Teste de PCR – Reação em Cadeia da Polimerase I BIOLOGIA MOLECULAR

a PCR Reação em Cadeia da polimerase principal técnica de biologia molecular e hoje mais do que nunca a gente tem ouvido falar esse termo né Principalmente por conta do do teste da covid-19 que é o rt-pcr eu não vou falar hoje do teste do rt-pcr mas parte dele se baseia na reação em cadeia da polimerase então é imprescindível que vocês entendam É Esse princípio então você que tá tendo biologia molecular na faculdade ou que aprender um pouco mais sobre PCR assistir esse vídeo porque ele vai de uma vez por todas fazer com que você entenda

o princípio desse importante o teste bom pessoal é a reação em cadeia da polimerase ela recebe essa sigla de PC e por conta da sigla em inglês que é polymerase chain reaction não confundam com a PCR de análises clínicas que a proteína C reativa que não tem nada a ver o objetivo dessa e replicar uma parte do genoma humano não Genoma completo mas uma sequência específica um gene alvo é e amplificar isso em bilhões de cópias essa amplificação é uma amplificação enzimática Então a partir de uma sequência específica serão produzidas bilhões de cópias dessa sequência

ela foi essa a técnica foi desenvolvida por um bioquímico norte-americano chamado que é o ímanes em 1983 ele foi agraciado pelo Prêmio Nobel de química de uma década depois em 93 de tão importante que foi essa técnica Oi e essa técnica ela é dividida em três etapas e e nós tem que essas três etapas pessoal é independente se a pessoa é convencional que é em gel de agarose ou se é PCR em tempo real ela vai seguir essas três etapas 1ª Etapa desnaturação a dupla fita do DNA ela se abre de por conta da temperatura

ela que essa 95° eu dupla fita cê abre segunda etapa anelamento é resfria-se para 55 a 65 graus e os primeiros que são os iniciadores que marcam a sequência do Gene alvo eles vão se anelar as fitas simples recém-abertas a terceira etapa extensão ela aumenta a temperatura equipamento aumenta a temperatura para 72 graus EA enzima DNA polimerase ela vai adicionar os novos nucleotídeos e sintetizar essa nova fita então vejam aqui na imagem pessoal que uma molécula de dupla-fita de DNA ela tá representada aqui em cinza tem um DNA genômico restante em vermelho aqui tem um

gene alvo então não primeiro ciclo O que é essas três etapas que a gente acabou de falar desnaturação anelamento e extensão ele vai produzir de é uma molécula de DNA duas moléculas ou duas fitas vão ser produzidas 4 fitas é quatro cópias desse Gene alvo isso depois do primeiro ciclo finalizou o primeiro ciclo entre o segundo ciclo novamente desnaturação anelamento e extensão de 4 cópias nós vamos ter oito cópia o interesse entre o terceiro ciclo então nós tem que ele vai crescendo exponencialmente de 8 para 16 de 16 para 32 e assim sucessivamente numa amplificação

exponencial geralmente a gente faz 35 ciclos após 35 ciclos nós vamos ter então cerca de 68 bilhões de cópias é bom pessoal então se liga só nesse vídeo que eu na Ri que esse vídeo eu peguei ele daqui do YouTube Eu não achei faz tempo que eu tenho ele eu não achei De quem é a autoria mas eu peguei e traduzir né a narração e ficou ficou bem didático quem fez esse vídeo tá de parabéns e eu narrei para vocês então vocês vão conseguir entender como é o processo ok pessoal então assistam aí bom então

só Relembrando o objetivo desta técnica é amplificada terminada a sequência do DNA produzindo bilhões de cópias de um determinado fragmento de interesse Então não vai replicar o Genoma completo né mas só a molécula alvo que nesse vídeo ela vai estar representada pela cor verde e o DNA genômico né do organismo na cor azul e a PCR consiste na repetição de três ciclos O primeiro é a desnaturação em que aquece o DNA A 95 graus e as ligações de hidrogênio então entre as bases nitrogenadas são rompidas e a dupla fita então ela se abre e em

seguida temperatura resfriada entre 55 e 65 graus a segunda etapa que é o anelamento que consiste no pareamento dos primers que marcam a sequência alvo no DNA genômico E então inicia-se a 3ª Etapa que é extensão na qual a enzima taq polimerase irá utilizar os nucleotídeos livres que são os dntps para construção de uma nova molécula é nessa etapa a temperatura ela já aumentou para 72 graus que a temperatura ideal para essa enzima E como tá a taq polimerase ela só começa a replicar a partir de um primer no fim do ciclo do 1º ciclo

é teremos duas moléculas de DNA com a fita parcialmente dupla bom então a partir daí a finaliza o primeiro ciclo a partir daí nesse outro ciclo e novamente as três etapas desnaturação a 95 graus e depois o anelamento entre 55 e 65 graus dependendo do primer os primeiros marcam a região alvo então aquece novamente a 72 graus para acelerar a reação e a taq polimerase entre em Ação fabricando mais uma molécula tão no final do ciclo 24 moléculas de DNA com a fita parcialmente dupla são produzidas né todas contendo se ao DNA alvo mais algum

DNA de já senti então no 3º ciclo ocorre tudo novamente né desnaturação anelamento né com os primeiros depois a taq polimerase 72° fazendo a extensão Oi e aí o o ciclo 13 ele vai produzir então duas moléculas que vai ter somente o DNA alvo e mas seis outras moléculas com DNA Alvo Mais um pouquinho de DNA adjacente né E aí no no círculo seguintes né Ah a minha molécula de DNA alvo vai começar a aumentar exponencialmente então no quarto ciclo tudo de novo nela nem desnaturação anelamento e por fim a extensão Oi e aí então

no fim do do quarto ciclo nós vamos ter oito moléculas de DNA alvo puro com a minha com a minha molécula de interesse mais oito moléculas condene Alvo Mais DNA adyacente que tá ali representada em azulzinho na esquerda então no ciclo 5 novamente desnaturação depois do anelamento e depois a extensão tão notem que a cada ciclo o aqui a nossa direita a molécula de DNA alvo puro que é só esse verdinho ela vai aumentando exponencialmente tá então no fim do desses itens tem 22 moléculas-alvo mais 10 moléculas é com DNA adjacente aí lá no final

do ciclo 30 tá normalmente a gente faz 30 a 35 ciclos nós vamos ter somente 60 moléculas com DNA adjacente e mais de um bilhão de moléculas com o meu DNA é né então é isso quer dizer que no fim da dessa técnica o produto final da PCR ele é virtualmente a minha sequência de DNA alvo e é isso pessoal ajudou a vocês gente quando eu assistir esse vídeo eu tava na faculdade e ele me ajudou assim muito ele me esclareceu de uma maneira assim reveladora eu espero que tenha esclarecido para vocês também comentem aqui

se gostaram se entenderam e nos vemos no próximo vídeo E aí E aí [Música] E aí [Música]