Análise Instrumental - Aula 13 - Cromatografia Líquida

[Música] bom olá vamos iniciar a nossa aula de cromatografia líquida então a cromatografia líquida é uma análise né de separação de componentes de uma mostra esses componentes eles são separados pela distribuição tem uma fase móvel que é líquida e uma fase estacionária que pode ser líquido ou sólido dentro de uma coluna pequena a cromatografia líquida ela se divide em dois tipos tão cromatografia líquida clássica que é uma cromatografia mais de separação é e uma cromatografia mais preparativo para separar por ficar alguns componentes e ao promotor grafia líquida de alta eficiência que é que nós temos

interesse no nosso curso que é uma cromatografia analítica a promotora grafia de alta eficiência é o tipo mais versátil e mais amplamente empregado de cromatografia mais do que cromatografia gasosa e o tipo de cromatografia líquida ele vai ser definido pelo mecanismo de separação entre o soluto nem a fase estacionária então essa separação pode acontecer por partição ou cromatografia líquido líquido ou seja é a fase estacionária é uma fase líquida ea separação dos o luto vai se dar com solubilidade ou seja parte são pode ser por adsorção ou cromatografia líquido sólido onde se tem uma fase

estacionária sólida ea interação então entre os o luto ea fase estacionária é que vai definir a separação pode ser uma crono grafia por troca iônica ou cromatografia de íons pode ser uma cromatografia por exclusão então vai ser uma exclusão por tamanho de partículas dos o luto ou cromatografia por afinidade que aquela cromatografia muito utilizado em compostos biológicos para enzimas e substratos algumas vantagens da cromatografia líquida rapidez na análise rápida de alta resolução dos picos pode ser utilizado para a análise quantitativa tem uma boa sensibilidade pra amostras com baixa concentração dos analisados versatilidade pode ser utilizada

para vários tipos de análises e automação é possível então ter mostradores automáticos que vão fazer a análise sem precisar de ficar injetando toda hora algumas limitações da técnica alto custo de instrumentos de instrumentação em operação ea necessidade de experiência no manuseio então tem que ter uma experiência e conhecimento para poder manusear um cromatógrafo líquido comparando então a técnica de cromatografia gasosa como a liquida a cromatografia gasosa tem que se ter não uma substância que seja volátil e tecnicamente estável na tomografia líquida mostra tem que ser solúveis na fase móvel os tipos de amostras na cromatografia

gasosa pode ser utilizado gases líquidos e sólidos na cromatografia líquida líquidos e sólidos podem ser as fases da amostra é a quantidade mínima detectável no cromatografia gasosa pode se detectar até 10 ou menos 12 gramas e na cromatografia líquida até 10 ou menos nove gramas a capacidade preparativa na cromatografia gasosa é mais trabalhoso e na cromatografia líquida é de fácil coleta e possibilidade de automação a capacidade analítica é na cromatografia gasosa é excelente podendo separar mais de 200 componentes e na cromatografia líquida ela também é boa podendo separar até 50 componentes aqui tem um exemplo

de um instrumento um cromatógrafo então aqui a gente tem cromatógrafo nem o computador ele vai auxiliar com os sinais né pra poder transmitir os sinais para o analista aqui então tem um esquema da instrumentação onde a gente tenha fase móvel que é um líquido que ele vai ser puxado por uma bomba e no caminho até a coluna cromatográfica ele vai se encontrar com a amostra então ele vai carregar a mostra até a coluna tô aqui na coluna vão ocorrer as separações dos analisados após a separação né os analistas vão então para um detector que vai

analisar esses analistas em termos de concentração quantidade de análise tu e o tempo em que ele ficou retido na coluna cromatográfica é tem-se aqui um suporte para os resíduos né já que a fase imóvel é líquida então esse líquido vai saindo da coluna e ele tem que ser coletado de alguma forma e os dados então você processados em um computador algumas características da fase imóvel ela precisa ter um alto grau de pureza ou seja de fácil purificação e desgaseificação ela tem que dissolver as amostras sem de compor os componentes ela também não pode de componentes

ou ver a fase estacionária então eu tenho que ser inerte a fase estacionária tem que ser compatível com um detector é ter prioridade adequada para permitir separações dos componentes na mostra então dependendo da substância que se tem na mostra é tem que se ter um tipo de fase imóvel então tipo de fase móvel vai depender da mostra e também do tipo de coluna então por exemplo a cromatografia líquida pura dessorção a fase estacionária ela é polar ea fase móvel então vai ter que ser um solvente - polar ou acolá o sistema de eluição da fase

móvel então como que a fase móvel é ela passa pela coluna tem dois tipos de sistema e os o crat qo ou gradiente o sistema mais o crat qo ele é um sistema em que a constituição do solvente vai permanecer constante então se utiliza um solvente ou 2 solventes faça uma mistura entre dois solventes essa composição ela permanece constante durante toda a análise na no sistema de luz são gradiente a composição do solvente ela é alterado ao longo da análise então pode ser utilizado dois solventes por exemplo e esses dois solventes a quantidade de cada

um vai modificando ao longo da análise é o tipo de luz são também vai influenciar na resolução dos picos na então dependendo do tipo de amostra se tem muitos picos pode ser mais interessante ter uma ilusão grande enchente para poder definir melhor os picos são as colunas essas colunas são constituídas de um pedaço de tubo de material inerte geralmente se usa aço inoxidável que tem um diâmetro interno uniforme que é capaz de resistir às pressões que serão utilizados na análise às medidas geralmente se tem um comprimento de 10 a 30 centímetros então são colunas menores

do que as colunas por cromatografia gasosa o diâmetro interno de 2 a 5 milímetros e o recheio é constituído de partículas de 3 a 10 micrômetros de tamanho aqui tem um exemplo de algumas colunas né que tem uma coluna semi preparativa essa coluna semi preparativo ela pode ser utilizada para purificação de amostras a iac tem uma coluna analítica que é para análise na identificação e quantificação de amostras na coluna analítica tem também uma coluna guarda com uma pré coluna essa coluna guarda é utilizada pra é proteger a coluna analítica então ela vai retirar algumas substâncias

que podem danificar a coluna analítica os detectores a função do detector a identificar e quantificar uma substância que esteja evoluindo ou seja saindo de uma coluna cromatográfica não existe um detector universal então cada detector vai ter que ser escolhido de acordo com a amostra que se está analisando as características desejáveis ao detector ter alta sensibilidade e baixo limite de detecção para poder detectar quantidades bem pequenas de amostra é fácil de operar não destruir o soluto e ter resposta rápida e constante às alterações dos o luto então ele não pode demorar para dar uma resposta em

uma alteração porque pode prejudicar a análise é essa essa resposta tem que ser também constante já que as amostras vão ficar saindo constantemente da coluna alguns tipos de detectores que eu trouxe como exemplo alguns eu coloquei destacados porque são detectores que a gente já viu em outras aulas que fazem parte de outras técnicas de análise instrumental então detector baseado na absorção de luz ultravioleta visível detector baseado na flor essência da mostra detector baseado no espalhamento de luz da mostra detector baseado no índice de refração da amostra pode usar também detectores eletroquímicos que vão já as

técnicas eletroquímicas já vistas e o espectrômetro de massas eu trouxe algumas aplicações para a gente entender melhor como funciona a cromatografia líquida então aqui uma das aplicações é a análise de poluentes orgânicos provenientes de produtos de higiene pessoal a análise foi desse componente é que o triclosan no que ele está presente em vários produtos de higiene pessoal como cremes dentais antissépticos bucais sabonetes durantes dois infectantes domésticos é ele tem uma ação bactericida o problema é que quando ele vai pro esgoto e depois para o bioma aquático ele pode causar um desequilíbrio então é importante detectar

a quantidade dessa substância é em esgotos ou mesmo nos produtos onde eles são utilizados o triclosan ele absorve na região do ultra violeta então por isso pode-se utilizar a cromatografia líquida para separar a substância que se tem interesse no caso triclosan no é como um detector de ultra violeta no caso desse nessa referência que eu utilizei foi utilizado um detector de ultra violeta com arranjo de diodos aqui é um tipo de detector que analisa por ultra violeta as condições de análise utilizou uma coluna c 18 que é uma coluna com uma parte apolar o modo

de eluição foi isopor prático então a eleição aconteceu com a mesma concentração a mesma composição da fase móvel durante toda a análise a fase móvel foi a seta nitrílica e solução aquosa de ácido fosfórico a temperatura de análise foi 25 graus celsius ea detecção foi a 230 nanômetros que era região onde se tinha o máximo de absorver lance dessa substância então aqui a gente tem alguns promotor gramas né então aqui em há cronograma do creme dental foi analisado então se tem uma quantidade de trigo lozano observou o pico do tricolor dando a partir de um

padrão tão sabia que o tempo de retenção dele era esse tempo então por isso atribuiu esse pico alto eclosão ano em b a gente tem aqui uma análise de saliva imediatamente após a escovação então apresenta também um pico com uma quantidade também é de tricô lozano em sei também foi feita uma análise da saliva após 12 horas de escovação então diminui o pico de triclosan aqui tinha mais ou menos um sinal em 30 aqui tem o sinal em um em alguma coisa mas é possível também identificar triclosan na saliva após 12 horas de escovação tão

observa o trigo usado pelo tempo de retenção e aqui é uma mostra do esgoto doméstico notem que aparecem outros picos que são substâncias que também absorvem naquela região de 230 nanômetros mais o triclosan ele é identificado pelo tempo de retenção dele outra aplicação é a análise da presença de substâncias de drogas na excreção urinária de usuários em águas e esgotos essa aplicação ela tem é uma aplicação na epidemologia epidemiologia de esgoto que prevê tendências e padrões de uso em áreas de maior incidência então uma análise muito importante para se saber que tipo de drogas estão

sendo consumidos em determinada área as condições promotor gratos cromatográficas foi o modo de eleição por grande em ti onde utilizou dois solventes o solvente era um tampão de acetato de amônio e o solvente b foi acerto entre lula então inicialmente tinha 95 por cento de acerto mitre lá que ficou por meio minuto depois diminuiu a quantidade de acerto no trio até 50% e ficou né até sete minutos e meio a detecção for foi por espectrometria de massas em série aqui a gente tem um exemplo aqui de um cronograma para esse tipo de análise onde dependendo

do tempo que de retenção pode se identificar vários tipos de metabólitos de drogas como cocaína anfetamina é tão vários tipos de drogas podem ser analisados por esse tipo de análise outra aplicação validação de tecnologia para a determinação simultânea de antioxidantes sintéticos em óleos vegetais margarinas globo e gorduras hidrogenadas por cromatografia líquida neste caso utilizou um detector de ultra violeta então a coluna foi uma coluna de sílica a fase imóvel metanol e água então também uma mistura e aí luís são também foi por um gradiente iniciou uma porcentagem 55 para 45 de metanol e água chegou

até 10 minutos em 10 minutos muda a porcentagem de metanol em relação à água né permanece nessas condições por cinco minutos e retoma as condições iniciais após os 20 minutos de corrida é a detecção aconteceu em 280 nanômetros que era a região onde se tem uma maior absurdo ânsia das substâncias que estão sendo analisadas então aqui foi utilizado para foram utilizados padrões dos antioxidantes e foram analisados que esses padrões aparece mostrava alguns picos em alguns tempos de retenção definidos foi feita análise para o óleo de canola margarina e gordura hidrogenada então óleo de canola viu

um pico que era referente a um dos antioxidantes analisados nos padrões então existe a presença desse antioxidante na gare na também obteve um pico referente a um outro antioxidante e na gordura hidrogenada apareceram dois picos referente a dois anti oxidantes presentes nos padrões nesse caso aqui a gente pode fazer uma análise qualitativa só de identificar que tipo de anti de antioxidante está presente em cada um desses produtos ou pode ser uma análise quantitativa onde é se utiliza esses padrões faz uma curva analítica com a relação da área do pico cromatográficos com a quantidade de substância

e aí consegue se definir qual é a concentração de cada um desses antigos antioxidantes nesses produtos bom essa foi então a nossa aula de cromatografia líquida até a próxima aula [Música] o [Música] [Música]