GARANTIA E CONTROLE DE QUALIDADE DOS RADIOFÁRMACOS PT5

Eente eh lá no ipen nós temos um um outro setor que chama centro de química e meio ambiente eu acredito que lá naquela instalação eles devam seguir a a norma 14.000 e uma outra coisa que eu ia comentar que na aula da professora Ana Cláudia vocês também ouviram sobre a ISO 104 que f são dos resíduos né então assim Existem várias normas dessa série ISO né que nós precisamos observar Ok e como é que vocês estão desde a aula de ontem eh Foi muita coisa muito pesado eh vocês sentiram dificuldade né Se tiverem dúvidas eh

do gerador de molibidenio tequino se vocês lembrarem vão escrevendo aqui no chat Quem se lembra das impurezas eh do eluato do gerador de de molibidenio te kinésio é tem radionuclídeo de do Gerador é o Felipe escreveu aqui o alumínio seria uma impureza química é na ver colocou aqui o o technes 99 mas vocês lembram que ele tem uma meia vida tão longa que você eh você não vai conseguir detectá-lo aí ele já já vai ser considerado um isótopo estável né então assim só para lembrar da da aula IMP impureza tem impureza química que é o

alumínio eh proveniente da coluna impureza Radionuclides se lembram que e a especificação é uma relação né uma relação entre a atividade do molid 99 e a atividade do tequino 99 MV e temos também impureza radioquímica que é o tco2 Né o tecnécio reduzido hidrolizado ok tequino s mais não o o o eluato do gerador o pertecnetato ou o tecné 99m que é obtido do gerador ele tá no estado de Valência mais se dessa maneira ele pode ser utilizado em medicina nuclear Para imagem de glândulas salivar de pul sanguíneo de estômago né mas para ele se

ligar nos reagentes liofilizados para ele se ligar em outros compostos a gente tem que reduzir esse estado de Valência é na verdade não é que o estanho seria uma impureza de qualquer forma você sempre numa formulação de kit a gente coloca um excesso de estanho para que eu assegure que todo o tecn 99m ele vai estar reduzido para conseguir fazer uma ligação boa com o composto e a Gente ter uma porcentagem eh dentro do especificado né da Pureza radioquímica então sempre vai ter o estanho eh em excesso mas ele a gente não considera que seja

uma impureza química tá bom bom é É isso aí eh eu iria perguntar mais alguma coisa mas acho que é melhor a gente começar a nossa aula porque hoje também o assunto é bastante extenso mas é um assunto eh Na minha opinião um assunto muito Bonito vamos lá eu vou compartilhar já a aula vocês estão enxergando a tela a a tela da aula ontem nós paramos aqui né até amanhã até amanhã chegou chegou hoje hoje então continuando aquela série de ensaios de controle de qualidade que são necessários para nós atarmos a qualidade eh do radiofármaco

a gente vai pros controles biológicos né então esses controles Biológicos eles envolvem o teste de endotoxinas bacterianas teste de esterilidade osai de monitoramento Ambiental de como nós já dissemos que a grande maioria são um radiofármaco injetável ele deve ser estéril livre de endotoxinas bacterianas ou em níveis abaixo do limite especificado para radiofármacos que esse limite está especificado nas farmacopeias 17 C unidades de endotoxina por Volume não deve ter material particulado com exceção de suspensão ou dispersão coloidal sendo então produto estéril o processo de fabricação ele vai ter eh uma importância crucial no nível de contaminação

microbiana do produto então a gente sempre tá repetindo plano de manutenção preventiva e corretiva das áreas limpas né e as sépticas a gente pode dizer até só áreas limpas que já dá para entender que o nível de contaminação ele deve ser mantido num Nível o mais baixo possível né então entrando agora no primeiro controle Lógico que é é o é na verdade acho que o primeiro que eu coloquei É esterilidade mas a gente vai começar com endotoxinas Então a gente vai eh conceituar pirogênio e endotoxinas então pirogênio é qualquer substância ou agente que vai induzir

aumento de temperatura nos seres humanos e nos Animais Entre esses pirogênios a gente pode incluir endotoxinas restos de parede celular de bactérias GR positiva e também fungos e o que interessa para para uma Indústria Farmacêutica ou Radi farmacêutica são as endotoxinas bacterianas então endotoxinas bacterianas elas são pirogênio Mas nem todo pirogênio é endotoxina bacteriana bom então o que que seriam Essas endotoxinas elas são complexos de alto peso molecular que está associada à membrana externa das bactérias Gran negativas quer elas sejam patogênicas ou não e as endotoxinas é a fonte mais significante de pirogênio numa Indústria

Farmacêutica e quimicamente o que que seriam essas endotoxinas elas são lipídios ou fosfolipídeos ligado dos a polissacarídeos aminoácidos ou Polipeptídeos com dimensão menor que 1 micron então entre 0,05 e 1 micron São solúveis em água e são estáveis ao calor são termoestáveis então mesmo que haja calor eh as endotoxinas elas não se alteram eh eu vou pedir para vocês colocarem também uma estrelinha na definição de endotoxinas tá bom e os sintomas que podem causar a presença de endotoxinas no organismo humano ou animal Então são todos esses sintomas que estão descritos Aqui febre cala frio malestar

leucopenia né diminuição dos rostos dor em articulações dores de cabeça rubor dilatação das pupilas e transpiração E aí dependendo do estado físico do paciente e da quantidade de endotoxina que porventura possa existir no produto pode levar uma pessoa até a morte né daí a importância das endotoxinas bacterianas Aqui nós temos um esquema da estrutura da parede celular de uma Bactéria Gran negativa e o mais importante onde a gente tem que prestar atenção é nessa parte externa da parede eh dessa bactéria Gran negativo né então nós temos aqui cadeias laterais o específicas polissacarídeo e o lipídio

a e o lipídio a ele é a porção ativa da membrana dessa bactéria bom agora se nós eh for vamos ver historicamente o teste de pirogênio em vivo né Eh no ano de 1942 então há muitos anos atrás foi incluído na pharmacopée de pirogênio com uso de coelhos e o que que no que que consistia esse teste injetava se o produto até diluído né Você tinha que ver com relação ao peso do animal e t injetava na orelha na veia da orelha do coelho e se observava eh depois que se aplicava ou que se injetava

até 3 horas após a injeção para observar um aumento de Temperatura no coelho então utilizávamos três coelhos para cada lote de fármaco no caso né Eh eu cheguei a trabalhar na Indústria Farmacêutica na época em que se fazia esse teste em coelhos então eu manipulei coelhos realizando esse teste de pirogênio né mas atualmente não se usa mais nas indústrias farmacêuticas o que a gente sabe é que algumas instituições de pesquisa ainda mantém né alguns coelhos Alguns animais para fazer esses testes por como eu falei existem outros tipos de pirogênios que não são endotoxinas nós tivemos

até um caso no centro de radiofarmácia que uma vez a gente teve que mandar amostra para a gente eh digamos tirar a dúvida se era eh endotoxina bacteriana ou um outro tipo de pirogênio nós enviamos Se não me engano para o o o HC onde eles tinham ainda eh coelhos e puderam fazer esse teste para Nós mas graças a Deus esse teste não precisou mais ser feito na rotina da Indústria Farmacêutica por quê foi descoberto um outro uma outra substância que ela reagia à presença de endotoxinas bacterianas então é um teste invitro a gente fala

teste do lal ou teste do Lau né o Lau também é uma abreviação né de lisado de emboo do límulo então o o reagente ele é retirado da célula sanguínea de um animal eh que ele O gênero dele é límulo né é límulo polifem na verdade então esse animal ou essa espécie só existe em alguns locais do mundo então descobriu-se há muitos anos atrás que alguns desses animais eles morriam eh pela presença de endotoxinas então pesquisaram e conseguiram extrair essa célula sanguínea E então Eh elaborar um reagente que pudesse ser usado na Indústria Farmacêutica Então

esse reagente com Endotoxina causa uma reação enzimática eh que é en Cascata e essa reação ela pode ser medida e quantificada Então esse teste vitro ele foi publicado num num guia né Eh do fda em 1987 Ou seja faz mais de 30 anos atrás né quase 40 anos então o princípio desse teste é que a partir de uma solução do lisado de amebo do sangue do caranguejo é uma espécie de caranguejo né límulo polifem na presença de pequenas Quantidades de endotoxinas B bacterianas ou mesmo fungos ou outras substâncias ele forma um gel sólido aqui nessa

foto do lado esquerdo vocês podem visualizar o límulo polifem ele até é considerado um animal eh pré-histórico e aqui a gente vê um um líquido Azul então quando ele eh sai do organismo do límulo eh na presença então do ar né ele se torna azul porque nesse stang do límulo tem Cobre né então o teste em vitro Existem várias técnicas né tem três técnicas que são utilizadas pelas indústrias farmacêuticas a primeira técnica é a coagulação em gel que é um método semiquantitativo aí nós temos também um método que é quantitativo a gente chama de cinético

cromogênico e mais um outro também que é quantitativo é o cinético turbidimétrico e todas essas técnicas utilizam um Padrão de endotoxina que é da eh esqueria Coli né é uma aquela bactéria coliforme né intestinal e recentemente mais recentemente por causa que esses métodos aqui essa essas técnicas elas utilizam o límulo que é um animal até atualmente existe um é um movimento né para evitar a extinção desse animal então foi desenvolvido um reagente à base de proteínas recombinantes então é um reagente promissor né porque não não usa Eh o sangue do do límulo né E foi

produzido por esta empresa aqui então é uma é uma marca registrada aqui tá uma representação da reação em Cascata entre o reagente de lal endotoxina então a endotoxina que é um lipopolissacarídeo aqui né na presença de cátions bivalentes ou divalentes como cálcio Ele ativa com o lal né Eh um uma cadeia de reação em Cascata que vários fatores são Ativados até chegar aqui no final que o coagulo ele se transforma em coagul que então é um gel que se for positivo o gel fica firme mesmo eu invertendo o tubo de reação o gel não cai

né E se vocês forem notar aqui do lado direito tem um beta 13 glucano ou glicano esse é um fator é que pode ser interferente na reação Então dependendo do produto se ele tiver betaglucano na formulação ele vai eh dá um falso positivo nessa reação do LL com a Endotoxina então o teste é feito desta maneira aqui nesse fluxograma nós incub 01 ml da amostra a ser analisada com 01 ml do reagente de lal incubados a 37º por 60 minutos né nós incub ou em banho maria assim como essa essa foto aqui do lado esquerdo

ou num banho de bloco né é uma pedra que ela que aquece Então essa foto aqui à direita do banho maria é um banho de bloco bloco nós chamamos o ponto final ele é Observado através da inversão do tubo de reação a 180º quando se forma um gel firme que mesmo eu fazendo essa inversão nessa foto aqui Central o gel não se desmancha se não formar gel ou esse gel que se forma ele ele verter na hora que eu e virar o tubo de reação então O resultado é negativo para endotoxina todo produto que vai

ser analisado vai passar por esse teste de endotoxina a gente tem que fazer a Validação eh desse produto essa validação é por meio de diluições que nós temos que fazer desse produto até que eh cheguemos num ponto em que não haja interferência dos componentes da formulação então que se tem endotoxina forme aquele gel firme e não seja por exemplo um resultado falso positivo então eu já falei anteriormente que o limite que já está estabelecido de endotoxina para radiofármacos é 175 Unidades de endotoxina por dose Essas são as que nós temos que usar para calcular o

quanto que eu posso diluir o meu produto de forma que se tiver Endo toxina eu ainda consigo detectar pela reação com l né E quando eu defini essa diluição ideal então no dia a dia eu vou usar essa diluição para os meus testes isso é importante principalmente para os radiofármacos Na verdade até esse teste Eh tem na literatura que ele também foi desenvolvido justamente por causa dos radiofármacos porque Imaginem só né Se eu fosse fazer o teste de otoxina bacteriana eh em coelhos usando radiofármacos gente eu ia injetar material radioativo nos Coelhos E isso não

ia ser uma coisa eh muito muito boa então por isso eh depois que eles desenvolveram esse método ele foi assim de extrema importância para a Indústria Farmacêutica e também para os rofos eu não vou entrar em detalhes aqui nos cálculos porque não vem ao caso aqui eu só tô passando as informações mais importantes né para a execução desse teste ok então o primeiro método que eu falei foi o método eh de formação de gel né que é no tubinho você incuba inverte se não cair é positivo se cair é negativo existe um outro método que

fala que é cromogênico então eles t no no reagente Desse método um crom cromóforo né ehom fósforo é aquela parte da da molécula que reagindo com endotoxina ela vai provocar uma formação de uma cor e essa cor ela vai ser detectada espectrofotometrica né então a reação que vai ocorrer entre esse reagente e endotoxina ela vai poder ser quantificada aqui está assim esquematizado né é uma proenzima né na presença da endotoxina ela forma uma enzima e a enzima mais o Substrato cromogênico que tá no reagente do do lal né para essa técnica aí eh forma o

peptídeo e par nitroanilina que então ela é detectada nesse comprimento de onda aqui estão mostrados os equipamentos são equipamentos eh mais modernos portáteis que eles servem para essa eh determinação de endotoxina usando Eh esse método cromogênico esse equipamento que vocês vem aqui do lado esquerdo é um equipamento mais novo esse daqui do lado Direito é uma uma geração mais antiga desse equipamento aqui que tá do lado esquerdo então comercialmente eh como eu mostrei esse equipamento aqui né que está aqui embaixo do lado esquerdo então utilizando este equipamento a gente eh chama de um sistema PTS

PTS também é uma abreviação né de portable test system é um sistema portátil do teste aqui são as características do teste quanto de amostra que a gente põe Eh vocês lembram quanto de amostra que eu falei que vai naquele test de formação de gel vai 100 microlit né 01 ml nesse teste aqui vai 25 microlit ou seja quantidade eh quatro vezes menor né do que naquele outro teste de formação de gel a temperatura de reação é a mesma o comprimento de onda eu já falei porque é um método espectro fotométrico o resultado aqui é de

15 20 minutos enquanto que no método de formação do gel são 60 minutos é 1 hora Ou seja esse método aqui ele é muito mais rápido e naquele método de formação de gel a gente tem que montar meio que manualmente uma curva eh padrão né espera um pouquinho gente ok nós temos que montar uma curva padrão naquele método de formação de gel a gente pega endotoxina bacteriana eh nós eh preparamos várias Soluções em concentrações diferentes e a gente tem que montar uma curva aqui a curva padrão ela já vem do fabricante em três Concentrações eh

da endotoxina aqui do lado direito nós temos um um esquema de um cartucho que ele é introduzido deixa eu voltar aqui acho que eu col a eu não coloquei aqui a fico devendo eu não coloquei a foto do cartuchinho mas o esquema desse cartucho que tá aqui do lado direito aqui aqui em cima na parte superior direita o cartucho ele é inserido num slot que tem aqui no equipamento tá Então eu só quero dizer aqui que ele tem vários Pocinhos onde a gente coloca a amostra E aí tem um canal onde eh a amostra é

sugada até o local onde é medida a absorbância dessa amostra um dos canais ele é o controle positivo porque ele tem um padrão de endotoxina dois canais tem padrão de endotoxina e dois canais não TM o padrão de endotoxina e pela relação da medida entre aquele que tem a endotoxina e o que não tem é que nós conseguimos então Quantificar a quanto de endotoxina eu tenho na minha amostra não sei se foi difícil de entender deve ter sido difícil se é a primeira vez Vocês estão ouvindo isso aqui são os critérios de aceitação da curva

e esse ess esse método ele é é muito prático para radiofármacos de meia vida física menor do que 2 horas por causa do tempo de ensaio então ele é utilizado pra análise do fluor 18 compostos do fluor 18 e compostos do Galho 68 ou mesmo se alguma instalação produz compostos à base de carbono 11 por exemplo então utiliza-se este equipamento para determinação end toxinas bacterianas então a gente falou né no injetável ele não deve ter endotoxinas não deve ter microrganismos então se não deve ter endotoxinas como é que eu faço para tirar a endotoxina ou

um termo que se usa para despirogenização Para materiais principalmente frasco de vidro aqueles frascos ampola né que nós utilizamos para eh colocar nosso produto né a a embalagem primária então a inativação da endotoxina ela pode ser feita numa é uma estufa grande como essa figura que está aqui utilizamos calor seco por no mínimo 30 minutos e nós temos que qualificar essa estufa porque eu posso também diminuir a temperatura só que eu tenho que aumentar o tempo que o Produto o frasco ele vai passar eh nessa estufa para ser eliminado eh a para ser eliminada A

endotoxina Normalmente quando eh se processa então o o frasco para Elim ou para despirogenização E aí se o processo for eficaz o resultado dado desse teste para mim vai ter que dar negativo agora para pros produtos né Eh materiais que eu não posso eh usar uma estufa numa temperatura tão alta assim Eu tenho que usar de outro artifício então eu posso lavar com solvente apirogênico né eu posso usar a água por exemplo água para injetável e o osmose reversa carvão ativa Então são eh digamos eh São instrumentos né são formas que eu tenho para obter

um solvente apirogênico né uma água livre de pirogênio e dessa forma eu posso por exemplo lavar o frascos de preparação né os objetos eh frascos de vidro materiais de vidro Que vão entrar no processo e que eu não vou poder colocar ali por exemplo eh na na estufa para despirogenização uma outra forma para prevenir a contaminação por endotoxinas é então eu usar material já estéril né Por quê Porque assim a esterilidade de uma solução não garante a sua apirogenica e nem a esterilização destrói o pirogênio num radiofarmaco Eh eu acho que eu falei ontem não

sei se eu falei ontem o processo de esterilização úmida né ou eh de um radiofármaco que suporta temperaturas mais é por 20 minutos no mínimo Então nem toda a solução principalmente aquelas que são à base de proteína peptídio elas não vão suportar eh um uma uma estufa não uma Autoclave né então para eu garantir a Esterilidade por exemplo de uma solução que suporta temperatura alta eu posso autoclavar mas para aquelas soluções que não suportam temperaturas altas eu uso a filtração esterilizante como uma forma eh de esterilizar o meu radiofar então para tornar estérel eu posso

então por calor úmido 121º agora para despirogenização ele se origina ou endotoxina né do metabolismo da bactéria o melhor recurso É prevenir e como é que a gente vai prevenir usando material estérel material esterilizado soluções e equipamentos sob condições assépticas usar também procedimentos asséptico em todo o processo de fabricação agora vamos pro teste de esterilidade então no artigo 10 da in 1228 que é aquela bpf aplicada aos Sadi fármacos está escrito assim os medicamentos radiofármacos a Serem administrados por via parenteral devem obedecer aos requisitos de esterilidade aplicáveis aos demais medicamentos parenterais e sempre que pertinente

às condições assépticas de de trabalho para a fabricação de medicamentos estéreis abrangidas pelas diretrizes de boas práticas específicas a medicamentos estéreis então eles devem obedecer aos requisitos de esterilidade e o que que significa Esterilidade é ausência total de microorganismos viáveis como bactérias fungos e leveduras né em uma preparação radiofarmaco aqui como eu acho que eu já mostrei uma uma foto parecida ontem aqui é o analista com aquela roupa de sala limpa fazendo ensaio Possivelmente aqui ele tá fazendo ensaio de kits né aqui na época a gente ainda não tinha um fluxo unidirecional blindado agora nós

já temos um fluxo Blindado aqui só Relembrando eu comentei já mas vamos lá novamente eh tratando dos processos esterilizantes para radiofármacos então basicamente são dois processos a filtração esterilizante e a esterilização terminal né Eh o processamento a asséptico seguido de esterilização terminal é o método de escolha para produtos estveis então usa-se uma Autoclave uma Autoclave é um equipamento parecido com esse é como se fosse uma Panela de pressão né então aquece-se a eh a porta é fechada então sob vapor quente é que o material né o frasco contendo material É esterilizado nós utilizamos para cada

processo né Por esterilização eh por calor úmido indicadores biológicos Aqui tá o nome do microrganismo que é utilizado como indicador biológico é o g bacilos stear termófilos então em cada processo colocamos os indicadores lógicos depois nós temos que eh incubar Esse indicador e avaliar se ele morreu ou não eh passando pelo processo de esterilização quando a gente não consegue esterilizar dessa maneira por calor úmido a gente tem que minimizar a intervenção humana nesse processamento asséptico inclusive pelo uso é de isoladores Se for possível a filtração esterilizante a filtração esterilizante Então se usa um filtros eh

de dimensões Já definidas ou de 0,45 ou 0 22 micra e uma coisa muito importante que eu coloquei aqui é que a extensão e o número de intervenções ou seja quanto mais eh o operador ele influencia ou ele ele entra nesse processo aumenta o risco de contaminação e nós fazemos também um teste do Méia fio que é uma simulação do processo com meio de Cultura sempre que for possível então no lugar eh num processo onde tem por exemplo Frascos tem Mangueiras tem reator então para validar esse processo no lugar do produto que passa por esses

diversos eh dispositivos nós passamos o meio de Cultura amos aquele meio de cultura e incubam Então dessa maneira nós podemos garantir que todo o caminho do processo onde passa o produto ele está livre de contaminação então paraa garantia da esterilidade segundo as bpfs então numa produção a gente tem que ter a manipulação asséptica em celas blindadas Quando é material radioativo o processo de esterilização vai ser por filtração ou por calor úmido Autoclave e nós vamos então obter um produto de qualidade estérel e livre de endotoxinas bacterianas aqui a primeira questão do dia O que você

entende por manipulação asséptica ou processo asséptico ontem eu foi ontem né antes de ontem na verdade na garantia da qualidade eu comentei com Vocês sobre antisepsia e sobre assepsia né Eh quando a gente fala de ah estéo né estéreo e asséptico estéreo é a gente entende que é o produto é o material que está estérel assepsia é o local o ambiente de trabalho e o procedimento a forma como eu vou é manipular o meu produto é que eu falo que é asséptico aqui já tá a resposta então a manipulação asséptica Ou processo asséptico é utilização

de práticas e procedimentos para prevenir a contaminação microbiana então envolve aplicar regras restritas para o risco de infecção aí eu coloquei aqui várias eh coisas ou vários procedimentos que nós podemos eh ter para que eh seja considerado então um procedimento ou uma manipulação asséptica É isso mesmo pbio tá correto o que você escreveu então podemos usar o quê roupas Esterilizadas jalecos toucas máscaras luvas sapatos ou propés materiais estéreis frascos recipientes ponteiras seringas agulhas manipulação em áreas limpas né em salas controladas ou com uso de isoladores cabines de fluxo laminar não introduzir alimentos bebidas nas áreas

para as mulheres principalmente não usar joias bijuterias cosméticos ter o treinamento correto não entrar nas áreas se tiver se estiver doente né então se o operador tá gripado É melhor evitar entrar então Deixa pro colega entrar para eh fazer a a produção para fazer o teste de esterilidade Então vamos evitar o máximo possível a introdução de contaminação então o teste de esterilidade ele é realizado em fluxo fluxo laminar né de modo asséptico incubando-os uma amostra de radiofarmaco e Med de cultura que oferecem condições para o crescimento dos mais diversos microrganismos então nós temos aqui as

Duas formas de Fazemos o teste de esterilidade inoculação É isso mesmo Fábio então existem eh dependendo do tipo de alimento mesmo alimentos por exemplo que são para bebês né Deve ter uma sala limpa onde eh o material é processado então é rigoroso mesmo e deve ser né então nós temos duas formas de realizar o teste por inoculação direta é quando nós aqui essa foto superior aqui do lado esquerdo está mostrando nós Introduzimos uma mostra diretamente em tubos de meio de Cultura ou por filtração por membrana quando temos um equipamento é uma bomba aqui né e

colocamos então Eh meio de cultura e Passamos o nosso produto através de um filtro e depois incub o meio de Cultura os os meios de culturas mais utilizados eles estão estabelecidos na farmacopa brasileira O primeiro é o meio de tioglicolato que permite o crescimento De microrganismos aeróbios e anaeróbios a incubação é de 32,5 mais ou menos 2,5 por 14 dias e meio de soja e caseína eh normalmente a gente chama de meio de tsb eh para microorganismos aeróbios bactérias e fungos e a temperatura de 22,5 mais ou menos 2,5 por 14 dias vocês se lembram

também que nós eh comentamos que o radiofármaco ele é liberado antes da conclusão de todos os os testes eh que devem ser feitos um deles então é o teste de Esterilidade porque eh dura 14 dias a incubação É lógico que eu não coloco a minha amostra lá o tubo lá ou o frasco né na de filtração por membrana e só vou ver no 144 dia praticamente eu tenho que observar todos os dias porque de repente se a minha amra estiver contaminada às vezes vai no segundo terceiro dia já ocorre turvação do Med de cultura eu

já tenho informar os setores competentes do que está acontecendo ex existem algumas Técnicas atualmente de métodos rápidos né para o teste de esterilidade eh para produtos não radioativos até poderia ser feito por exemplo com os kits né kits liofilizados mais para os radiofármacos para os radioativos eh a possibilidade de contaminar esses reagentes os equipamentos é muito grande por isso que não se adota a esses testes rápidos que estão disponíveis comercialmente paraa gente executar o teste de esterilidade de Radios aqui estão então algumas fotos eh Aqui estão todos juntos né atualmente a gente não coloca junto

não aqui em cima são as placas de meio de cultura do monitoramento ambiental na parte aqui inferior nós temos os tubos de incubação e aqui são os frascos eh que foram então incubados pela filtração de membrana se vocês observarem aqui os frascos eles né eh são de uma marca comercial aqui embaixo é que tem o filtro né que nós filtramos a amostra primeiro então se Tiver microrganismo o microrganismo vai ficar retido sobre esta membrana e depois nós colocamos as seguir o meio de cultura e incubam se houver contaminação se tiver microrganismo nessa membrana com o

passar do tempo de incubação esse meio aqui ele vai ficando Turvo eu comentei também sobre a liberação do radiofar né então para radiofármacos prontos para uso que a gente eh cham né nominava H anos atrás de moléculas marcadas e radionuclídeos incluindo os catos de geradores eles são liberados antes de completar do período de incubação dos meos de Cultura os reagentes liofilizados Eles já são liberados depois de completado o período de incubação dos meos de Cultura então enquanto não completarem se os 14 dias os reagentes liofilizados não são liberados né por isso por causa dessa liberação

digamos Eh precoce né dos radiofármacos eh ou adiantada daí a importância das técnicas assépticas de produção e fracionamento a importância da realização do monitoramento ambiental a validação dos processos e a realização de um Mia fil então aqui eu coloquei então a in 128 que fala sobre essa questão de liberação eu peço também que vocês coloquem uma estrelinha aqui no Artigo 57 em que fala que a liberação do Medicamento radiofármaco pode ser realizada em dois ou mais estágios antes e após o teste analítico completo então primeiro a pessoa responsável ela vai avaliar os registros de fabricação

do lote eh por exemplo se o radiofármaco ele vai passar por esterilização final numa Autoclave eu vou ter que ter o registro do processo da autoclave eu comentei com vocês sobre o sistema supervisório aquele lá que acompanha o processo então A pessoa responsável vai ter que visualizar neste processo se houve algum desvio de temperatura durante o processo de esterilização né Eh a questão por exemplo eh numa filtração eh ele deve também ver se foi feito aquele teste de bolha né Eh para saber se a filtração foi eficaz né então todas as condições de produção devem

estar Ok e os testes analíticos que forem possíveis de serem realizados até aquele momento antes eh de enviar então o Radiofármaco para transpor corte eh e pro destinatário final e depois então que terminou todos os terminar os testes eu tenho todos os resultados então a pessoa responsável pelo sistema de gestão da qualidade farmacêutica ela vai garantir que eh o produto aquele lote específico do produto ele está atendendo as especificações então aqui né eu ressaltei eh o que está então no texto que está atrás a questão do artigo 56 né tem que avaliar a documentação do

lote Avaliar quando a gente fala documentação é o que eu falei a documentação relativa ao processo né as matérias primas a tudo que entrou no processo de produção e os testes que forem foram possíveis de ser feitos teste de endotoxina pode ser feito o teste de Pureza radioquímica pode ser feito e os testes químicos também pode ser feitos a gente comentou que alguns testes por exemplo teste radionic de Pureza radionuclídeo ver impurezas eu tenho que Esperar decair o o meu produto para que eu possa investigar possíveis impurezas eh na nessa in número 128 também fala

dos radionuclídeos com meia Vidas Mais longas eh que eu até comentei né Eh antes que o teste seja realizado as amostras podem ser armazenadas para permitir o decaimento suficiente da radioatividade né aqui também fala que todos os testes a que se refere eh aqui o conteúdo deste artigo né incluindo o De esterilidade devem ser realizados assim que é possível aqui fala assim que possível eu vou explicar por existem locais é mesmo a gente já teve assim eh ouvido do pessoal que trabalha lá na Europa tem eh instalações que eles esperam decair um pouco a radioatividade

antes de fazer o teste de esterilidade eh no centro de radiofarmácia nós fazemos imediatamente quando Recebemos a amostra eh por quê Porque se você deixa decair aí entra Aquele caso que alguém me perguntou se a radiação ela é capaz de esterilizar a gente não sabe assim se a quantidade de radioatividade que tem na amra se por acaso tiver algum microrganismo ele de alguma forma pode influenciar então se eu deixar decair um tempo eu não posso garantir que de fato aquela condição inicial da amostra ela vai permanecer eh depois de um certo tempo depois do decaimento

a condição de Esterilidade então por isso que nós ali do centro de radiofarmácia nós procuramos realizar esse teste Sim sim moraisa pode ser feito e também na validação né a gente tem que validar esse método né mas para garantir que aquela condição da mostra seja o mais fiel possível nós executamos então atrás eh no fluxo blindado né para evitar que o operador ele se exponha à radiação proveniente eh do produto ok eh então assim eh o artigo 60 por Exemplo ressalta aquilo que já comentamos sobre o documento né o procedimento operacional ele tem que detalhar

como é que vai ser avaliado cada um dos dados analíticos eh todas as etapas de produção antes do lote ser liberado e aqueles logicamente que não cumpriram os quesitos de qualidade vão ser rejeitados aqui eu relacionei outros ensaios microbiológicos necessários né para cumprimento das boas práticas um Deles é a determinação da carga microbiana em inglês nós falamos que é bioburden dos sergent liofilizados antes da filtração esterilizante Ou seja eu tenho que ver se antes de eu passar pelo processo de esterilização a o meu produto ele tem uma carga microbiana significativa Então esse teste é feito

por eh filtração né aqui eu coloquei uma foto eh existem esses dispositivos também é é é como se fosse uma bomba em Que eu coloco o meu material né antes da filtração esterilizante e depois eu tenho que incubar a membran para saber eh quanto de microrganismo ou Qual é a carga microbiana que eu tenho no produto antes da esterilização eu comentei sobre o teste de ponto de bolha que é esse Bubble Point test ele é obrigatório para os reagentes liofilizados né eh como é o o reagente Liofilizado ele passa por filtração esterilizante então todo filtro

eh que foi usado no processo de esterilização do kit ele deve ser submetido a esse teste de ponto de bolha eu vou falar desse teste se não me engano na semana que vem quando eu explicar a parte dos reagentes liofilizados um outro ensaio também necessário eh são aqueles são para aqueles que não são injetáveis e são de uso oral como a cápsula de odo 131 e a Solução oral deod 131 então nós fazemos o teste da carga microbiana e a pesquisa de microrganismos patogênicos agora vamos pro monitoramento ambiental eu coloquei aqui intervalo mas eu vou

prosseguir Tá bom até que eu corri né nessa a parte anterior Nossa cori mesmo hein vocês têm alguma dúvida não tá tudo ok Senão a gente vai fazer o nosso intervalo lá pelas 8:30 também uns 10 Minutinhos né tudo OK pode ser então né Tá bom continuando Então pessoal monitoramento ambiental né esse essa é uma atividade super importante não Hoje é aula até às 22 até às 21 horas vai ser sexta-feira que vem a quinta-feira que vem sou eu é das 19 às 22 e na sexta-feira segundo cronograma não gente se for até à 21

Horas eu vou pedir licença e eu vou até o O que é ó Jaqueline eh pode ser usado na verdade existem eh dispositivos comerciais em que você pode introduzir todos os materiais a serem esterilizados eh mas eu não conheço que se use ácido peracético né e um detergente enzimático na verdade se usa eh peróxido de hidrogênio eh nesse sistema existem alguns sistemas Comerciais que você intruz é todo o material que vai no processo numa câmara a a você eh introduz o vapor de peróxido de hidrogênio eh ele é extremamente oxidante esse material então assim no

nosso caso eh nós eh não fazemos assim porque ele pode inclusive atacar os equipamentos por ele ser extremamente oxidante Tá bom então Eh vamos lá Aqui nós temos algumas fotos e aqui em cima superior do lado esquerdo o Operador ele tá então medindo aqui o fluxo de ar Bom segundo aqui as mensagens então tá confirmada né Tá confirmado o horá da minha aula de hoje até às 22 com relação da prova mudar de dia e nos Ah aqui a Débora que tá perguntando agora eu não sei né sobre essa essa pergunta é pros alunos Débora

ah Mona Lisa que perguntou Ah desculpa aí eu não sei né Vocês T que ver com a organização ela tá agendada pro sábado Que vem né tanto que na minha nas minhas aulas da próxima semana na verdade na na aula de quinta eh não é toda a matéria que vai cair na prova então vocês podem ficar tranquilos Tá eu espero que vocês considerem a minha prova fácil Ok vamos continuar aqui então a foto aqui superior esquerda a o operador ele está medindo Na verdade o Fluxo de ar né aqui na parte inferior é um contador

de partículas viáveis nessa parte nós colocamos uma placa de meio meio de Cultura aberta colocamos essa tampa aqui e no ponto onde há necessidade de fazer a contagem de partículas Nós ligamos eh esse equipamento ele suga uma certa quantidade de ar esse ar ele é impactado contra placas de meura como essas que estão aqui na parte inferior Direita depois nós retiramos essa placa incub e se houver crescimento nós temos que contar as unidades formadoras de colônia eh dos microorganismos tá bom Aqui a parte de cima é uma sala limpa nós temos aqui tá bem pequenininho

mas acho que dá para visualizar um equipamento para Contagem eh de partículas não viáveis então o que seria o monitoramento ambiental quando a gente fala só monitoramento ambiental Eu praticamente não tô Incluindo a parte microbiológica né seria a contagem de partículas não viáveis para a classificação da área agora quando eu falo monitoramento microbiológico ambiental eu estou então contemplando microorganismos então o objetivo do monitoramento microbiológico ambiental é medir e avaliar sistematicamente a quantidade de microorganismos vivos presentes nas salas limpas e Demais áreas críticas do processo de produção e além de né com base nesses resultados orientar

medidas preventivas e corretivas para eliminar possíveis focos de contaminação bom aqui essa imagem do lado direito então a operadora está fazendo a limpeza do fluxo unidirecional devidamente paramentada então como eu falei quando nós falamos só monitoramento ambiental nós estamos falando sobre a Classificação da área limpa então nós avaliamos o ambiente de trabalho vamos contar o número de partículas por volume de ar então partículas que estão no ar em suspensão no ar né porque partículas viáveis nós nos referimos aos microrganismos vivos né é aqueles que podem eh eh crescer e se reproduzir então nós utilizamos para

avaliar a quantidade de partículas viáveis meios de Cultura adequados que Vão propiciar o crescimento dos inúmeros diferentes espécies de microorganismos então aqui eu coloquei o tipo de eh de método né de amostragem que é por sedimentação por amostrador de ar ativo que é aquele equipamento que eu mostrei no slide anterior anterior é est aqui ó esse na parte inferior esquerda eh temos também a sedimentação é quando eu coloco dessa maneira aqui ó a placa nos pontos já estabelecidos Então dependendo da área Da sala limpa eu vou colocar mais ou menos pontos de controle e nesses

pontos de controle eu vou fazer diversos ensaios um deles é expor placas de meio de Cultura durante uma hora ou depende do que for definido No método né Eh Ou a gente Ai desculpa e agora ela vai falar a Karine abriu o microfone Karine pode perguntar Oi professora boa noite oi boa noite Pode falar É que aqui tá chovendo bastante hoje e na hora que a senhora Tava explicando falhou um pouco o som eh eu queria tirar uma dúvida em relação àquela parte que a senhora explicou dos cartuchos não me lembro se era da nextg

Não lembro qual é a marca do aparelho mas aqueles três pontos de de concentração para fazer a curva é paraa calibração do aparelho ou paraa validação da do teste ou os dois é PR na verdade é pra validação do teste essa curva Ela já tá no programa Do aparelho são três pontos apenas né eh deixa eu ver se eu consigo aqui voltar é do teste de endotoxinas bacterianas aqui né então para esse sistema aqui que é um sistema comercial que é produzido aqui pela endosafe que é ou esse equipamento aqui do lado direito ou esse

equipamento aqui do lado esquerdo Então nesse equipamento quando nós eh adquirimos a gente compra Um cartucho e para cada lote de cartucho ele já foi feita uma curva padrão nessas concentrações Então não é que eh ele é imutável na verdade para cada lote de cartucho ele tem uma correção a ser feita conforme a curva padrão eu não preciso construir a curva padrão ela já está ali no programa então a medida eh que eu faço da minha amostra é como se assim eu tivesse uma curva padrão construída E aí Quando eu faço a leitura né de

concentração por absorbância né Eh eh aí eu vou plotar a leitura da minha amostra não sei se deu para entender não deu para entender sim agora ficou mais claro porque quando a senhora explicou eu tava falhando tanto que eu não não consegui entender então mas é assim cada lote de cartucho né ele vai estabelecer uma curva diferente mas no no programa no software eu faço isso por meio do software tá bom se for naquele Outro método de formação de gel aquele lá já não eu que tenho que construir a curva padrão é que é muito

detalhe se eu for colocar uma curva padrão construída por aquele outro método porque é o analista que vai vai preparar eh diferentes concentrações do padrão de endotoxina aí a gente vai ter que fazer os ensaios para cada concentração e depois ver qual que dá positivo qual que dá negativo qual que dá positivo qual que dá negativo e tem Já um eh uma como é que fala uma referência qual que tem que dar positivo qual que tem que dar negativo e para minha curva ser aceita aquela que eu construí eh eu tenho que atender aquela referência

de padrão em tal concentração né onde o meu reagente ele é sensível quer dizer se eu tiver endotoxina vai dar gelificação e também as outras concentrações até onde pode dar Gelificação a partir de onde não dá mais né e e as concentrações superiores T que dar todas elas T que eh formar o gel é meio complicado né de primeiro para eu explicar isso acho que vai ser difícil de vocês entenderem mas se você entendeu eh a curva padrão desse método aqui né que é o método cromogênico né ou do PTS aí tudo bem Tá bom

Karim certo então no caso do outro teste é para você construir como se fosse um limar de positividade e nesse outro é Uma mais automatizada que já tá no software do do aparelho isso mesmo certinho então assim para você ver que o a outra técnica ela é mais trabalhosa é mais barata porque os se agentes são mais baratos os materiais são mais baratos mas dá muito mais trabalho porque para cada lote eh você a gente fala assim que tudo tem que casar é o lote do reagente com lote da água que a gente adquire e

com o lote da endotoxina por quê Porque a curva aquela curva Específica que eu vou construir ela serve só para aquele lote de reagente que eu preparei e aquele lote de endotoxina É que eu usei para construir a curva no caso demora eh quase que uma manhã inteira para eu construir uma curva naquele outro sistema enquanto que aqui não por isso que ele é prático é para radiofármacos de meia vida física curta porque aí no caso eu só diluo a minha amostra eu ligo O aparelho espero ele estabilizar eu abro ali o programa eu coloco

o cartucho espero também ele estabilizar aí eu já eh coloco ali a minha amostra dou o start entre 15 a 20 minutos ele já me dá todo o resultado né então é um método super prático mas eh o cartucho Nossa na época que eu tava lá cada cartucha acho que era R 200 Então se a gente errasse uma análise e tivesse que reped suponha ai na hora de pipetar você errou na pipetagem aí Você tinha que desconsiderar você tinha que cancelar aquele ensaio começar tudo de novo pegar um outro cartucho então lá se ia R

200 Por Água Abaixo né então mas é um é uma técnica muito sensível eh e além do mais era uma eh é uma técnica que quantifica a endotoxina tá bom Bom vamos lá então eu tava aqui né Eh então esses equipamentos ou mesmo dispositivos eles são usados assim mesmo para a gente de avaliar superfície de Trabalho seja na produção seja no controle de qualidade no laboratório microbiológico mesmo as luvas do operador elas também são testadas existem eh placas especiais pra gente fazer a mostragem eh de todos os dedos das luvas do operador paraa gente avaliar

eh se a luva do operador ela está eh contaminado ou não né então onde que nós fazemos esses ensaios de monitoramento ambiental nas salas limpas Nas selas nas caixas de luvas da produção e dispensação né de radiofármacos e nas salas limpas do laboratório microbiológico do controle de qualidade Ok esse equipamento que está aqui embaixo do lado inferior esquerdo ele é pr contagem de partículas não viáveis então tem um aqui um filinho né parece é um filinho de amostragem você liga o aparelho ele também funciona como uma bomba de sucção e você coloca os parâmetros ali

né E por quanto tempo Que você vai fazer essa amostragem e mesmo a o volume de ar que você vai coletar durante um certo tempo então aqui é um outro modelo acho que deixa eu ver ah esse aqui do lado esquerdo inferior é praticamente o mesmo desse lado direito aqui né Ele só não tá com aquele funil Zinho aqui em cima Esse daqui é um outro modelo um outro fabricante existem vários fabricantes no mercado né E são eles que devem eh fazer eh a qualificação desses equipamentos né Então nós contamos partículas de diversos tamanhos então

de 05 ou 03 micra e de C micra Então são partículas pequenininhas e partículas grandes eh esse daqui já está estabelecido em Norma né esse tipo de e especificação né quais tamanhos de de partículas nós temos que contar Aqui nós temos duas tabel linhas eh tiramos essas tabelinhas da in 35 eh que está vinculada à Norma de boas práticas de fabricação eh e é Especificamente para medicamentos estéreis esses essas tabelas ou essas informações também estão eh naquela Norma ISO Eu comentei até com Fábio na na outra aula na ISO 14644 que também fala sobre eh

a classificação de áreas né então fala classificação da limpeza do ar salas limpas e ambientes controlados então é o mais ISO eh 14644 que fala então sobre a o monitoramento ambiental Então nesse Primeiro quadro na verdade vamos eu vou falar primeiro do quadro abaixo que o sistema de classificação de ar para produção de produtos então nós temos aqui o número de partículas de tamanho de 05 e de 5 micra então a classe ISO 5 ela engloba grau a e grau b e a ISO 7 engloba o grau C então nós temos aqui os limites que

devem estar essas partículas né o número de partículas de cada di né então se vocês forem ver aqui eh pra Classe de grau A e B A única coisa que difere são as partículas maiores então quanto mais CR crítica a área então tem que ser menor o número de partículas seja partículas de dimensão de 5 micra seja de partículas de dimensão 05 OK aí vamos passar para essa tabela aqui superior aqui então nós estamos falando dos limites em unidades formadoras de colônia para contaminação microbiológica então Aqui nós temos os Graus A B C e D

aqui é o tipo de ensaio que eu vou fazer aqui amostra de ar então é aquela que succiona o ar né um determinado volume de ar durante um certo tempo e essa segunda coluna é de placa de sedimentação São aquelas plaquinhas que ou eu coloco na superfície de uma bancada ou mesmo num chão mas numa área limpa num ponto que já foi definido é previamente placas de contato são placas Menores e cujos meios de Cultura tem a superfície um pouco eh convexa né Ela é abaulada para fora para eu poder fazer a amostragem daquele local

eh da bancada de trabalho e como eu falei para vocês impressão das luvas né são cinco dedos de cada mão e os limites então vocês veem que o grau a né ISO 5 grau a é praticamente não tem que ter nenhum crescimento menor que um é nenhum crescimento né de grau b a tolerância é Um pouco maior de grau C né E vocês vem também que a impressão das luvas ela é feita ali próximo à manipulação do produto tá bom eh O que é que mais eu ia falando aqui bom vamos seguir aqui eu só

eh eu circulei porque é isso aqui essa tabela que vai determinar a classificação das áreas limpas né então ISO 5 grau a é mais restritiva a b é a área que circunda o local de grau a e a ISO 7 é grau C Ok é é a menos restritiva Dentre as que estão nessa tabela uma outra informação que é importante no monitoramento ambiental são esses dois estados aqui Estado em repouso e estado em operação o estado em repouso na verdade eh Rúbia esse monitoramento ambiental ele é feito na maior parte das vezes antes da produção

né durante a produção eh a gente não não é que a gente não faz né lá no centro de Radiofarmácia alguns ensaios são feitos em operação mas mais para eh validação e no controle de qualidade é feito em operação então por isso que eu vou explicar aqui um pouco estado em repouso em operação porque assim se quando eh eu alguém ou uma empresa ou uma equipe faz a limpeza da área aí ela informa na verdade já tá tudo programado tudo programado que dia da semana vai fe vai ser feita a limpeza de que área né

que área de produção é a Sala limpa de produção de reagentes liofilizados é ali onde se faz ou se prepara prepara o ou se carrega o gerador aonde né então tem que se fazer uma programação um planejamento eh dos dias horários em que serão feitas as limpezas destas áreas e depois o monitoramento né então se é feito um uma contagem de partícula e não passa a área não tá liberada com a produção enquanto ela não estiver liberada não vai haver produção só vai haver produção Se a área estiver liberada quanto ao monitoramento de partículas não

viáveis porque as a gente vai ter um tempo ainda para incubação certo então se por acaso Se por acaso der crescimento em algum meio e esse crescimento Estiver dentro da especificação pra área E aí o produto que for fabricado depois tudo bem quanto ao teste de Esterilidade aí não tem problema o problema vai ser se o produto foi reprovado né Aí vai ter que abrir uma investigação de tudo quais pontos foram monitorados se houve crescimento se foi feita a lieza coreta quem que fez né se houve crescimento A gente vai ver mais para frente que

tipo de microrganismo cresceu né então se for material radioativo a gente não pode deixar um contador de partículas ligado por quê Porque eh o ambiente vai estar com radiação então normalmente a gente não coloca contador de partículas junto no processo nós podemos colocar placas Geralmente se coloca placas as placas de sedimentação mas o contador de partícula não porque mesmo essas placas de sedimentação se você colocar Numa célula de produção de iodo a a placa vai sair contaminada o operador precisa tomar o maior Cuidado para não se contaminar eh com este material então vocês vem como

é Complicado o processo de produção de radiofármacos nesse requisito eh de sala limpa né É é bastante é complicado então a gente não coloca contador ao mesmo tempo a gente coloca contador na produção por exemplo de kits Isso sim tá bom tudo bem Rúbia é bem complicada essa questão né a gente procura cercar o máximo possível quando a gente sofre uma inspeção regulatória né o pessoal pergunta tudo Isso aí eles Eles olham perguntam porque você faz isso porque você não faz e a gente tem que justificar é Tecnicamente muitas vezes nós que manipulamos material radioativo

a gente tem que justificar porque não é possível você submeter o equipamento a se o equipamento ficar contaminado quantos equipamentos eu devo ter né Eu não eu não tenho condições financeiras para ter um equipamento dedicado para cada cela para cada sala geralmente Esses equipamentos eles entre aspas eles vão andando para lá e para cá né eu vou descontaminando fazendo a sepsia e vou carregando pras áreas se forse dedicar até que eu poderia fazer assim de uma forma um pouco mais eh mesmo assim não sei né Porque se é um local onde se manipula material radioativo

se o equipamento se contaminar dependendo do radiomic ele vai ficar ali em decaimento Um tempão né até poder ser usado novamente isso atrapalha a minha rotina Tá bom então o Estado em repouso é a S Ai gente já tá na hora do do intervalo vocês querem intervalo a gente pode fazer 10 minutos pode ser só a Mona Lisa respondeu ok então vamos fazer intervalo como de prae eh no meu O relógio não são 8:35 é 8:34 a gente pode voltar mais ou Menos 8:44 45 Pode ser então tá bom então pessoal a gente volta daqui

10 minutinhos Tá vou tomar uma água faz eh descansar um pouquinho esticar tudo bem l