hacerlos encajar en la vagina artificial y nos quede pues completamente seguro una vez que nosotros tenemos los extremos ya asegurados lo que vamos a hacer es colocar estos anillos de une para que ejerza una mayor presión en la vagina artificial una vez que nosotros tenemos ya asegurado la camisa de nuestro ángel artificial lo que nosotros vamos a hacer es a proceder a llenar de agua la vagina artificial y también a regular su presión con la introducción de aire nosotros vemos que exista bastión artificial pues presenta una pequeña válvula tiene una válvula grande que es pues precisamente el orificio por el que nosotros vamos a introducir el agua más o menos para llenar nosotros una versión artificial de bovino necesitamos alrededor de un litro del agua la temperatura del agua también es muy importante el agua debe estar a 45 grados centígrados al momento que nosotros la ponemos en la vagina artificial una vez que nosotros sentimos que las paredes comienzan a llenarse con el agua lo que hacemos es regular la presión introduciendo aire por este otro canal que tiene la vagina artificial que es justamente para la introducción del aire esto lo vamos a hacer soplando por este conductor y nuevamente pues vamos a asegurarlo para que quede completamente sedada con la presión y temperatura que se requiera [Música] y a su vez hacer la colecta del cemento finalmente lo que vamos a hacer es adaptar nuestro recolector el cual tiene en su extremo el tubo graduado este tubo pues para el momento de la colecta se recomienda que sea un tubo plástico el cual tiene una tapa rosca que va a asegurar el semen y lo cubrimos todo con papel aluminio para que esté protegido principalmente de la luz solar este procedimiento pues lo vamos a realizar con mucho cuidado siempre utilizando los materiales de bioseguridad sea cual sea la especie en el caso de vaginas artificiales más pequeñas como la que les está mostrando pues el armado es muy similar tiene una camisa protectora la cual es un poco más pequeña un cono de recolección y al igual que aquí pues se tiene un tubo colector entonces es la manera correcta de armar la original difícil una vez que nosotros hemos conectado el semen tenemos la muestra de semen en nuestro tubo graduado lo que hacemos es precisamente por eso les recomiendo que utilicen tu voz con tapas y vamos a tener un termo de transporte el cual va a tener una temperatura entre 36 y 37 grados centígrados con ayuda de un termómetro nosotros vamos a monitorear esta temperatura y lo que nos va a ayudar a la finalidad de este tema pues es mantener la temperatura del semen a nosotros llegar al laboratorio a nuestro lugar del procesamiento debemos tener un baño maría el cual estará graduado a una temperatura de 37 36 o 37 grados centígrados y pues precisamente tendremos una gravedad en donde nosotros vamos a colocar nuestra muestra de semen y la vamos a tener en esta temperatura hasta nosotros realizar el análisis tanto macroscópicos como microscópico es recomendable que la temperatura no varíe porque si es que nosotros tenemos variaciones de la temperatura todo el proceso va a fracasar entonces los espermatozoides son muy sensibles a los cambios de temperatura y siempre se deben procurar mantener una temperatura uniforme sobre todo en el proceso antes de que se llegue al acondicionamiento una vez que nosotros evaluamos las características microscópicas como sobre el volumen del ph el olor el color determinamos que todo está normal procederemos a realizar el análisis microscópico para la nueva de utilizar en primer lugar el contador digital de células oa su vez las cámaras de mi bauer ustedes recuerden en la práctica anterior nosotros aprendimos cómo calcular la concentración espermática utilizando las cámaras de nigua wear en este caso va a ser exactamente igual nosotros vamos a hacer una dilución en un tubo de micro centrífuga de unos doscientos vamos a colocarlo en las cámaras de mi bauer vamos a hacer el contaje y según eso nosotros vamos a determinar la concentración espermática existen varios tipos de clasificación en cuanto a la concentración espermática en donde se tienen semen de buena calidad de mala calidad de excelente calidad en la presentación que les estoy haciendo pues precisamente hemos conversado acerca de este calculamos la concentración espermática al mismo tiempo vamos a hacer el análisis de motilidad masa la motilidad individual y también de malformaciones entonces mediante esto nosotros vamos a tener ya realizado un análisis tanto macroscópico como microscópico del semen [Música] i cuando nosotros hacemos esto hemos analizado el semen lo que procedemos a hacer es a preparar el diluyente para realizar lo que se conoce como la pre dilución 11 esta pre dilución consiste en realizar una solución antes de la solución final del semen para su posterior acondicionamiento entonces cómo se nos realiza se lo realiza mezclando la misma cantidad de volumen de semen con la cantidad de diluyente es decir si es que yo tengo un y ya qu lado de 10 ml voy a pedirlo con 10 ml de diluyente la finalidad de esta predicción es llegar a la próxima fase que es la fase de acondicionamiento la que consiste en que el espermatozoide va a sacar toda el agua mientras celular que tiene y la va a reemplazar por el diluyente en este caso el diluyente de semen lo que tiene en su composición es principalmente glicerol que le va a ayudar a mantener y su estructura en la membrana celular al momento de la congelación si es que no se utilizaría este tipo de diluyentes no sería ésta esta pre dilución y acondicionamiento el agua intracelular que está en la cabeza del espermatozoide al momento de ser congelada se cristaliza y ocasiona que se rompa la membrana del espermatozoide lo que ocasiona su muerte y pues el semen lo que nosotros haríamos es dañando entonces es muy importante también este paso de la pre dilución dentro de los diluyentes comerciales nosotros tenemos una gran variedad de diluyentes en este caso vamos a hablar de dos tipos de diluyentes que necesitan la adición de yema de huevo y dos tipos de diluyentes que no necesitan la adición de yema de huevo cuál es la diferencia entre estos dos pues los diluyentes que no necesitan adición de yema de huevo son diferentes que tienen fosfolípidos los cuales son extraídos de la lecitina de soya mientras que estos diluyentes la adición de yema de huevo no tienen fosfolípidos en su composición por lo que los obtienen en base a la yema de huevo es recomendable siempre trabajar con huevos frescos si es que es posible huevos que sean de ese mismo día y mucho mejor si es que son huevos obtenidos de una producción pues que sea a nivel de campo aunque no sean huevos comerciales sino mucho mejor que sean huevos criollos ya que tienen una mejor cantidad de fosfolípidos por lo que a nosotros nos va a ayudar también existen diluyentes los cuales se pueden preparar y yo les voy a indicar la manera en que se preparan los diluyentes de forma artesanal se podría decir los cuales utilizan principalmente tres bases citando de sodio fructosa entre otros componentes pero francamente pues dan mucho mejor resultado los diluyentes comerciales que ya vienen preparados incluso tienen antibióticos dentro de su composición para esto nosotros vamos a utilizar también agua destilada la cual ya les indicaba que tiene que ser de laboratorio no podemos utilizar agua destilada no podemos utilizar agua que sea para baterías en carlos decente así no tiene que ser de la mejor calidad y lo más pura posible estos diluyentes deben mantenerse en refrigeración no deben sufrir cambios de temperatura y pues no lo recomendable es tenerlos en refrigeración cubiertos o protegidos de la luz solar para que no alteren su estructura de ninguna manera cada diluyente tiene su especificación el cual viene descrita en un prospecto para el modo de su preparación por ejemplo vamos a utilizar el caso del dril adil que es un diluyente muy utilizado que utiliza yema de huevo en sus indicaciones nos dicen que para el tren se debe trabajar con tres partes de agua destilada una parte de tri la dim y una parte de yema de huevo para preparar en este caso este diluyente otro diluyente que se prepara pues sin la adición de yema de huevo es éste el optics el este diluyente necesita una parte de diluyente y dos partes de agua en este caso no necesitan llama de huevo el andrómeda pues este diluyente necesita cuatro partes de agua y una parte de diluyentes para poder preparar en el caso de wang este es un diluyente un poco más sencillo en este nosotros tenemos que añadir a más de la yema de huevo y el diluyente y el agua tenemos que añadir un cóctel de antibióticos que nos van a ayudar a proteger al espermatozoide contra infecciones de bacterias u hongos que se tengan durante la preparación del semen pero pues los más utilizados vendrían a ser estos de aquí en el caso de la preparación del tri la deal que vamos a tomar como ejemplo pues es muy sencillo nosotros si necesitamos preparar 10 ml de thrill adiel lo que vamos a hacer es el 60 por ciento de agua destilada es decir 6 ml de agua destilada necesitamos 20 por ciento de thrill adil es decir 2 ml de tila del 20 por ciento o 2 ml de yema de huevo en el caso de la preparación de los pixies como les había dicho es por cada parte de optique se nosotros necesitamos dos partes de agua destilada si nosotros necesitamos preparar 10 ml de diluyentes lo que vamos a tomar es 6.
6 puntos 6 ml de agua bien destilada y 3. 3 o 3. 4 ml de optics en el andrómaco eso es una preparación de 4 partes a 1 es decir que si yo necesito preparado 10 ml se necesitaría 8 ml de agua destilada y 2 ml de andrómeda esto lo voy a mezclar cuidadosamente pues en vaso de precipitación en una probeta en materiales volumétricos pues de preferencia que tengan el volumen exacto siempre es recomendable a trabajar en probetas ya que en esta nosotros tenemos una graduación mucho mejor que en un vaso de precipitación vamos a medir aquí nosotros las cantidades que necesitemos tanto de agua destilada y de diluyente es importantísimo el ph del diluyente tiene que ser el mismo ph que tiene el semen en este caso si es que yo tengo un semen que tiene un 6.
