Padrão Sanitário

Olá sejam todas e todos muito bem-vindos a mais uma nova edição do curso de treinamento em manipulação na experimentação animal mais uma vez meu nome é nic de Souza Oliveira atualmente sou médica veterinária do Complexo biotério da UFPR da Universidade Federal do Paraná o assunto que iremos abordar hoje será padrão sanitário em animais de laboratório quais os tópicos que iremos estudar hoje os fatores relacionados ao meio ambiente né em que esse animal é criado em que o animal de laboratório é criado ou mantido a classificação dos animais de laboratório quanto ao estatus sanitário barreira sanitária

os métodos de avaliação em relação ao padrão sanitário e os dados com a saúde do animal quando realizamos pesquisas em animais nós devemos levar em consideração todos esses fatores aqui que estão ilustrados na figura né o porquê né e a fim de qu a fim de tentar minimizar ao máximo né a variabilidade e obtermos resultados reproduzíveis o animal de de laboratório em si ele responde a diversos fatores né Tais quais fatores seriam ess seriam esses né esses fatores aqui que estão ilustrados eh nesta figura ele responde a diversos fatores físicos né quais seriam esses fatores

físicos como exemplo iluminação eh ruído qualquer alteração né em um desses fatores o animal vai tentar responder para tentar ali eh estabilizar é a sua homeostase né ele responde também aos fatores químicos um exemplo bastante importante seria o nível de amônia né dentro da da gaiola mais à frente nós vamos ver mais um pouquinho como que como que seria né Essa amônia dentro da gaiola como que ela é produzida ele responde também aos fatores microbiológicos e que existem né dentro e fora desse ambiente eem quando nós falamos em ambiente de animais de laboratório nós podemos

falar né Nós podemos classificar né esse ambiente em macro e microambiente o que seria o microambiente é todo aquele ambiente relacionado ao redor do animal dentro da gaiola né e o macro ambiente nós podemos considerar tudo o que tá fora da gaiola né tudo o que tá externo então meio que a gaiola funciona como um um meio ali de divisão né entre o macro e o microambiente então ele responde né todos esses fatores dentro e fora desse ambiente onde ele se encontram e que podem alterar né Qualquer alteração em em um desses fatores aqui que

estão ilustrados na figura e qualquer alteração podem alterar o estado de saúde do animal e o seu bem-estar em si sendo assim é super necessário né controlar tentar controlar ao máximo todos os mais diversos os mais diversos fatores que possam de alguma forma interferir ou até mesmo alterar os resultados experimentais Mas por que isso né porque que os animais de laboratório eles são extremamente sensíveis a todas essas variações a todas essas influências eh externas né esses animais primeiramente eles são mamíferos mamíferos homeotérmicos né então eles realizam uma grande mudança no no seu metabolismo para tentar

compensar as variações do meu ambiente externo ou seja se ocorre ali uma variação na temperatura a temperatura tá alta demais ou baixa demais ou a umidade tá alta demais ou tá tá baixa ou alta demais né existe ali um nível eh intermediário de conforto pro animal né vamos dizer assim Onde ele fica dentro do seu bem-estar se há alguma alteração eh em um desses fatores né que eu citei agora como exemplo como a luz a iluminação ou a temperatura ou o ruído o que é que vai acontecer o animal Ele vai tentar se adaptar àquele

ambiente né E essa adaptação muitas das vezes pode essas essas adaptações podem de alguma forma provocar alterações na fisiologia do animal e consequentemente se o animal não está né dentro do seu bem-estar com a sua com a sua fisiologia alterada isso pode influenciar diretamente no seu resultado experimental assim o pesquisador ele deve ter sempre em mente que esses fatores né Eh esses fatores deve ter sempre em mente todos esses fatores que são de extrema importância e tentar controlar o máximo né todo o ambiente externo ali do que o animal de laboratório está né inserido quanto

também relacionado ao microambiente tá em relação eh Mais especificamente né esses fatores aqui que são que inclusive eh vem né o guia do [ __ ] cita fortemente por exemplo um fator que pode influenciar ali né no resultado da pesquisa a temperatura das salas dos animais primeiramente num biotério né de criação Ou de ou de experimentação ou de manutenção a temperatura das salas ela deverá né ser minuciosamente controlada e monitorada diariamente ela tem que tá ali dentro da faixa de temperatura ideal né que seria em torno de 20 a 26º e devem ser evitadas flutuações

diárias para que não haja e uma maior demanda nos processos metabólicos do animal e principalmente comportamental né alterar a sua o o seu comportamento da mesma forma eh Vale também para a luminosidade né a luminosidade ela pode influenciar né o excesso de luz até porque os animais de laboratório são considerados animais noturnos E e essa temperatura e essa iluminação né essa luz eh os animais como eles têm atividade noturna eles são sensíveis à luz de alta intensidade então por exemplo ratos albinos eles podem ter suas retinas danificadas E ficarem cegos quando submetidos a uma luminosidade

muito intensa a luz também eh se não é controlada né de forma adequada ali que seria entre 12 horas de Claro e 12 horas de escuro a luz ela pode afetar a fisiologia e o o comportamento sexual desses animais de laboratório né em relação à umidade aqui também existe uma faixa né ideal de de de de umidade né A maioria dos animais eles toleram bem ali a faixa de umidade entre 40 e 50% ali entre 55% é de umidade relativa do ar se há uma alteração né nessa umidade relativa por exemplo ele pode começar a

ter problemas quando essa umidade tá muito baixa né em em cerca de 30% ou quando ela é superior a 70% quanto a ventilação o os animais de laboratório eles realizam uma contínua troca de de água né E de nutrientes e de oxigênio tá ali trocando constantemente eh essas essas substâncias né Eh com o meio ambiente externo então eles perdem constantemente calor né umidade e dióxido de carbono e outros produtos que são relacionados ao metabolismo que eles podem se acumular se não houver uma uma ventilação ali adequada né que seria o caso da amônia que eu

citei agora a pouco a principal preocupação nos biotérios é com a concentração da amônia por ela ela afeta principalmente né ali o sistema respiratório do animal se ela tá em alta em alta concentração só para relembrar a amônia seria o produto né da ação de bactérias ali sobre sobre ali as fezes a urina do do animal e esse excesso de amônio ele pode provocar alterações né no sistema respiratório do animal pode pode causar infecção pode inibir alguns tipos de enzimas enzimas hepáticas né e desta forma nós sempre devemos considerar também que o nível de amônia

dentro da gaiola ela sempre vai ser mais mais alta né do mais alto do que no ambiente externo aquela gaiola o ruído também os animais de laboratório os ratos e os camundongos eles são extremamente sensíveis aos ruídos né eles eles TM uma percepção maior em relação aos ruídos eh comp eh em comparação com os humanos né então existe ali uma faixa de de de ruído ali que que os animais toleram vamos se dizer assim dentro do dentro ali do dentro ali do do ambiente né dentro ali da sala dentro ali do do ambiente de laboratório

então Eh qual seria né o nível ideal ali de ruído que o guia do [ __ ] traz sobre o que seria tolerável né pelos animais de Laboratórios os ratos e os Camões seria em torno de 85 DB acima disso o animal já vai ficar estressado né se é ali num numa num biotério de criação por exemplo pode aumentar o índice de canibalismo né Principalmente ali com em relação aos camundongos c57 e existem vários trabalhos também né que falam sobre o nível de ruído dentro do biotério inclusive o nível de ruído elevado como os animais

são mais sensíveis né pode até alterar o estado fisiológico do o estado imunológico do animal em si tá Mas quais equipamentos né tem no mercado como que nós podemos controlar eh como que nós podemos aferir eh esse por exemplo o nível de ruído a temperatura na sala como que nós podemos realizar esse controle né diário que é de extrema importância em um biotério de criação manutenção ou experimentação eh nós temos aqui esta primeira figura né para ilustrar um um timer né o time ele é um equipamento utilizado para controlar né o ciclo Claro escuro que

o ideal seria em torno de 12 horas Claro e 12 horas escuro né 12 horas Claro e 12 horas eh esse time ele é mantido né Ele é movido geralmente ele é movido a eletricidade ali dentro do biotério e deve-se sempre verificar se a hora do relógio do time ela está correta Principalmente quando no biotério não tem gerador de energia né você tem ali um uma queda constante de energia ou no caso né Sei lá uma um dia que falte energia quando a energia retorna sempre tem que que verificar né Se não houve aí um

atraso no nessa marcação aqui do time o time ele tem horário para desligar né e ligar e geralmente ele vem com algumas programações ou para ligar e desligar todos os dias da semana em um determinado horário ou qualquer dia da semana aí você eh escolhe né conforme ali a orientação conforme ali o o o seu biotério mas o recomendado né que o guia do cons ataz é que seja mantido 12 12 horas Claro e 12 horas escuro esse segundo equipamento aqui seria um decibelímetro né Ele é um tipo de equipamento que serve para medir o

nível de pressão sonora ou de ou de ruído né ele serve para para aferir o o nível de ruído no no ambiente então um equipamento desse também esse esse tipo de equipamento é de extrema importância dentro de um biotel esse outro aqui para ilustrar seria um termohigrômetro né o termohigrômetro ele é um equipamento que basicamente serve para medir a umidade ali do do ambiente que tá ali presente nos gases da atmosfera assim como a temperatura então ele consegue medir né esses dois parâmetros relacionando esses dois aspectos em simultâneo ele pode você pode instalá-lo né tanto

em locais fechados quanto em ambientes estéreos vai depender do modelo né existem vários modelos no mercado eh é e é isso é um equipamento que serve basicamente para medir a umidade e E ali a a a temperatura né dentro da sala e em relação às trocas de a né só para uma informação a mais que o guia do con atrás em relação ali à ventilação às trocas de ar dentro de de um biotério o fornecimento de ar eh ali a troca né Deve ser em torno de de 15 a 25 trocas de a por hora

na salas dos animais é uma recomendação aceitável para manter ali a qualidade do ar ali eh no macroambiente né em volume constante e também para poder Tentar segurar a qualidade do ar ali dentro do do ambiente do biotério bem aqui para ilustrar né um problema que que pode ocorrer eh em animais principalmente ratos devido a baixa umidade a baixa umidade pode favorecer né esse tipo aqui de de de anormalidade do animal que isso aqui é muito conhecido como a calda anelada né que a calda fica com com esse formato aqui como se fosse um uns

anéis né literalmente Então isso é ocasionado devido a baixa umidade né a umidade ali ambiental insuficiente geralmente ali abaixo de 20% um aumento artificial da temperatura e e e uma baixa umidade pode predispor né os ratos a desenvolver a essa condição também a incidência ela geralmente ela não é muito comum os sinais clínicos Néa com essa constrição aqui anulada a caluda ela é principalmente observada em se tem uma baixa umidade ali no se tem uma baixa umidade ali no ambiente em si eh é muito observado esse tipo de sinal Clínico né esse tipo de anormalidade

em ratos jovens principalmente ali nos desmamados né as Caldas necróticas porque isso aqui gera um processo inflamatório né Essas Caldas necróticas aqui podem chegar até a descamar e como que a gente faz o diagnóstico né em relação a isso no biotério é feito por meio desses sinais clínicos aqui né a observação e o histórico de baixa umidade ambiental Então olha só né que qualquer alteração ali nos fatores que eu citei anteriormente o que que pode provocar né no Animal bem eh quanto mais uniforme os animais utilizados na experimentação eh menor será o número necessário né

para atingirmos ali um padrão de de exatidão e de recepti bilidade ali do dos resultados experimentais Então os animais de laboratório os ratos e os camundongos eles podem eles possuem uma classificação quanto ao seu status sanitário como que seria né Essa classificação quanto ao Status sanitário a classificação quanto ao estatus sanitário ele ela pode ser definida como a relação ali do do animal né com o seu particular e específico ambiente Ou seja a sua microbiota o que seria essa microbiota né seria todo aquele conjunto ali de organismos Associados ali no com o animal né que

que organismos seriam esses os vírus as bactérias fungos parasitas então de acordo com essa Associação de acordo com o tipo de microbiota ali que o animal venha a ter ou não ter né eles são classificados eh com relação ao estatus sanitário então com relação ao estado sanitário eles são classificados em otobi né que dentro dessa classificação do Gin aobi existe uma subclassificação que seria os animais germ free e o Flora definida Depois temos os animais SPF eh depois nós temos os animais monitorizado né que vem que vem sendo amplamente falado agora nesse meio da ciência

de animais de laboratório e os Animais convencionais tá tá e Mas como que é feita né Essa classificação além de levar em consideração a microbiota do animal em si quanto mais eficientes forem as barreiras sanitárias do do ambiente né do animal onde ele se encontra ali para que serve essa barreira sanitária né mais na frente a gente vai ver a definição os tipos mas só para adiantar um pouquinho essa barreira sanitária ela serve né dentro do biotério existe diversas Barreiras sanitárias então elas servem para impedir que algum agente etiológico algum agente patogênico entre no biotério

ou saia dele né então quanto mais eficiente for essa barreira for essa proteção e Menor a chance de contaminação do animal que tá ali dentro do biotério A partir dessa definição é que nós podemos definir né o essa essa classificação também então aqui a setinha né de de aumento então Aqui quanto mais aumenta né Essa as barreiras aqui tem o mini isolador eh para ilustrar que ele é considerado uma barreira sanitária né Os animais são criados aqui isolados como se fosse o seu próprio ambiente isolado né ali que eles são criados em um ambiente particular

vamos dizer assim então é possível observar que os gnotobiotic eles são criados com o máximo de Barreiras né ali tentando evitar o máximo a contaminação dos animais é possível observar aqui que o SPF tá meio que intermediário né e o convencional aqui que ele não a o método de criação não tem tantas barreiras sanitárias o monitorizado pode ficar aqui né entre o SPF e o convencionais Então essa barreira sanitária ela Visa pedir né que todos esses agentes indesejáveis presentes no meio ambiente tenham acesso às áreas de criação ou de manutenção ou de experimentação ali do

bioté tá então o que seria né os animais otobi eles são animais que eles possuem uma microbiota associada totalmente definida ou seja de conhecida né E eles são criadas eles são criados em uma ambiente totalmente dotado ali de de barreira sanitária bem rigorosa bem absoluta geralmente eles são criados em em hacks né ventiladas que ventilados que seria essa segunda figura aqui esses hacks ventilados eles são equipamentos que ultimamente vem sendo utilizados em todo mundo né Por quê Porque Eles garantem uma maior proteção do dos animais aqui aqui dentro né aqui cada gaiola aqui seria considerado

um ambiente eh particular do para o animal ali né então eles eles promovem esses hacks eles racks eles promovem uma maior proteção dos animais quando comparados por exemplo com gaiolas abertas aquelas gaiolas convencionais né e instantes ventiladas também e impede toda essa contaminação cruzada principalmente de ar né Essa de essa dispersão de de alérgenos os ivcs né como também são conhecidos os as os racks ventilados eles estão sendo gradualmente né Eh Trocados substituídos em vários biotérios então eles servem né para proteger os animais de toda essa contaminação e tentar supri-los com a melhor qualidade de

ar né até porque o a que circula aqui dentro de cada gaiola ele é um a que passa por toda uma tubulação passa por um filtro e o a é completamente filtrado né tanto na entrada como na na saída também e isso contribui para quê para reduzir ali a exposição ali tanto do animal né contra agentes patogênicos como também para quem vai manipular o ali o técnico ou ou pesquis ou qualquer pessoa que vá manipular o animal em si e o que seria os O que seriam os animais germ frree né os animais germ free

ou axênico seria como seria uma subclassificação né dos vin aobi um termo similar que é bastante utilizado e seria esse termo aqui axênico eles são animais totalmente Livres né ali de de vida social e eles não não possuem bactérias e nem fungos totalmente livre de microbiota associadas associada e eles são mantidos totalmente eh em isoladores uma outra subclassificação ali né dos gnotobiotic seria os animais Flora definida os animais Flora ida são animais que foram intencionalmente ali propositalmente né contaminados com microorganismos ou parasitos específicos e dentro desse desse dessa classificação Flora definida né dependendo do tipo

de microbiota ali que que vai ser inoculado do animal e a quantidade eles são subclassificados em monoxênico Por exemplo quando o animal foi foi contaminado deliberadamente né né só com um tipo de microbiota o dixo ele foi ali contaminado deliberadamente com dois tipos né de de microbiota e e poliênico é relativo ao animal contaminado com vários tipos né de de microbiotas nós temos também outra classificação né que seriam os animais SPF mais conhecido por essa sigla aqui eh na frente dessa palavra apresenta era para ter o não né eles são animais que não apresentam microbiota

capaz né de de lhe determinar algum tipo de doença né eles albergam somente microrganismos não patogênicos sua criação é é realizada totalmente em ambientes protegidos por Barreiras sanitárias o as quais né Essas barreiras podem ser resumidas por exemplo da seguinte forma cada vez que um técnico ou alguém externo no alguém externo for entrar ali na área né da instalação animal esses técnicos ou essa pessoa deve tomar banho né e utilizar um um uniforme totalmente eh esterilizado outra classificação também que vem sendo falada né seriam os animais monitorizados eles possuem uma microbiota desconhecida né para alguns

Alguns eh alguns organismos eles são livres da maioria do dos patógenos só voltando aqui eh eles também né eles poss eles são criados em um ambiente com barreiras sanitárias mas não tão rigorosas né quanto quando em comparação por exemplo com o gnotobiotic axênico ou um animal SPF o convencional né eles são outra classificação também eles são animais que possuem uma microbiota totalmente indefinida por quê Porque eles são criados em ambientes e em ambientes né desprovidos de Barreiras sanitárias rigorosas sua ação apresenta por exemplo os princípios básicos ali né de higiene de desinfecção ali do do

local aquela limpeza ali diária e na rotina né do do bioter tudo e na qual né se na qual se procede a limpeza ali a desinfecção do do ambiente ali onde se encontram os animais Tá mas nós falamos tanto em Barreira sanitária né até agora que que um dos critérios para classificação do status sanitário né dos animais de laboratório seria também em relação a essa barreira sanitária mas o que que seria né Essa barreira sanitária vamos lá para o conceito barreira sanitária nada mais é que o conjunto de todos os elementos físicos ali né como

elemento físico podemos citar como exemplo algum método ali de esterilização que que você utiliza para realizar esterilização eh desinfecção né Por exemplo Autoclave Autoclave É um tipo ali de de barreira física né que que ele a Autoclave ela vai esterilizar ali todo o insumo ali que vai para dentro do biotério Ali de criação ou para experimentação ou para o biotrio de manutenção então Ali vai visar se esteriliza né Automatic ente vai impedir que agentes patogênicos venham a entrar né venham a contaminar ali o o ambiente do biotério eh todos os elementos físicos os químicos também

Como por exemplo o hipoclorito de sódio ali que a gente dilui na água para fazer ali a limpeza né do biotério É um tipo ali de de barreira eh um tipo de barreira sanitária a forma como a instalação foi construída né é um biot de um único corredor dois corredores porque esse fluxo de pessoas também isso favorece também né a entrada ou a saída de Agentes patogênicos os procedimentos ali que o pessoal realiza né do ali a limpeza e a higienização uso de equipamento de proteção individual e tudo isso tentando impedir ali a entrada né

e de enfermidades que possam os animais ali dentro do biotério e também para quem tá manipulando os animais em si né então o objetivo né dessa barreira sanitária como eu já havia mencionado seria isso impedir essa entrada de de Agentes indesejáveis ali dentro do do biotério mas não Visa impedir somente a entrada né Visa também pedir ali que que venham a se dispersar para o exterior também do do biotério qualquer agente patogênico ali que esteja em teste por exemplo né num biotério de de experimentação aqui eu trouxe alguns exemplos né de equipamentos que são considerados

de Barreiras sanitárias exemplos de Barreiras sanitárias né de equipamentos de Barreiras sanitárias esse primeiro aqui seria Autoclave né que que ele é o é considerado o principal equipamento né que é utilizado na esterilização são de materiais e em somos os materiais autoclaváveis que nós podemos autoclavar aqui neste caso aqui é um autoclave de dupla porta né geralmente é a porta um lado da porta fica para área direcionada né para a área suja do biotério e a outra porta fica na área limpa do biotério né área limpa é um Tero utilizado quando o material passa por

aqui esterilizado e tal e tal então ele vai para área limpa aqui um exemplo de autoclave de que teria essa que teriam né que teria essas duas portas o Quais os tipos de materiais né que eu posso autoclavar aqui lembrando que a Autoclave funciona como se fosse uma panela de pressão literalmente né Ela utiliza ali a temperatura e a pressão ali alta para esterilizar os materiais quais os materiais que nós podemos esterilizar aqui gaiola e os bicos do do bebedouro né a maravalha tem alguns tipos de de rações que são autoclaváveis Então pode autoclavar aqui

eh dependendo do do tipo ali de de de animal né quanto ao estado sanitário que sanitário que tá sendo criado ali uniforme ele precisa ser esterilizado então ele é esterilizado aqui na na Autoclave outro exemplo também aqui de carreira sanitária seria aqui os hacks né ventilados o haack ventilado aqui no caso eh com esses micro isoladores ele é o ele é basicamente um equipamento que ele permite o estabelecimento de um sistema fechado né Cada gaiola dessa aqui cada micro isolador funciona como um ambiente fechado de criação para cada microambiente ou seja para cada gaiola aqui

do do animal indivíd ualmente tá Mas quais seriam né os métodos de avaliação do do padrão sanitário do animal como que eu vou eh como que eu vou eh diagnosticar né ali ter certeza por exemplo que o animal é um animal SPF que ele é um animal e convencional que ele é um animal germe free enfim primeiramente em todo o biotério né de de ação eh o primeiro o primeiro passo né vamos dizer assim para iniciar o primeiro o primeiro passo é estabelecer uma rotina de monitorização ali né da da Saúde ali do dos animais

tentando coletar eh amostras né com com uma certa frequência de amostras para testes laboratoriais e enfim que nós vamos citar mais à frente para tentar ajudar né provar a existência de alguma agente que esteja ali contaminando ali o animal os métodos para avaliar a saúde o estado de saúde do animal em si são vários são muitos né então eles vão desde uma análise clínica na qual a gente pode fazer ali uma inspeção ali visual né do animal uma palpação eh uma necrópsia até os métodos de agnósticos que buscam uma que buscam pela contaminação em si

né pela Ali pela confirmação da bactéria do vírus ou do parasito entretanto na rotina ali do biotério né no na rotina ali do do manejo na monitorização da saúde dos animais que que deve ser realizado né Eh essa monitorização deve ser realizada todo dia seja pelo pesquisador pelo técnico até porque essa atividade ela é compartilhada eh o melhor dos métodos clínicos nada mais é que a inspeção né ali di Ária observação metódica ali diária organizada eh do animal todo dia bem os biotérios em si né que fazem esse esse controle do padrão sanitário dos animais

eles geralmente né né utilizam esse artigo aqui da felasa que foi publicado pela felasa não é tão recente é de 2014 o último que foi publicado a felasa é a Federação de associação europeia né Eh Federação europeia de associação e animais de laboratório ela sempre tá publicando ali diretrizes recomendações eh tudo muitos temas né temas relevantes para a ciência de animais de laboratório ela publicou no ano de 2014 esse artigo aqui eh na qual né ela recomenda eh publicou uma série de recomendações para o monitoramento da Saúde de colônias de roedores por exemplo em biotérios

de coelhos também né Essas recomendações que vê aqui né que estão descritas Nesse artigo descrevem vários aspectos essenciais no monitoramento tais como por exemplo qual agente de escolha né que que que eu vou escolher ali na na minha colônia de rato de camundongo eh tudo isso quando eu vou escolher o agente né com quando eu vou selecionar os animais qual o tipo de tecido que eu vou selecionar Qual a frequência Qual a mostragem tudo isso o artigo traz descrito né como um Norte aí para para quem vai avaliar né para quem vai realizar esse esse

essa essa monitorização se basear no entanto tudo isso né Essa frequência como que vai ser selecionado os animais vai depender tudo do tipo de instalação né ah é é um animal SP então tem que ele tem que est livre de todos esses esses agentes né patogênicos aqui Ah o animal monitorizado ele tem que est livre de todos esses então esse artigo traz todos os os os agentes né que você deve ali eh pesquisar aqui eu trouxe para exemplificar algum dos vírus que vem descritos né No que que tá ali descrito ali no no artigo por

exemplo aqui o adenovírus ele ele por exemplo em animais imunodeficientes ele pode provocar pneumonia pneumonia ali no Animal né atite eh alguma encefalite ali no Animal uma gastroenterite com isso pode alterar ali toda a fisiologia do animal né aqui aqui em vermelho né O antvr que ele geralmente ele é assintomático né na colônia e só que quando ele os animais manifestam né os manifestam os sinais clínicos geralmente causa encefalite principalmente em camundongos adultos que tem ali o sistema imunológico comprometido aqui o exemplo de algumas bactérias né que nós podemos pesquisar e de acordo ali com

o tipo da colônia com o tipo do estatus sanitário um importante ag gente aqui que nós podemos citar né o micoplasma pulmones ele causa ali doença crônica né uma doença respiratória crônica principalmente em ratos e camundon aqui alguns exemplos né de ecto e endoparasitas todos esses aqui nós podemos pesquisar né tudo de acordo com o tipo ali de instalação animal um um um endoparasita que é bem importante assim né a monitorização dele durante a saúde dos eh aquela durante a monitorização da saúde dos animais e que pode ser feito com exame parasitológico é investigação da

siface né usualmente ela é inaparente assim só que em condições inadequadas de ambiente ou quando o animal ali tá com sistema imunológico ali comprometido né alguma coisa desse tipo o pelo do animal qual Clínico né o animal ele fica todo com pelo ali arrepiado há uma taxa de crescimento reduzida ali e pode ter praxo direto né mas na frente eu vou mostrar uma uma figura ilustrando bem Tá mas eu quero realizar né o planejamento ali do controle quero quero quero implementar um programa de controle sanitário ali no meu biotério o que que eu devo levar

em consideração né o planejamento primeiramente ele vai depender né da da amostragem Quantos animais eu tenho ali na minha colônia e levando em consideração que esse tipo né de de controle se você quer realiz por exemplo para animais SPF gnotobiotic eh sabemos que são exames bastante caros né então assim dependendo da amostragem né ali do do número de animais eh vai depender do tipo de de colônia né esse planejamento Porque existe uma frequência para C para cada tipo de colônia eh os tipos de testes né que que eu irei realizar o teste Laboratorial como exemplo

e quais são os agentes que eu irei pesquisar então para eu planejar né como que eu vou realizar esse programa o planejamento vai depender eu tenho que levar em consideração todos Eh esses fatores quais os testes né que eu posso realizar para a avaliação aí desse para avaliação né do estado de saúde desse animal posso utilizar por exemplo os métodos de histologia né Eh bacteriologia tem os virológico esses seriam os principais e os recomendados né pela felas por exemplo aqui no no histopatológico eh neste tipo de exame né vai vai ser realizado dependendo do tipo

de tecido ali que foi coletado vai ser realizado uma análise ali mais minuciosa né do do tecido ali que foi coletado e esta figura estas figuras eu retirei daquele site lá eh Dora né que é um site que contém todos os que contém vários tipos de patologias que acometem os animais de laboratório Dora seria o a ciga né aqui é um animal acometido por salmonelose aqui que eu trouxe né para ilustrar em secções aguda o Basso ele pode estar né aqui do do do lado aqui esquerdo ele ilustrando ele pode est apresentar né de duas

a três vezes o tamanho normal dele ele vai tá né com Basso aumentado e os linfonodos também mesentéricos também eh podem estar aumentados e com bastante edema aqui na no lado Dire do lado direito né a figura aqui da istologia para representar entar né como que nós poderíamos fazer realizar essa análise do tecido o o exame microscópico né ali o histológico ele aqui no caso ele pode revelar né uma esplenite necrosante seria aqui onde né onde tá indicando essa setinha um esplenite necrosante multifocal ali né E principalmente no fígado e hepatite são sinais né clínicos

que achados histológicos frequentes assim quando o animal é acometido por por salmonelose né E essa hepatite ela pode ter né focos necróticos que são frequentemente acompanhados por colônia de de bactérias né então seria essa seria nessa região onde tá indicando essa setinha em relação ao parasitológico né pode ser feito esses exames parasitológicos esses testes parasitológicos para para avaliar ali né a saúde do animal para ter todo um controle para estabelecer nesse programa de controle sanitário dos animais o parasitológico existe diversos tipos de exame por exemplo Suá anal ele serve para pesquisar né ali o os

os e dos ídeos também é a pele a região ali da pele né a parte externa dos pelos serve também para você pesquisar ali se tem alguma presença de ácaro de piolho né de de pulga ali o você pode também realizar o raspado intestinal né o raspado intestinal o principal objetivo é a pesquisa ali de protozoários de cistos de ovos de almos eh também tem esse métodos que esse método de whs né que é o de flutuação fecal que ele é muito utilizado para detecção de de cisto e e principalmente daqueles ovos né mais leves

aqui para ilustrar né aqui em cima seria a foto né e a ilustração de um prolapso retal provocado por C fácil né as as espécies adultas de cfaa cfaa geralmente elas são encontradas no seco essas duas figuras aqui para ilustrar né o ovo né E a outra fase mais adulta os sinais clínicos geralmente não são observados mas quando tem esse prolapso retal aqui ocasionalmente né cargas muito pesadas desse da de C fá pode resultar em prolapso retal e numa certa irritação aqui perianal os ovos né né da siface geralmente eles possuem uma casca bem fina

e tem esse formato aqui e elipsoidal achatado meio que achatado né de um lado outro tipo de teste também que nós podemos realizar seria o bacteriológico né para para pesquisa de de Agentes bacteriológicos Onde que nós podemos coletar né Essas amostras além do animal nós podemos coletar AL no ambiente ali na gaiola do uma amostra do alimento ali do animal né da água dentre outros em relação ao animal né se você um um um um agente que pode ser pesquisado né com um teste bacteriológico seria a pesquisa do micoplasma pulmones pois ele é causado por

uma bactéria este organismo Ele pode induzir né uma síndrome pulmonar eh crônica uma doença ali respiratória crônica em ratos ou camundongos geralmente o bacilo respiratório associado aos cílios é um C patógeno geralmente que ele vem associado né com o micoplasma pulmones quando ele vai quando ele infecta ali o animal então o animal vai apresentar né bastante exudado purulento ali na traqueia ali nos brônquios é alguns casos né o o o pulmão pode est totalmente normal mas quando o pulmão tá ali totalmente ali comprometido pode apresentar esses focos amarelos né que a gente pode que nós

podemos observar aqui esses focos amarelos de bronquiectasia e áreas de consolidação juntamente né com essa com essa mistura de de áreas de consolidação de coloração meio que vermelha e acent né que pode ser encontrada e nos pulmões de ratos ficam modos embora essa infecção ela seja esse tipo né de de infecção ela ela seja bastante Rara assim em biotérios mas quando acontece né o nível ali de significância quando presente é alta Mita das vezes podendo levar ali uma doença respir ória fulminante nos animais e relação à frequência de amostragem né se nós voltarmos ali naquele

artigo que eu no artigo da felasa que eu mostrei né Vocês viram que a frequência da da amostragem vai depender principalmente de quê do tipo de instalação então por exemplo no instalação de animais convencionais você pode realizar esses testes né equatoriais a cada 6 meses com animais SPF você pode realizar aí a cada 3 meses né até porque são animais mais sensíveis né vamos dizer assim eles não podem ter toda aquela todos os agentes patogênicos que venam ali causar doença o germe free que eles T que est totalmente ausente né Então essa validação aí essa

essa confirmação essa frequência de monitoramento tem que ser um pouco menor A cada 15 dias e uma forma também né de de de de amostragem vamos se dizer assim se não pode coletar o o realizar as coletar né as amostras diretamente dos animais uma forma também é colocar animais sentinelas junto né com com os animais que que seriam suspeitos né de sei lá de de ter um determinado tipo de agente esses sentinelas você pode fazer o exame né os exames que eu citei anteriormente a cada 3 meses então a frequência de amostragem ela vai variar

de acordo com diversos fatores né tais como a importância do agente eh o teste que eu tô empregando ele é um teste confiável né o teste ali Laboratorial que eu tô que eu tô eh utilizando né para monitorar os animais ele é confi o tipo de instalação né Quais os tipos de de Barreiras sanitárias que eu tenho ali os tipos de equipamentos foi foram introduzidos animais novos Então existe uma uma série de fatores bem nós falamos tanto né em diversos tipos na classificação em si quanto ao estus sanitário só que nós devemos levar em consideração

o quê a saúde dos animais né qual cuidado que nós devemos ter que nós temos que ter né com a saúde desses animais do do biotério Ali de criação ou se é o seu animal ali do experimento primeiro a saúde ele é ela ela é o resultado né ela o resultado do equilíbrio entre o ser vivo ali ser o meu ambiente e os diversos agentes ali que está ao seu redor né vamos dizer assim que possam de alguma forma produzir de doença o estado de saúde de um ser vivo ele envolve uma série de condições

né tais como o bem-estar físico o bem-estar mental do animal o psicológico e ali o o social então seria um equilíbrio Entre todos esses fatores Tá mas o que que eu tenho que observar né no meu animal para saber se ele tá bem ali eh e de saúde como eu já havia mencionado anteriormente existem diversos métodos né de de avaliar a saúde do animal e a avaliação clínica ali a exeção ali metódica eh diária dos animais seria uma delas há diversos indicadores de bem-estar e saúde dos animais né Por exemplo os pelos os pelos é

um indicador de de saúde animal os pelos eles devem apresentar né este animal aqui que aparentemente ele está ele poderia ser considerado normal né vamos dizer assim porque os pelos eles apresentam eles devem apresentar-se né homogêneos com um certo brilho não deve ter falha nenhum tipo de ferimento os olhos também são de extrema relevância para a validação né da saúde do da saúde dos Ratos dos Camundongos animais em boas condições eles vão apresentar os olhos brilhantes umidificados e mostram bastante vivacidade né em condições normais também outra coisa também outro outro item né que nós podemos

avaliar seria o sistema circulatório do animal em si eh ali o que seria né essa avaliação em relação ao sistema circulatório se se o animal tem alguma secreção nasal ali no sistema respiratório né Tem algum sangramento outro Outro fator que nós devemos levar em consideração né Na avaliação ali diária dos animais avaliar o comportamento do animal né primeiramente você tem que saber qual o comportamento normal para você saber detectar o o o comportamento anormal né vamos dizer assim então avaliar o comportamento se o animal apresenta algum tipo de dor eh de desconforto em alguma determinada

área se tem algum aumento né na no em relação ao volume ali do abdômen ou ele tá permanecendo e eh ou ele tá em permanência né prolongada por exemplo em decúbito ali ele tá isolado ali do restante enfim isso tudo nós podemos observar em relação ao exame Clínico né o exame físico ali em si nós podemos avaliar diversos fatores né temperatura o peso do animal se tá com peso ali ideal de acordo com a idade né os olhos as orelhas se tem alguma presença de tumor eh a enfim todos esses itens aqui podem ser eh

avaliados em relação à saúde dos animais outro tipo de de ocorrência né vamos dizer assim que acontece muito principalmente em ratos Quando nós vamos avaliar os olhos Acontece muito dependendo se o animal ele tá sofrendo algum estresse né pode ter a presença aqui nos olhos pode ter a presença dessa crom cromad proria né ela ela é considerada um indicador ali de estresse né de Sofrimento principalmente em ratos a causa desse estresse ela pode est associada a alguma manifestação patológica também né então muitas das vezes devido a limpeza eh que os animais realizam né que é

o groom devido a limpeza o aspecto vermelho ele ao redor dos olhos aqui ele pode ser transferido para as patas dianteiras Lembrando que devido essa coloração né vermelha a croma croria ela não é causado por sangue e sim pela secreção de um pigmento de coloração vermelha né que é produzido por uma glândula que fica que fica ali ali a atrás dos olhos né vamos se dizer assim e esse pigmento ele tem a coloração vermelha meio avermelhada e é denominado porfirina esse pigmento é liberado né por essa glândula e principalmente quando o rato tá estressado então

se você vir né esse esse tipo aqui de secreção ao redor dos olhos do animal não é sangue isso é um indicador de estresse muitas das vezes pode ser por exemplo o animal tá com um nível de amônia muito alto né amônia muito alto dentro da caixa isso pode ocasionar isso aqui né esse essa cromad croria ou outros fatores de estresse em si um outro achado né de com relação à saúde do animal que pode comprometer ali a saúde do animal em si seria a ma oclusão do dos dentes o comprimento apropriado dos dentes eh

principalmente dos incisivos né que são esses aqui ele é mantido pelo constante atrito principalmente ali com por exemplo com a ração né geralmente a ração ali tem que ser fornecida ali em formato de pellet justamente tem que ser fornecida em formato de pellet justamente para para ter essa Ah esse atrito né para ocorrer esse desgaste dos dentes o crescimento excessivo como nós podemos observar nessa figura ele pode acarretar nessa maloclusão né Essa ma oclusão ela está associada à quebra de dentes né desalinhados e a quebra de dentes e também em relação ao desalinhamento entre a

maxila e a mandíbula os sinais clínicos que nós podemos observar o animal começa a perder peso porque não consegue se alimentar direito né ele fica desidratado e muitas das vezes ISO pode ser um traço hereditário E se for um traço hereditário por exemplo se é numa colônia de criação se são animais d biotério de criação esse animal tem que ser descartado da colônia outros exemplos né de de de patologias que podem acometer o que podem comprometer a saúde do animal né Essa primeira figura aqui ilustra um camongo com essa pele meio um pouco escamosa né

nesse caso aqui o Camundongo ele foi infectado por pelo corine bacter corine corine bactério bobes que geralmente se manifesta né com essa hiperqueratose aqui com com esses flocos meio fados que aderido à pele então dá essa essa impressão aqui né Essa visualização aqui com a pele bem eh espessada E aqui nessa segunda figura seria um animal né com acometido com micoplasma pulmones a infecção geralmente ela começa sem sinal Clínico nenhum mas fatores ambientais adversos tais como o nível elevado de amônia né E se nós relembrarmos lá aquele primeiro slide que nós quando nós começamos a

nossa aula que os fatores né externos os fatores relacionados ao ambiente que pode afetar ali a saúde do animal né em si e consequentemente afetar até o seu resultado da pesquisa então amônia por exemplo é um fator químico eh em níveis elevados pode favorecer né essa essa exacerbação do do sinal Clínico aqui do animal que tiver com com micoplasma com micoplasma E aparentemente né o animal ele fica ele vai apresentar né uma secreção óculo nasal e pode apresentar esse toxicol aqui que nem tá ilustrando nesta figura eh outro outro comportamento né outro comportamento que nós

podemos observar em biotérios né seria o esse tipo aqui de comportamento que é também conhecido como barbe né Eh Ou barbearia barbe momento barbering né Eh a barbearia o barbe momento em ratos dependendo do seu genótipo né ele em ratos em cudon ele é um comportamento bem complexo né ele ocorre com mais frequência em em camundongos tanto machos quanto fêmeas né E pode ser atribuído a um comportamento dominante né ali o comportamento dominante ali de aliciamento sexual excessivo eh pode ocorrer também nas fêmeas né Eh um comportamento materno principalmente em em cam em camundongos fêmeas

ali lactantes e pode ser também provocado por estresse esse comportamento aqui é muito comum né e o que que é possível observar os pelos aqui na região aqui nasal aqui na região orbital o o dominante né vamos dizer assim ele retira dos outros esses pelos aqui na região nasal nessa região orbital aqui né nessa região cervical dorsal são os raspados mais frequentes a pele ela fica como que eu vou diferenciar né se não é um problema de pele né vamos dizer assim geralmente aqui no barbe momento ele fica a pele fica aparentemente intacta né e

com uma aparência normal vamos se dizer assim ao contrário dessa foto aqui que seria uma dermatite ulcerativa né Eh essa dermatite ulcerativa ela não tem uma causa conhecida sim a condição parece ser vários fatores né Associados é fator genético eh eh transtorno obsessivo compulsivo que o animal tem é o tipo de dieta é o ambiente é o sexo do animal é a idade então existem diversos fatores que podem contribuir para esse tipo para este tipo de dermatite os sinais clínicos eles eh os animais mais propensos né são os camundongos c57 eles são mais propensos a

desenvolver esse tipo de esse tipo de dermatite que M das vezes progride para uma ulceração né epidérmica devido a uma coceira excessiva porque isso aqui coça muito né então o animal fica coçando ali e pode evoluir para uma ulceração então eh essas lesões né Elas podem ser colonizadas por bactérias oportunistas e e causar ali um ciclo né de de irritação ali de e infecção mesmo Nas condições crônicas elas essas feridas podem essas úlceras né essas áreas ulceradas elas podem deixar cicatrizes pode deixar só uma cicatriz eh ali na na pele do animal bem para finalizarmos

né qual a importância né Qual que é a importância do status sanitário dos animais nas pesquisas primeiro se nós conhecermos né o status ali sanitário do do animal eh é importante para a redução ali do número de animais utilizados né do na pesquisas nas pesquisas e isso consequentemente eh irá diminuir né o número de de repetições de experimentos e também outra importância do de se conhecer o estatus sanitário do animal seria a obtenção ali né de de resultados mais confiáveis e que possam ser reproduzíveis e que possam ser reproduzíveis né aqui entra entraria a questão

da reprodutibilidade né E para refletir né aqui seria uma perguntinha para você mesmo refletir né em relação ali ao seu modelo experimental que você vai utilizar ali na sua pesquisa Ah tá eu escolhi modelo animal tal para para o meu teste ali né para a minha pesquisa experimental de acordo com a escolha ideal do do modelo animal é escolhido ali para sua pesquisa para o seu projeto Como que o controle ideal né do do Estado sanitário pode influenciar positivamente no resultado da minha pesquisa né da sua pesquisa então aqui fica fica essa perguntinha né para

vocês refletirem sobre essa importância e principalmente ali no em relação aos resultados né das pesquisas aqui seriam as referências que eu utilizei para esta aula quem quiser se aprofundar mais no assunto né aqui seria o meu e-mail para quem quiser entrar em fiquem à vontade podem mandar e-mail com dúvidas e meu muito muito obrigada pela atenção de todos vocês