oi oi pessoal sejam bem vindos a mais um Bill resumo aqui no Instagram do Canal Bio aulas E hoje nós iremos falar sobre bactérias gram-positivas e gram-negativas e sobre a técnica de coloração de gram bom O que determina se uma bactéria é gram-positivas ou gram-negativas é a organização da sua parede celular que é composta por peptídeos clicando O que é um carboidrato e é justamente através da técnica de coloração de gram que a gente vai visualizar quem é gram-positiva e quem gram-negativa pela distinção de cores vamos a entender melhor isso mais na frente a técnica
de coloração de gram foi desenvolvido há muitos anos atrás pelo cientista Christian por isso que recebe o nome dele e até hoje é muito utilizada na microbiologia para diferenciar esses dois tipos de bactérias Então vamos lá é como eu falei para vocês o que determina se uma bactéria é gram-positivas ou gram-negativas é a organização da sua parede celular que vai influenciar na coloração de gram e observe aqui comigo aqui eu tenho a representação da parede celular de uma bactéria gram-negativa e de uma bactéria gram positiva a gente observar aqui a membrana plasmática né porque bactéria
é célula então tem membrana plasmática tem aqui esse espaço que é o chamado espaço periplasmático vejam que é mais desenvolvido nas bactérias gram-negativas nas gram-positivas o espaço periplasmático é muito Estreita é quase inexistente ela é mais desenvolvido nas gram-negativas E aí a gente observa que aqui na gram-positivas existe uma espessa camada de peptideoglicano E aí vão ter ali ácidos teicóicos Associados organizando e esse perfil brincando já nas bactérias gram-negativas é uma fina camada de perfil clicando isso porque as gram-negativas vão possui uma membrana é extra uma membrana externa formada por Lipo polissacarídeos o que faz
com que a parede celular das bactérias gram-negativas seja mais resistente certo não conhece aqui é organização geral da parede celular das bactérias gram-negativas e gram-positivas vamos entender agora como é realizada a técnica de coloração de gram antes de tudo a gente precisa preparar uma lâmina para a gente tem que realizar um esfregaço uma lâmina de vidro a gente vai coletar o material pode ser um crescimento bacteriano no meio de Cultura ou pode ser uma amostra direta como por exemplo amostra de saliva ou secreção de orofaringe para realizar esse esfregaço central e circular é de vidro
feito isso a gente tem que esperar aqui o esfregaço segue com a gente deixa lá lâmina ao ar livre para o esfregar secar ou para acelerar o processo a gente pode colocar a lâmina na estufa coloca na estufa aguardar alguns minutos quando acontecer essas secagem é preciso fixar o material para na hora da coloração a gente não perder bactérias essa fixação pode ser feita no na chama do bico de busen a gente vai passar a lâmina rapidamente na chama de três a cinco vezes para fixar o material na lâmina e aí a gente Inicia agora
a técnica de coloração de grama é a primeira etapa da coloração de gram é recobrir a lâmina com o corante Cristal Violeta e aguardar um minuto quando a gente adiciona um cristal Violeta Todas as bactérias presentes na lâmina vão se curar com essa coloração aqui de Violeta a roxo isso porque as bactérias vão absorver o cristal Violeta Principalmente as bactérias gram-positivas porque o peptídeo glicano delas já tá ali exposto que elas absorvem melhor o cristal Violeta passou um minuto a gente vai lavar Alana com água para retirar o excesso de cristal Violeta tem que ter
muito cuidado com essa lavagem tem que ser uma lavagem sucinta o Jato d'água não pode ser jogado diretamente em cima da Lama se não vai expulsar as bactérias têm que ser uma lavagem cuidadosa a água para retirar o excesso de corante feito isso a gente vai agora recobrir a lâmina com lugol e aguardar mais um minuto o lugol é um mordente ele vai fixar o cristal violeta na composição do lugol tem iodo O iodo vai se ligar o cristal Violeta e vai formar um complexo que é o complexo E o Du para Rosalina para fixar
o cristal Violeta essa fixação acontece melhor nas gram-positivos porque o pedido clicando delas já tá ali exposto feito isso passou um minuto a gente faz agora uma segunda lavagem com água para retirar o excesso e agora olha só o que acontece a gente vai fazer agora uma lavagem com álcool acetona esse álcool acetona vai remover o corante das bactérias gram-negativas porque porque elas é bem essa membrana externa de lipopolissacarideos quando a gente adicionou o álcool acetona ele vai remover essa camada de LPS e junto com LPS vai sair o cristal Violeta isso não acontece nada
gram-positivas porque elas não tem essa membrana externa e ela já absorveram e fixaram o cristal Violeta devido ao seu pretinho brincando que já tá ali exposto então quando a gente adiciona o álcool acetona ele vai discordar as bactérias gram-negativas e agora a gente tem bactérias gram-positivas em roxo porque elas não foram afetadas e as gram-negativas sem cor né a gente faz agora uma terceira lavagem com água né para remover o excesso e agora vem o diferencial a gente vai recobrir a lama com corante de uma coloração diferente para curar quem tá sem cor que no
caso são as bactérias em cima tá gente vai recobrar Alana com Fluoxetina ou safranina que são corantes de uma coloração ali Rosa né e aguardar 30 segundos esse corante ele vai colar as gram-negativas que antes estavam sem cor passou 30 segundos a gente vai lavar com água novamente para retirar o excesso de espera a lama secar ao ar livre e leva para observar num microscópio objetivo de 100 com óleo de imersão e a gente observa as bactérias na seguinte forma bactérias gram-positivas coradas em azul ou roxo e as gram-negativas coradas em rosa certo então assim
que é realizada a técnica de coloração de gram uma técnica muito importante porque é um passo inicial para o diagnóstico de infecção bacteriana através dessa técnica a gente consegue identificar se a gram positiva ou se a gram-negativa e ainda o casal formato da bactéria gente consegue ver se é um bacilo sem estreptococos estafilococos e a parte disso a gente vai decidir uma outra técnica para complementar né para identificar qual de fato é a bactéria certo eu espero que vocês tenham compreendido e a gente se vê nos próximos resumo
