hoy vamos a conocer la microscopía electrónica Bienvenidos a una nueva edición de nutrimente si quieres tener acceso a más contenido además de los videos de YouTube te dejo diferentes opciones en la descripción de este video La mayoría de las estructuras subcelulares son demasiado pequeñas para ser observadas por un microscopio óptico como el que conocimos en el video anterior tipos básicos de microscopios electrónicos se utilizan para estudiar las estructuras subcelulares por medio de un as de electrones el microscopio electrónico de transmisión o Met y el microscopio electrónico de barrido o meb el adelanto principal de la
microscopía electrónica respecto de la microscopía óptica Es que la longitud de onda de las de electrones es unas 2000 veces menor que la de las de luz con lo que aumenta la resolución por un factor de 10 a la 3 el microscopio electrónico de transmisión utiliza la interacción de un as de electrones con la muestra para producir una imagen se utiliza principalmente para estudiar la estructura interna de la célula en lugar de explorar la superficie los electrones pasan a través de muestras muy delgadas la óptica del Met es en principio similar a la del microscopio
óptico excepto que el microscopio electrón de transmisión utiliza un as de electrones en lugar de un as de luz el principio del microscopio es el siguiente posee una fuente un cátodo o cañón de electrones como es un filamento de tuxteno calentado que emite electrones los electrones son atraídos hacia un ánodo una diferencia eléctrica entre el cátodo y el ánodo imparte a los electrones un voltaje de aceleración de entre 2000 y 200 1000 V con lo que se genera un as de electrones este as de electrones atraviesa luego una serie de lentes electromagnéticas que cumplen la
misma función que las lentes de cristal de un microscopio óptico la lente condensador da forma a las de electrones que alcanza el plano de la muestra y cambia su diámetro Entonces el As que ha atravesado la muestra es enfocado y aumentado por una lente objetivo para después volver a ser aumentado por una lente proyector o más la imagen final se mira en una pantalla fosforescente o se captura en una placa fotográfica las partes de la muestra que han sido atravesadas por los electrones aparecen claras las partes que han absorbido y dispersado los electrones a causa
de su densidad inherente o de la adición de metales pesados durante la preparación aparecen oscuras con frecuencia por arriba o por debajo de la pantalla visora se coloca un detector de electrones con un receptor sensible a la luz como puede ser un dispositivo acoplado a cargas para ver la imagen en tiempo real en un monitor esto permite archivar sin complicaciones las imágenes o los videos en formato digital en computadoras los principios utilizados en la preparación de los cortes para su examen con el met son en esencia los mismos que los que son para la microscopía
óptica pero con la restricción adicional de que en cada paso se debe trabajar con muestras tres a cuatro veces menores o más delgadas que las habituales para la microscopia óptica dada la excepcional resolución del Met la calidad de la fijación es decir el grado de conservación de la estructura subcelular tiene que ser la mejor que se pueda conseguir la preparación de rutina de las muestras para la microscopía electrónica de transmisión comienza con la fijación en glutaraldeido seguida por un enjuague en una solución amortiguadora un buffer y la fijación con tetróxido de osmio El glutaraldeido un
di aldeido preserva las proteínas al establecer enlaces cruzados entre ellas el tetróxido de osmio reacciona con los lípidos en particular los fosfolípidos el osmio también imparte densidad electrónica a las estructuras celulares porque es un metal Pesado lo cual mejora la formación ulterior de la imagen en el met el proceso de deshidratación es el mismo que para la microscopía óptica y el tejido se infiltra con una resina monomérica en general una resina epoxy que luego se polimeriza el tejido incluido en plástico se corta en micrótomo de diseño especial que usan cuchillas de diamante dado el poder
de penetración limitado de los electrones el espesor de los cortes para la microscopía electrónica de transmisión de rutina oscila entre 50 nanómetros y no más de 150 nanómetros los cortes obtenidos con la cuchilla de diamante son demasiado finos para manipularlos se hacen flotar desde el borde de la cuchilla hacia la superficie de una cubeta llena de líquido y se recogen sobre arillas de cobre revestido en plástico las rejillas o grillas poseen de 50 a 400 orificios por pulgada o ranuras especiales para ver cortes seriados El as de electrones atraviesa primero los orificios en la rejilla
de cobre y después la muestra y luego la imagen se enfoca en la pantalla visora en el dispositivo acoplado a cargas o en película fotográfica en general los cortes para la microscopía electrónica de transmisión se tiñen mediante la adición a la muestra de materiales de Gran densidad como los iones de metales pesados la tinción de rutina de los cortes para la microscopía electrónica de transmisión es necesaria para aumentar el contraste inherente de manera que los detalles de las estructuras celulares sean fáciles de ver y de fotografiar la criofractura es una técnica especial de preparación de
las muestras para microscopía electrónica de transmisión de importancia especial en el estudio de las membranas el tejido que se ha de examinar puede estar fijado o no Si se fijó en este caso el fijador se elimina de la muestra antes de proseguir se deja que un crioprotector como el glicerol por ejemplo infiltre el tejido y luego el tejido se congela rápidamente a unos -160 gr la formación de cristales de hielo se evita por el uso de los crioprotectores por la congelación rápida y por lo diminuto de las muestras el tejido congelado se coloca en el
aparato de crio fractura que posee una cámara de vacío y se percute con el borde de una cuchilla o navaja el plano de fractura pasa con preferencia a través de la parte hidrófoba de la membrana plasmática de manera que queda expuesto su interior ahora vamos a pasar a conocer el microscopio electrónico de barrido en la microscopía electrónica de barrido El as de electrones no atraviesa la muestra sino que explora su superficie focaliza un as de electrones sobre la superficie de la muestra logrando una imagen que aparenta como en tres dimensiones logra magnificar objetos hasta 2
millones de veces de aumento y no se puede utilizar sobre especímenes que se quiera mantener vivos ya que el proceso Los mata para el examen de la mayoría de los tejidos la muestra se fija se deshidrata por desecación de punto crítico se cubre con una película de oro carbono evaporados se monta en un soporte de aluminio y se coloca en la cámara para muestras del meb el barrido se consigue con el mismo tipo de exploración que hace recorrer El As electrónico sobre la superficie de un tubo de televisión los electrones reflejados por la superficie los
electrones retrodispersados y los electrones que son expulsados de desde la superficie los electrones secundarios son recogidos por un detector o más y reprocesadas para formar una imagen tridimensional de alta resolución de la superficie de la muestra el microscopio electrónico de transmisión barrido combina características del Met y del meb para permitir el microanálisis de rayos x por Sonda electrónica Así tanto el Med como el meb pueden convertirse en herramientas analíticas sofisticadas en adición a su uso como instrumentos ópticos en el próximo video vamos a hablar sobre la microscopía de fuerza atómica si este video te gustó
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