Bioquímica Clínica: Enzimologia clinica parte V

a dosagem da creatinoquinase sérica é feito de dois modos através da cmb enzimático onde se mede a complexação da enzima com substrato a formação do complexo enzima substrato e posteriormente a formação de um produto esse produto cromógeno é que é medido através do método colorimétrico nós temos aqui a reação como ocorre então a creatina quinase ela quebra a creatina fosfato liberando a creatina e o fosfato é adicionado ao ADP formando ATP na segunda reação do conjugado ATP reage com a glicose através de enzima exocin ase liberando o fosfato glicose se fosfato é formado e ADP

essa glicose se fosfato é utilizada pela glicose se fosfato desidrogenase paraa formação do gluconato 6 fosfato e síntese do nadph que é medido eletroforético outra forma de se medir se analisar a cmb sérica é através da cmb massa cmb massa nós utilizamos o anticorpo contra a fração M esse anticorpo vai reconhecer a fração m do C MB né então C MB forma por duas frações a a fração m e a fração B on corpo vai formar a vai formar um complexo com a fração M esse complexo antígeno anticorpo é medido através de um método imunométrico

C bimassa é o método mais confiável de melhor sensibilidade analítica uma vez que ele detecta as enzimas ativas e as enzimas inativas mais detalhadamente nós podemos ver que a cmb é adicion a a amostra Contendo a cmb é adicionado um anticorpo contra a fração B esse esse anticorpo ele possui na sua estrutura o Cromo também adicionado um outro anticorpo contra a fração contra a enzima né que reconhece a enzima cmb como um todo essa esse segundo anticorpo contém a galactosidase então nós formaremos um complexo entre Cromo contendo Cromo contendo Contendo a cmb e contendo outro

anticorpo com a Bet galactosidase esse complexo é lavado é separado e depois posto em contato com um cromógeno né cont melhor dizendo cont eh colocado em Tato com uma substância chamada cprg que não absorve em 577 nôm mas que por ação da Bet galactosidase é cindido e forma um cromógeno que é o [Música] CPR a vantagem da creatinoquinase MB massa é em virtude de se detectar lesões do miocardio bem recente n bem precoce né uma duas horas antes do que eh se cair MB enzimático detecta a desvantagem da cmb é sua inespecificidade uma vez que

músculo lío e músculo esquelético também produzem cmb e podem ser detectados pela cmb massa gerando assim um falso positivo os valores de referência são para cmb enzimática 25 até 25 unidades a 37º para cmb massa até 5,1 nôm por ml além da cmb nós temos também o que chama de macr c são chamadas isoenzimas macromoleculares nós podemos encontrar macro C1 que é um complexo formado pela CBB ou cm MM ligado aos anticorpos às imunoglobulinas ga ou a IgG e a macr C2 que é um complexo formado entre a mitocondrial e o anticorpo também né encontrado

em neoplasias nós temos vendo uma imagem n uma figura onde nós temos a macro C1 que é a CBB ou a cmm ligada aos anticorpos e a macro C tipo do que é um oligômeros formado pela C mitocondrial Mas por que a macro C pode dar um resultado falso positivo quando se vai medir a dosagem d c k MB nós utilizamos um anticorpo contra a fração e m esse anticorpo Na verdade ele inibe a fração m então ele vai inibir totalmente a isoenzima MM e vai inibir metade da atividade da cmb uma vez que cmb

é formado por uma fração m e uma fração B isso essa dosagem feita a 37º uma vez que temperaturas superiores irão irá desnaturar a cmb Entretanto a o anticorpo ele não consegue inibir a CBB a macro CBB que é a macro C1 Então essa macro C1 como não vai ser inibida pelo anticorpo ela vai gerar um Resultado positivo um resultado elevado muito embora esse resultado não seja em virtude da cmb e sim da macro CBB essa essa reação da macro CBB ela não é inibida nem mesmo a temperatura tão alta quanto 45º C então uma

das formas de se saber se a atividade D da cmb ou da C ou da macro C eh se fazer uma uma uma elevação da temperatura duas dosagens vamos acompanhar aqui o raciocínio o anticorpo antim vai bloquear totalmente a atividade da cmm mas ele vai bloquear apenas metade da atividade D cmb então ele se liga a fração M bloqueia a atividade da inibe a atividade da fração M mas a atividade da fração B fica totalmente livre Então o resultado que nós encontraremos é metade dessa atividade enzimática com relação a macro C ele não inbe uma

vez que é formado por duas frações BB então anticorpo ANM não consegue se ligar não reconhece então nós teremos uma atividade somada da CNB ou melhor da CB e de da macro CBB Então vamos imaginar que nós tivemos uma medição dessa atividade encontramos que é 70 unidades internacionais atividade da cmb essa medição ela é relativa pois quando nós aquecemos essa mistura a 45º C por 20 minutos nós conseguimos desnaturar A cmb então permanece somente a macr BB nós medimos novamente atividade enzimática encontramos que a CBB após esse aquecimento 40 unidades internacionais O que é equivalente

atividade somente da macr BB portanto a cmb real vai ser a diferença entre que foi medido antes da sua desnaturação ou seja 70 menos os 40 que foi medição após então o valor real da atividade da cmb é 30 unidades internacionais outro marcador importante do infarto agudo miocard é a mioglobina mioglobina é uma não é uma enzima então um teste não enzimático hemoglobina é uma hemi proteína que assim como hemoglobina AC carreia o oxigênio na fibra muscular ela representa 2% da proteína total do músculo ela está ela apresenta apresenta concentrações mais elevadas na no plasma

em lesões celulares durante o infarto agudo miocárdio e ela é um excelente marcador para lesões precoces a mioglobina apresenta um peso molecular de 17,7 k uma rápida cinética e é um dos primeiros marcadores séricos apresentando uma elevação em tno de 2 horas após infarto miocárdio entretanto ela também é eliminada muito rapidamente pelos rinos uma vez que seu tamanho molecular faz permite que ela seja filtrada os valores normais são atingidos em 24 a 36 horas o que permite então det quear um reinfarto uma vez que ela é eliminada rapidamente o seu aumento posterior indica um reinfarto

a mioglobina também pode estar elevada em outras situações como a lesão muscular esquelética atrofia muscular progressiva insuficiência renal grave uma vez que ela é eliminada pelos rins e assim como o uso de cocaína os valores de referência são até 70 nanog por ml e finalmente o último marcador de infarto agudo miocárdio é a troponina troponina é uma proteína que regula a contração do músculo cardíaco el está envolvida na interação do cálcio da actina e da miosina Existem três tipos de troponina troponina I que é a sub subunidade que inibe a actina a troponina C que

faz a ligação com cálcio e assim regula sua contração e a troponina T que é a troponina que se liga à miosina a troponina I possui três isoformas duas encontradas no músculo esquelético e apenas uma encontrada no músculo cardíaco essa encontrada no músculo cardíaco é a isoforma chamada ctni Além disso também encontrada uma outra isoforma da troponina T que é a ctnt a ctnt e a ctni São marcadoras precoces do infarto miocárdio a apresentando-se níveis elevados de 4 a 7 horas ou seja elas são liberadas praticamente ao mesmo tempo que a cmb seu pico é

atingido em 12 a 18 horas e ela permanece por mais tempo na circulação de 10 a 12 dias o que é uma vantagem em relação a cmb que é um marcador precoce também mas que é eliminado muito mais rapidamente vantagem da troponina em relação a cmb é a sua maior especificidade e Entretanto a cmb encontrada em e em tecidos não cardíacos é uma Outra vantagem da troponina também permite detectar pequenas lesões miocárdicas o que não é possível com a ckmb né A ckmb não permite a detecção de lesões Muito pequenas né lesões pequenas não eh

produzem aumentos consideráveis da cmb levando em consideração as duas isoformas da troponina a ctnt e a ctni né Nós podemos dizer que a ctnt não possui especificidade total porque ela é encontrada em outras partes que não apenas o miocárdio enquanto que a ctni ela é muito mais específica é confinada a miocárdio Mas ela não se eleva em pacientes com insuficiência renal né O que também é uma vantagem uma vez que pacientes com insuficiência renal ela também não consegue eh ela não é filtrada e os pacientes com insuficiência renal elas permanecem com seus valores e normais

os valores de referência para troponina é até 1 nanog por ml nesse quadro podemos ver a comparação entre os tempos em que essas enzimas são produzidas são liberadas e atingem seus valores normais a mioglobina é o que apresenta a maior precocidade em 1 a 3 horas já apresenta níveis elevados esses níveis voltam normal mal também muito rapidamente em 24 horas a troponina T também apresenta um um aparecimento no plasma muito rapidamente em du a 4 horas mas ela é ela Ela atinge os seus valores normais muito mais tardiamente em 7 a 10 dias troponina aí

posteriormente 4 a 6 horas em 7 dias também volta ao seu valores normais e a creatino quinase a fração MB em 3 a 5 horas a início da sua detecção em dois a 4 dias seus valores são normalizados e a creatinoquinase Total tem seus sua detecção em 4 a 8 horas e seus valores normais em 3 A 4 [Música] dias e as enzimas é usadas para diagnóstico de próstata nós temos a principal é a fosfatase ácida ela tem ela Ela utiliza a mesma reação que a fosfatas alcalina entretanto ela AGE em meio ácido Então ela

é utilizada para diagnóstico de próstata mas também pode ser encontrado em problemas hepáticos assim como medulares e eritrócitos e plaquetas o interessante de se avaliar a fosfatas alcalina é a sua fração não prostática crianças em fase de crescimento em patologicamente aumentados em condições em que existe hipermetabolismo ósseo fosfatase ácida tem sua fração não prostática aumentada em crianças que estão em crescimento é utilizada para monitorar a resposta ao tratamento e aparecimento também de metástase de câncer prostático fazendo um resumo da aula de hoje nós podemos dizer que para avaliação e acompanhamento do infarto agudo do miocárdio

nós temos que a a creatine quinase Assim como com sua fração MB a TGO e a lactat des hidrogenase Principalmente as frações ldh1 e ldh 2 para para diagnóstico de doenças hepáticas nós temos que a TGO TGP a Gam glutam transferase fosfatase alcalina são as enzimas mais utilizadas e para diagnóstico de osteopath fosfatase alcalina para diagnóstico dos ordens musculares a crea quinase e a TGO para diagnóstico de pancreatite aguda amase lipase e para diagnóstico de câncer de próstata metastático a fosfatase ácida então nós podemos podemos ver nessas aulas sobre enzimologia clínica que o que o

organismo produz as enzimas produzidas principalmente aquelas enzimas que são tecido específicas elas fazem uma radiografia do que o organismo tem dos problemas encontrados Então as enzimas produzidas intrac cularmente ou secretadas que não para o plasma elas podem refletir os problemas e o órgão ou tipo de lesão ou a profundidade da lesão né são bastante utilizados no como marcadores de doença os pontos chaves da aula eh são os seguintes enzimas elas são proteínas catalisadoras essas enzimas elas podem ser expressas em diversos órgãos ela tem especificidade de reação ela tem especificidade de substrato e ela tem especificidade

de tecido o que pode interferir na atividade enzimática o PH temperatura concentração de substrato e de enzimas as enzimas elas podem ser classificadas em aquelas enzimas sempre encontradas no plasma aquelas secretadas e as intracelulares o dano celular assim como aumenta a permeabilidade e o aumento na produção da enzima elas alteram a sua Elim ação e pode modificar as concentrações enzimáticas plasmáticas isoenzimas são enzimas que atuam sobre o mesmo substrato promovem a mesma reação mas possuem cadeias polipeptídicas diferentes e podem ter características também eletroforéticas diferentes as medições podem ser erradas em virtude da conservação ou da

coleta Então tem que se ter cuidado com relação à coleta e A Conservação e as enzimas podem ser bons marcadores para doenças cardíacas pancreáticas hepáticas assim como doenças prostáticas bem essa esse é o fim da aula sobre enzimologia clínica qualquer dúvidas vocês podem postar aqui mesmo no YouTube