é bom gente a gente fala agora de turbidimetria e nefelometria e são outras duas técnicas utilizadas também pelo laboratório de análises clínicas é para fazer análise dos exames né a gente já falou a respeito da espectrofotometria né que vai utilizar o absorção ou a transmissão da luz para poder avaliar né a concentração do analito que a gente quer é dosar só que existem outros fenômenos relacionados à luz que podem estar relacionados né a [Música] direcionar uma fonte de luz direta a uma cubeta né não somente absorbância e transmitância vão ser os fatores analisados então quando
a gente tem partículas que estão suspensas em uma solução né uma cubeta elas vão turvar o meio a gente tem como característica né das dosagens em espectrofotometria a questão do o concentrado né maior absurdo mancha né e maior mais intensa né é a cor do analito que eu tô observando-se a gente está usando isso na faixa da luz visível né por reação colorimétrica por exemplo só para gente lembrar que nas reações ultra-violeta a gente não vai ter cor né sendo gerada mas nós colorimétrica e sim então quando eu tenho partículas em suspensão numa determinada solução
eu tenho uma pequena turvação a luz incidente né a luz que chega nessa cubeta pode pode sofrer três tipos de reações diferentes uma parte da luz vai ser diretamente absorvida pela mostra então uma parte da luz que foi jogada né em cima dessa mostra vai ficar na mostra é uma outra parte vai ser transmitida e uma outra parte vai ser refletida deixa eu apagar aqui que acabou ficando em tudo quanto foi direção a gente ficar mais legalzinha é uma parte da luz então vai ser absorvida pela mostra uma parte vai ser transmitida então aqui ó
180 graus ou equivalente ao que foi transmitido e outra parte vai ser dispersa em outros ângulos com 45 como 90 graus isso é o que acontece com o fenômeno é de absorção né desde que eu tenha partículas em suspensão na minha mostra isso que vai acontecer quando a luz chega até a cometa tá então antes da gente descrever as duas metodologias né turbidimetria e nefelometria já falar um pouquinho relacionada youtube desde concentração com a redução da transparência de uma mostra né devido à presença de partículas em suspensão que interferem a passagem de luz pelo fluido
né então você pode ter redução ou aumento da transparência e dependendo da quantidade de materiais que você tem ouvidos que você tem suspensão naquele determinado conteúdo né que é determinada amostra que você tá analisando quanto mais tu vai a sua mostra mais concentrada é o tá aqui por exemplo a gente tem é uma imagem de quatro quatro recipientes de vidro aqui a gente tem um bem transparente e aqui a gente já começa a ver a diferença transparente aqui de até um pouquinho mais sujinho né vamos chamar assim aqui um pouquinho mais e aqui bem turvo
né então a medida que eu aumento a turbidez eu diminuo a transparência essa redução de dar transparência é justamente de a presença de partículas em suspensão dá uma pessoa seguinte imagine que você tem lá na sua casa né gente vai fazer assim como se fosse esses quatro recipiente aí tem quatro copos porta-copos aquele copo americano mesmo se você enche exatamente os quatro copos com a mesma quantidade de água não precisa ser até a boca mas encheu quatro copos no primeiro copo e você não coloca nada no segundo copo você vai colocar duas colheres de areia
no terceiro copo seu colocar quatro colheres de areia no quarto copo você vai colocar 6 colheres de areia em todos esses você me acha um pouquinho né quando você vai olhar para os copos né você vai ver que a água ficou suja né que você jogou terra né dentro da água do areia dentro da água mas aquele copo que você não mexeu não tinha nada só tem água ali ele ficou transparente ele continuou só contendo água é mas os outros copos nenhum você colocou 2/8 você colocou quatro outras e colocou cheios à medida que você
foi aumentando a quantidade de partículas que vão tá em suspensão mais turvo ele foi ficando e eles que mostra dessa imagem aí então quanto mais turvo mais concentrado quando vai a quantidade de partículas que estão em em suspensão né mais turva é a minha mostra em análises turbidimetricos a gente vai usar um tempo falado eteo né que é unidade de turbidez nefelométrica tá é a unidade de medição que caracteriza a turbidez quanto mais turva for a sua mostra maior é o n t u então por exemplo dessas quatro amostras que a gente tem aqui representadas
e boa tarde aqui é a de maior ntu-1 vou apagar a de maior n t u vai ser a mais turva ea de menor n t u aqui não tem nada tá então a medida que eu vou aumentando o meu grau de turbidez é o aumento o meu n t u mais partículas em suspensão eu passo a ter tá ok então aqui quando a gente fala em turbidimetria e nefelometria eu tô falando em partículas suspensas na minha mostra fiquem com essa ideia de areia né terra de algo que esteja em suspensão no meu material coisa
que a gente não via lá em espectrofotometria aspecto fotometria você tinha um conjunto de reações né mas onde você tinha um material que chama completamente dessolvido ele na sua morte você não tinha partículas suspensas não existe uma diferença aí entre um tipo de metodologia e outra tá a demetria e nefelometria são dois duas formas né de analisar são muito parecidas são duas técnicas analíticas muito parecidas no laboratório de análise tá a tudo de metr ia ela foi inicialmente descrita em 1942 então é uma coisa eu tô novinha assim não né é por foster num estudo
de dosagem na penicilina avaliando e inibição do crescimento de staphylococcus áureos esse método utilizado para medir a concentração de partículas grandes e que não podem ser mensurar mensurados né não podem ser medidos por meio de espectrometria espectrofotometria né o espectroscopia de absorção são partículas de maiores né que vão tá suspenses e se você usar pura e simplesmente a spectrophotometer né de absorção você passa a ter interferência no seus resultados estamos para o tamanho da a sacola está passando direito tá ficando direito ali na mostra né então você em espectrofotometria você teria uma um resultado não
muito correto né digamos assim então a gente consegue detectar proteínas séricas né como pra lumina complexos antígeno-anticorpo a gente consegue detectar a presença desse tipo de analito né através da redução da transmissão da luz então quanto mais turvo né menos luz passa o princípio é muito parecido com o da espectrofotometria né aqui a gente vai estar avaliando então o grau de turbidez ela tá mais turva mello luiz passa tá essa é a turbidimetria então ela valia à luz transmitida que uma não faço medição de absorbância meço luz transmitida pela minha mostra tá e ele se
baseia na dispersão de partículas que estão em suspensão a gente joga um feixe de luz né ensino bombardeia essa cubeta com o feixe de luz e as partículas é que estão ali em suspensão elas podem sofrer né que eles três quilômetros que a gente já comentou anteriormente uma parte da luz vai ser absorvida outra vez é transmitida e a outra vai ser ali refletida dispersa né em diversas direções diferentes então a quantidade da luz transmitida frontalmente ela é detectada tá então dá turbidimetria eu tenho um sensor no detector que vai estar posicionado a 180 graus
para detectar a quantidade de luz e foi transmitida por essa mostra então dentro do aparelho o sensor do youtube de no turbidímetro neosensor turbidimétrico ele vai detectar essa transmitância né a quantidade de luz transmitida a 180 graus e as soluções que exigem na quantificação por método turbidimétrico elas são realizadas por meio de fotômetros ou espectrofotômetros na região visível ou seja o equipamento pode ser o mesmo que a gente usa para fazer as outras análises bioquímicas de laboratório então tem essa vantagem porque como ele tá ali é sendo é fazendo a medição da luz que passou
né e eu vou ter que fazer a medição de luz transmitido não posso pegar absorbância nesse caso né é para poder analisar a minha mostra então equipamento inclusive os equipamentos mais sofisticados a gente rodam com kit turbidimetricos também tá várias são as aplicações clínicas né tanto no setor de microbiologia né para detecção de crescimento bacteriano através da turvação presentemente meios líquidos medida de sensibilidade de a minha matou logia pode ser utilizada na detecção de coágulo e analisadores de coagulação mas assim o uso mais comum é de fato no setor de bioquímico pode usar a lei
para codificar proteínas na urina no líquido cefalorraquidiano nem no sangue enfim né o setor é de bioquímica é um dos que vai mais utilizar aí a turbidimetria nas suas a morte bioquímica junto com o imunologia tá em mundo a gente pode utilizar para fazer a quantificação de proteína c reativa né e entre outras aplicações ainda turbidimetria e em relação a muitas outras análises ele tem esse como certa vantagem a rapidez né a facilidade de operação já que ele roda no espectrofotômetro também né ele consegue medir com um grande exatidão né e tem uma resposta objetiva
uma exatidão tá para para fazer as análises ali dos seus resultados e uma das dos princípios dos kits de youtube de metr ia é que eles têm látex né na sua composição deixou passa aqui para vocês verem o exemplo de um kit su e quando a 47 e aí e depois eu volto aqui no slide para gente ver vocês verem por um e a gente vai ter nesse princípio né no kit específico é a dosagem vai ter lá o uso de partículas de látex para aumentar a sensibilidade né e boa parte dos kits turbidimetricos né
vai utilizar ali um princípio da imunoprecipitação que é uma reação entre antígeno e anticorpo e vai marcar um dos dois com látex ou eu marco antígeno para detectar onde corpo na morte do paciente ou marcante corpo para detectar o eventual antígeno na a morte do paciente então vai ter uma ligação ali entre antígeno anticorpo junto com o atrix junto e essa essa ligação do lápis né o que vai facilitar ele a suspensão né e a detecção da amostra pelo equipamento tá então é de a ver é que os kits da grande maioria dos kits hoje
funciona só tem que tomar cuidado pelo seguinte todo método todo o exame que faz faz dosagem através da turbidimetria assim como todos os outros né ele vem escrito a metodologia vem escrita no kit de dosagem do exame ah então não dá para gente dizer se a todo o exame para pcr vai ser por turbidimetria não não vai existe o pcr direto por aglutinação né é com látex ah mas também uso a lata de estimação metodologias completamente diferente tá ela que tá sendo dosado é a mesma coisa mas a metodologia diferente então vou falar mais uma
vez leitura de bula aprender o que se fala no kit é extremamente importante na hora de fazer a análise tá então a gente falou das vantagens da turbidimetria e tem algumas desvantagens toda e todo técnica tudo detecção tem vantagens e desvantagens as desvantagens tenha necessidade de um equipamento de leitura da resposta né ausência de contaminação grosseira ou coloração da mostra que vai interferir ali na leitura fotométrica ou seja tem que dizer que está bem a tua reação executabem a leitura uma coisa que é bastante importante também se prestar atenção né eu acabei não falando anteriormente
nisso mas serve tanto para turbidimetria para nefelometria quanto para todas as outras técnicas que a gente a falar extremamente importante atenção à validade do kit né assim como a gente tem que ter atenção a validade de tudo que tem na nossa casa a gente tem mania de falar sem água venceu ontem né venceu ontem então não faz tanta diferença faz faz toda a diferença existe um prazo de validade se passou no prazo passou do prazo não tá vale tá então a gente tem que estar dentro da validade outra coisa importante também e nem tudo é
perfeito né todo kit de reação ele é um produto né assim como qualquer outro então produtos estão sujeitos a falhas né por isso que vocês têm aí é a validação de solução-padrão faz ali a calibração com branco onde vez em quando você começa a ver umas coisas muito discrepantes na hora de realizar um teste significa dizer que aquele que a gente não tá tão bom né não tá dentro dos padrões ideais tão importante viu que tem qualquer coisa errada ali repórter e isso a supervisão né e algumas a análise de um ser feitas ali para
ver se existe realmente algum problema relacionado aquele kit né de repente é em caso né de problemas com a dosagem o fornecedor tem que ser avisado tá então é é passível de erro não existe a todos os kits desse fabricantes são perfeitos e não é pro o mesmo acontece a não deve acontecer com frequência mais às vezes acontece bom então só para gente resolver que a gente falou né turbidimetria vai ser a detecção da quantidade de luz transmitida o detector vai ficar aqui a 180 graus a gente pode utilizar a turbidimetria então para uma finalidade
laboratorial para dosagem de proteínas né e anticorpos reação ele entra antígeno-anticorpo a nesse lometro é relativamente parecida só que a gente tem uma questão ela vai medir a luz que tá dispersa então vou pegar a minha luz retinho agora a gente não tinha você na certa reta que é minha uma história eu tô aqui a gente tinha uma detecção uma direção só aqui não né quilometria ó vou ter um detector em 91 de ter que ter 45 vão medir na verdade a luz que foi dispersa a luz que bateu e sofreu de vinho a então
não nefelometria eu vou pegar a luz que foi dispersa tá ela é mais sensível em relação ao tubo demeter ia tá só que ela embora ela tem uma sensibilidade maior né já que ela vai pegar os sensores de dispersão da luz né então consegue ver consegue pegar é com a precisão uma sensibilidade né muito maior ela tem um ponto negativo que é também o custo maior porque demanda e equipamentos específicos né a metodologia específica então eu consigo fazer análise turbidimétrica usando um espectrofotômetro aqui eu já não vou conseguir né então é eu já vou precisar
de outros equipamentos que o meu laboratório vai ter que abrir mão vai ter que lançar mão né de ter para poder utilizar esse tipo de metodologia por isso o custo acaba sendo maior e uma relação custo-benefício né o laboratório vai querer na hora de fazer a sua dosagem ok então aqui ó aquilo que a gente fala de tupi de unidade turbidimetrica né quantidade de turbidez que vai ter que vai ser maior ou menor o feixe de luz que vai incidir na mostra eu vou ter o detector que e quando eu vou medir e esse aqui
é um turbidímetro tá quando eu tenho ali partículas né que estão suspensas na minha mostra eu passo até né essas partículas interferindo ali na questão da transmissão da luz do aqui ó tem um tubo sem nada tudo vazio e aqui um tubo né com cultura ali no colada e aqui nesse exemplo então a gente tem na verdade uma avaliação de crescimento microbiano nos meios de cultura em caldo né existem tipos diferentes de meios de cultura a gente tem meios sólidos que normalmente ficam as placas de petri para ir embora posso até ser utilizados também tubos
de ensaio a gente tem os meios semi-sólidos né que tem um aspecto um pouco mais gelatinoso e a gente tem os caldos os caldos eles são utilizados para crescimento bacteriano rápido né e algumas provas de identificação bacteriana a gente identifica a o crescimento bacteriano nos caldos através da turvação do meio então é visível né você consegue ver a diferença aqui ó tem diferença da tua olha como que você vê né o outro lado não é dudu me parece um papel centimetrado né mas enfim se você consegue ver ele os desenhos aqui você não consegue por
que que você não consegue ver que tá turvo né então essa mostra aqui tá turva essa não você consegue ver né o outro lado do que tá lá na mostra onde você não tem bactéria não tá inoculado acho no momento que você joga a luz ó ó toda a luz passou pela morte e foi passo chego lá no detector aqui onde você tem as partículas que nesse caso são as bactérias né alguns foi se perdendo aqui no meio do caminho que as bactérias impediram né a turbidez do meio entendi o que o restante da luz
passasse então olha quanto de luz chegou a diferença daqui para onde eu não tinha bactéria para esse aqui onde está cheio de bactéria ah tá então aqui eu não tinha inoculação das bactérias é que eu tinha então eu consigo usar esse método para quantificar bactéria de crescimento em caldos tudo bem e aqui a gente tem é o turbidímetro tá e aí o tio esse aqui é um nefelometro né quilômetros mais mais sofisticado tá essa aqui também esse anterior também é um nefelometro é só que de uma forma bem mais simplesinha esse sininho aqui esse aqui
ah tá e esse é um turbidímetro e esse é um nesse quilômetros mais avançado e aqui a gente já falou né da questão das partículas né com a fonte de luz o filtro para selecionar ali qual é a luz que vai e o que vai acontecer com a luz na minha mostra a parte vai ser detectada no sensor de 180 mas olha a dispersão das outras né então para eu pegar esses feches aqui que estão sendo dispersos só com a nefelometria para pegar da da direção em linha reta youtube dinheiro em ambos os métodos são
utilizados na dosagem de imunoglobulinas né pode resultar o e gg e gm já a hybrid proteínas séricas como a pcr como a ferritina como a transferrina né utilizando anticorpos específicos para cada uma aqui a gente tem um desses equipamentos automatizados fazendo a leitura da por turbidimetria hein e aí e aqui os inscritos então esse é um kit de fator reumatóide essa esse de microalbuminuria tá todos os dois aqui ó método turbidimétrico método turbidimétrico tá conteúdo do kit solução padrão em tampão e látex padrão tampão látex tá então é o látex nesses casos aqui que vai
fazer né vai estar aderido ali e fazer ajudar né nossos pensam na hora de fazer a detecção do da
