então vamos falar agora sobre a pcr em tempo real e olha só a pcr em tempo real para sua sorte é a mesma coisa percebem se você entendeu que a pf se você já sabe o que a pf já entendeu que a pensar em tempo real basicamente porque há a americana coca é a mesma o que a gente vai fazer ali é várias cópias de um fragmento específico que vai colocar um tubo todos os ingredientes para se fazer cópias de um fragmento específico com uma diferença além de todos os ingredientes que eu falei pra vocês
que a gente vai colocar no tubo também o ingrediente extra que é um agente florescente é justamente o agente florescente que nos permite fazer o monitoramento da reação de pcr em tempo real então é justamente a geração de sinal florescente e diferente entende diferente intensidade que faz com que a gente consiga fazer um monitoramento da reação em tempo real apesar do nome apesar do nome da pcr em tempo real nunca a análise dessa reação elas são feitas em tempo real você utiliza a capacidade do da geração de dados em tempo real mas analisem se ela
não vai ser feito em tempo real você vai fazer a reação vai processar esses dados depois digitalmente é diferente da pcr você vai pro são digitalmente vai analisar o computador para daí sim receber os resultados finais e aí como que ea gente consegue então gerar números é diferente da pcr convencional como que a com a pcr em tempo real a gente consegue gerar números porque que nós estamos fazendo com uma pcr em tempo real nada mais é do que pegar uma informação biológica que a gente não consegue ler entender e traduzir na verdade essa informação
biológica em uma informação digital quem faz essa transformação essa tradução na verdade é o agente florescente porque a gente consegue captar fluorescência e transformar a intensidade fluorescência em números e é a partir daí a gente consegue quantificar em analisar a amostra vamos entender que de uma maneira mais é mais didática e aqui está o pulo do gato era se vocês quiserem entender como funciona ana a pcr em tempo real aqui está o pulo do gato vejam só o nível de florescência la em um tubinho na minha reação ao longo da pcr o nível de fluorescência
ela aumenta de maneira proporcional ao aumento do número de cópias do álbum na reação durante a pcr nós temos um álbum que vai ser amplificado nós vamos fazer várias cópias de um alvo é isso que vai fazer e o pulo do gato é que conforme vai aumentando esse número de cópias ao longo dos ciclos da pcr vai aumentando de maneira proporcional à intensidade do agente florescente que a gente colocou lá na reação também então o nível de florescência ela tem que ser proporcional à quantidade de dna que está sendo gerado em cada ciclo da pcr
parná tô pcr em tempo real é isso que vocês vão saber a partir daí a gente não tá fácil vamos lá pcr em tempo real a mesma coisa pf então a gente tem um começo da pcr em tempo real o nosso fragmento alvo é quem tem pouca quantidade inédita um fez cópias ainda sentem por continuar nós temos pouca quantidade também dá porque de florescência de maneira proporcional aí a gente faz o primeiro ciclo ea gente gera duas moléculas a partir daquela uma como a gente gera duas moléculas aumentar um pouquinho o que tem que acontecer
com o sinal florescente aumentar um pouquinho também de maneira proporcional depois mais pra frente a gente passou para quatro moléculas que acontece no florescente ele aumenta de tal maneira que seja referente à quantidade de quatro moléculas a sua reação e assim por diante no final da reação de pcr o que nós temos aquela quantidade imensa de agente de de moléculas de dna do nosso fragmento alfa e uma quantidade proporcional dessa flor essência que foi gerado beleza isso então nós aumentamos gradativamente a quantidade do nosso alvo na reação e consequentemente paralelamente a gente aumentou a quantidade
de fluorescência nós aumentamos o nível de intensidade da fluorescência na reação e aí por isso a gente consegue fazer a análise em tempo real muito bem
