Aula Clostrídio, Salmonella e Listeria

o Olá pessoal como estão todos Espero que estejam todos bem quem tá falando com vocês nessa aula de hoje é a Michele eu auxilia professora Roberta né nas aulas práticas também nas aulas teóricas E hoje nós vamos comentar um pouco sobre três grupos de microrganismos que são os clostrídios sulfito-redutores as salmonelas e aliás literárias é essa aula gente ela é uma aula que a gente introduz né uma parte teórica a gente mostra como faz a prática e aí a gente já leva as placas prontas dessas análises tá vocês vão ver que são algumas análises bastante

delicadas de serem feitas e então por isso a gente não desenvolve a sala prática no laboratório com vocês e eu já levamos tudo pronto microrganismo É na placa de Petri para vocês verem e a respeito bom então o primeiro tema da aula né o primeiro grupo de microrganismo aí são os clostrídios sulfito-redutores eles são assim denominados por reduzirem o sulfito A sulfeto de hidrogênio e Oi e o quê que a gente vai comentar sobre esse e os outros grupos de microorganismo e é justamente né como a gente já comentou desde gente vem comentando desde a

primeira aula é as análises microbiológicas que nós devemos fazer dos produtos são e oriundas da instrução normativa né tchau instrução a qual a gente segue aí então eu coloquei aqui para vocês verem é de novo né a instrução normativa nº 60 de 23 de dezembro de 2019 ela vai está estabelecendo os padrões de cada alimento quais os microrganismos Quais as análises que deve ser realizada né para cada alimento específico bom então quando nós falamos de clostrídios sulfito-redutores e é nós estamos nos referindo SUS a um grupo de microrganismo que possui forma de bastonetes eles são

gram-positivos eles são anaeróbios formadores de endósporos endósporos é aquela estrutura de resistência né e eles possuem a capacidade de reduzir o sulfito a sulfeto eles crescem tanto a 37 graus Celsius quanto a 46 graus celsius e o principal aí dentro desse grupo né de interesse para nós como microbiologista de alimento no caso que é o que a legislação pede para estar fazendo análise é o clostridium perfringes ou seja aplicação na análise de alimento de curso clostridio sulfito redutores é oferecer uma indicação da potencial presença do clostridium perfringes que também é um micro-organismo sulfito redutor e

o clostridium perfringes e ele cresce em um PH um ótimo em torno de sete né o PH mínimo de crescimento dele é de 5,5 a 5,8 ele cresce em atividade de água acima de 0,92 e o seu crescimento é também estimulado pela presença de um carboidrato fermentável e não é inibido por até vinte por cento de Billy Qual é a característica mais marcante gente do clostridium perfringes é de crescer ativamente em altas temperaturas podemos crescer é até 47 graus Celsius cresce de forma ótima né aí a 43 e 47 graus Celsius no leite ele fermenta

rapidamente à lactose e produz um tipo de coagulação típica que é denominada coagulação tem prestigiosa conformação do gás e em temperaturas baixas Esses micro-organismos são bastante sensíveis à temperatura mínima de crescimento que ele ainda consegue né sobreviver aí consegue estar se multiplicando é de 12 graus celsius e o clostridium perfringes é capaz de produzir uma série de toxina E essas Epa são classificadas em cinco tipos e a b c d e e de acordo com a toxina que ele produz bom e quando a gente se trata de doenças transmitidas por alimentos as cepas importantes para

nós de clostridium perfringens é é a tipo ah e ativos e tipo a produz a toxina Alfa Esse é o resultado da ação de uma manter o toxina denominada de CPAP que é clostridium perfringens enterotoxin a e ela é produzida no intestino do hospedeiro após a ingestão de um número alto de células Oi e a produção dessa toxina é associada com a formação dos esporos né em vivo estimulado pelas condições ácidas do estômago e dos sais biliares então o que que acontece quando o microrganismo naquela condição o microrganismo vai vai escuro lá né que é

aquela estrutura de resistência ali e aí nesse momento que ele produz a toxina essa toxina tipo a ela o perigo que ela causa é moderado sem ameaça de morte causando um Severo desconforto E aí nós temos também o clostridium perfringens né Ah cê pode Tipo C o que causa uma doença transmitida por alimento muito rara e o perigo dessa doença a ela ela produz a toxina alfa e beta tá E essas toxinas são causa um perigo elevado e alto risco de morte causando a doença enterite necrótica então e a ingestão de alimentos né contaminados com

alto número de células de clostridium perfringens Tipo C provoca essa enterite necrótica O que é a doença mais séria mas embora muito rara o que que essa enterite Então pessoal é uma necrose do intestino causando septicemia né que é infecção generalizada e podendo levar à morte bom é importante relatar que o clostridium perfringens é amplamente distribuído no solo poeira e vegetação e também faz parte da microbiota normal dos intestinos de homens e animais né E então um adulto saudável é normal conter de 10 a 3 a 10 a 4 gramas é de peso seco né

então ele é normal encontrar encontrar essa população de costura de perfis nas fezes de 10 a 3 a 10 a 4 e quando pintam que vai ser o risco né quando que vai estar causando essa doença e nos pedreiro quando a população for superior a 10 a 6 horas tá joia Então quando for encontrado a população do microrganismo superior a 10 a 6 gramas nas fezes já é preocupante aí com relação aos alimentos frequentemente envolvidos nos surtos né causados pelo clostridium perfringens a gente pode citar as carnes cozidas ou assadas que são servidas no dia

seguinte bolo de carne panqueca o churrasco é quando vai fazer um e quando ele na caixa de isopor esse tipo de alimento é bem potencial é o crescimento ela então do clostridium perfringens né visto que ele suporta uma temperatura mais alta aí embutidos e também em latados tá bom e o clostridium perfringens é anaeróbio estrito porém resiste a mais baixas tensões de oxigênio quando comparado a outros clostrídios ele reduza o sulfito a sulfeto né 46 graus e produzem então colônias pretas na placa Ah é Então primeiro a gente faz a a gente vai tá fazendo

analyze the classf clostrídios sulfito-redutores né mas o crescimento das colônias com essa característica ela é uma potencial indicação da presença do clostridium perfringens nos alimentos quem é e o que que é importante relatar a gente que é 46° outros clostrídios sulfito-redutores também podem crescer tá tem a capacidade de crescer que é o clostridium botulinum e clostridium sporogenes e é bom o classe clostridium perfringens Como eu disse morre rapidamente a temperaturas mais baixas né até citei aí 12° mas em torno de 12 10° é suficiente para provocar a morte do microrganismo e os seus esporos na

água pode indicar contaminação fecal Humana porque como nosso citamos é normal encontrar o clostridium perfringens no intestino humano então naquela condição ali na em alguma condição de stress ele vai expor lá e portanto quando é encontrado os esporos em água é uma indicação direta de contaminação fecal humana Ok Com relação ao meio de cultivo é bastante utilizado né o Aguiar tsc que o h triptose sulfito cicloserina Oi e a gente suplemento e esse ar com gema de ovo e nós vamos ver o porquê E aí é e posteriormente é realizada detecção da toxina né E

aí bom então pessoal eu peguei para para vocês verem né da instrução normativa nº 60 um exemplo aqui quando se trata de produtos cárneos cozidos inteiros ou em cortes defumadas ou não embutidos ou não né Aqui tem alguns exemplos mortadela salsicha presunto fiambre patês Jean gelatines e a legislação impede que seja realizada e a análise de clostridium perfringens tá então como Nós aprendemos né mas primeiras aulas das cinco amostras é uma pode conter o clostridium perfringens em um padrão de 10 elevado a 2 a 10 elevado a 3 tá bom Oi e aí qual é

a relação aos métodos de análises de clostridium perfringens em alimentos há vários meios de culturas disponíveis né para ir numeração desse microrganismos nos alimentos e a seletividade do meio resulta da incorporação de um ou mais antibióticos para inibir diversos anaeróbios e também anaeróbios facultativos tá é bom então como nós comentamos é a gente utiliza mais comumente o PSC suplementado com a gema de ovo Porquê e o microrganismo tem a capacidade de hidrolisar a lecitina então ele vai apresentar um ali em volta do Colônia tá então aí por isso que a gente coloca a gema de

ovo no meio de cultura é as colônias crédito sem pretas né ou cinzas escuras e com esse ao aí em volta que aí a gente considera como colônias típicas tá bom aí então nós temos quando a gente observa esse crescimento das colônias com essas características nós vamos ter o crescimento dos clostrídios sulfito-redutores Tá mas é importante lembrar que para quando eu quero identificar uma espécie a ou há o outro algum outro grupo dependendo né quando eu quero chegar nível de espécie eu tenho que fazer algumas análises adicionais tá E aí sobre isso que eu vou

mostrar mais adiante em relação à prática então gente é a técnica de Contagem em placas né primeiro a gente pega vamos supor então que aquela uma moça de carne né como eu mostrei na legislação que exige então eu pegaria 25 g da amostra de carne colocaria 225 ml de água perguntou nada a gente faz a homogenização né lá no laboratório a gente tem estou Maker então a gente coloca a amostra no saco esthero coloca a água peptonada espero né E aí a gente leva principalmente para fazer homogenização após e é feita a diluição seriada tá

a gente passa a diluição seriada nos tubinhos G1 e depois a gente faz aí o plaqueamento da amostra né lembrando quando eu utilizo um alimento sólido essa primeira diluição minha quer que onde eu coloco a amostra mas a água peptonada ela já tá ali na diluição dessa menos um né então eu transfiro 1ml para 9 ml de água peptonada eu tenho de lição 10 - 2 e assim sucessivamente então eu coloco né e profundidade ou seja coloco 1 ml da minha monstra na placa de Petri né em duplicata ou em triplicata e E aí eu

coloco meio de cultura no caso tsc aí como o microrganismo é anaeróbio eu vou estar colocando um tsc com sobre camada Ok então eu coloco a minha mostra coloco uma camada do meio de Cultura homogenizing forma de oito né homogenize todas as placas de Petri E aí quando solidificar eu vou tá colocando a segunda camada do meio de cultura e depois eu vou estar em cubando A 46 graus Celsius por 24 horas em amar o biose né porque esse grupo é anaeróbio e depois eu vou seguir com os próximos passos tá pronto tá identificando aí

o microrganismo aqui ó é para confirmação ou selecione dessas colônias e faça o teste coloração de gram né como nós estamos no início o organismo Ele é um bastonete e ele é gram positivo ok Esse aí é o teste básico para identificação E aí então já observando isso eu posso seguir para os outros testes tá é as colônias típicas gente são são as colônias pretas com ou sem o alô tá a gente coloca a gema de ovo que a gente sabe como que o organismo tem a capacidade de hidrolisar a lecitina mas às vezes a

colônia pode crescer sem aula também então também é considerado colônia típica bom então aqui é o mesmo procedimento né de diluição de amostragem de do lição da amostra perdão de plaqueamento e se desincumba são a 37 graus Celsius por 24 horas aí eu vou lá vou mostrar adiante para vocês depois a gente volta na suas provas confirmativas como o microorganismo anaeróbio eu tenho que fazer o cultivo anaeróbio dele então né aí o que que a gente faz a gente coloca as placas de Petri em jarra de anaerobiose tá então a gente vai cultivar ali sob

a aerobiose para que ele cresça e aí a gente utiliza esse anaerobac que chama que são esses discos o que que ele faz ele gera uma atmosfera né isenta de oxigênio que facilita o crescimento das bactérias anaeróbias escritas e também as facultativas bom então a gente pega as placas de Petri coloca dentro da jarra Coloca esse disco e tampa direitinho e depois a gente Cuba né lembrando a temperatura 46 graus Celsius por 24 horas E aí pessoal e é aqui a gente pode ver uma imagem né dentro da e da estufa de crescimento e a

jarra dentro da estufa e porém se a gente não tiver essa jarra né não tiver esse disco específico tem alguns outros disquinhos também são encontrados no mercado Ok é e que nós também utilizamos lá no laboratório que a gente ele vem com uma película aqui em cima então a gente tira essa película colocam Pina um pouco de água na superfície desse disquinho E aí a gente pega sacos estéreis e coloca as placas olha para vocês verem a gente pega para o saco espero coloca as placas e colocam disquinho desse então ele vai estar gerando um

ambiente isento de oxigênio também tá então após o plaqueamento a placa é condicionada na Jardim aerobiose né ou então como eu disse para vocês gente pode ser depositada neste Sá É como diz Kim e encorpada 46 graus Celsius por 24 horas Ok E aí Oi e aí gente nós temos então depois desse processo a gente vai ver como que cresce as colônias né já vou mostrar aqui para vocês a características das colônias então do clostridium sulfito redutores né escrito super Friends é aqui é o meio de Cultura o SPS tá E olha para vocês verem

ele aí ela cresce né Negra podendo ou não ter o Halo ao redor da colônia o outro meio também que a gente usa é o PSC tá ele contém triptose né que a fonte de nitrogênio vitamina C carbono também o microrganismo reduza o sulfito a sulfeto por isso a colônia fica preta e ele contém a ciclosporina que é um antibiótico que vai inibir aí a microbiota anaeróbica facultativa tá E aqui mais um exemplo é a hora pra vocês verem né na diluição dessa menos dois a diluição dessa menos três e a diluição dessa -4 tá

então depois disso a gente a gente faz a contagem normal né que a gente tem que fazer a contagem enumerar a fazer a quantificação de clostridium sulfito redutor e também nós vamos estar selecionando as colônias e para fazer aquelas provas bioquímicas que nós comentamos anteriormente E aí voltando aqui nessas provas para eu ver se é o clostridium perfringens gente é depois que eu encontrei então a minha placa né que eu as minhas placas na jarra ou só com disquinho eu vou pegar as colônias típicas e vou fazer essas outras provas bioquímicas aqui tá e é

quando eu utilizo o meio que é rica em lactose o microorganismo é capaz de produzir algumas bolhas então eu vou tá pegando uma colônia dessa de que cresceu na placa e voltar passando por essas provas bioquímicas tá lembrando que a gente separa dessas colônias né E aí nessa prova aqui que a lei de Ferro e o microrganismo vai formar bolhas na superfície e vai ter uma viragem da coloração do meio e é de vermelha para amarela então se ficou amarela é sinal do que o que o microrganismo fermentou à lactose Ok então positivo para esse

teste aqui tem também o teste da redução do nitrito nitrato é o quê aí também é um teste positivo para o clostridium perfringes E tem também o teste de motilidade Ou seja é a gente vai pegar o ar aqui dentro vai ter um lazer Ok o meio sólido E aí nós vamos pegar uma alcinha de platina vocês lembram da alça de platina que ela prateada né aquela alcinha aí nós vamos pegar uma colônia e vamos furar o alho e aí a gente vai estar em cubando né na estufa que 37 graus Celsius 24 horas todas

essas provas são incubadas nessa temperatura por esse tempo e após isso que a gente observa os resultados e com relação ao cenário de uma utilidade se tiver migração das células para regiões fora da linha de inoculação é sinal que o microrganismo é móvel que ele possui utilidade essa essa análise gente é como se fosse um guarda-chuvinha dentro do tubo porque a gente fura com a alça de platina e pronto e aí o microrganismo cresce ali e cresce fora também daquela linha onde a gente furou ele então e ele forma um a gente né fala que

é um guarda-chuva então é positivo no teste de utilidade E aí Oi e aí então né dando positivo nesses nesses teste como eu falei a gente considera aí como sendo o Crossfire The Perfect Então é assim que a gente faça tá E aí no caso quando tem as aulas práticas presenciais a gente já leva as plaquinhas todas prontas dessa forma para vocês estarem vendo como que fica aí o resultado é bem outro grupo de microrganismo também de muita importância na microbiologia de alimentos né é são as salmonelas a salmonella é o principal agente de doenças

de origem alimentar em várias partes do mundo e também no Brasil eu até coloquei aqui mas hoje eu vou adiantar como a gente pode ver aqui ó desses agentes etiológicos Associados a surtos de doenças transmitidas por alimentos agente pode ver que a salmonella se perfazem o grupo de maior número né 5151 por cento em torno aqui foi não identificado e em primeiro lugar aqui já vem esse grupo então dá salmonelas bom então o que que a gente pode falar sobre esse grupo de microorga mesmo E é em torno de 40 mil casos de salmoneloses São

confirmados por ano nos Estados Unidos 2 a 4 milhões de casas por anos não são relatados tá salmonella entérica subespécie entérica perfaz 99% desses casos de doenças transmitidas por alimentos e o grupo Sá Melo é o gênero salmonella possui cerca de duas mil trezentos e vinte e quatro linhagens que são classificadas de acordo com seu sorovar ou sorotipo ok que aí a gente designa os sorotipos são baseados nas diferenças encontradas em certas estruturas superficiais das células e é e essas espécies também são diferenciadas pelos antígenos ó que são os antígenos somáticos flagellaris e também os

capsulares é bom a salmonella e pertencem à família enterobacteriaceae possui forma de bastonetes São gram-negativos né Lembrando que sempre que a gente designa a palavra Grand está relacionado lá a a Constituição da parede celular do microrganismo né então grau negativo que tem aquela membrana externa né e e a fina camada de peptideoglicano né O que é diferente da gram positiva que não tem membrana externa e tem uma espessa camada de peptideoglicano salmonelas São anaeróbias facultativas e a maioria é móvel tá Como comentei com vocês lá atrás né a gente faz o teste de motilidade também

elas possuem flagelo os peritriquios o quê que isso quer dizer que elas têm fla gelos olha em toda a sua extensão em toda a extensão da célula ela tem esse flagelo que estão relacionados aí Aula comoção o PH ótimo de crescimento das salmonelas é próximo ao 7 em torno dos sete né Elas colherão até nove porcento de sal a temperatura ótima de crescimento é entre 35 a 37 graus Celsius e ela se fosse um em uma faixa Ampla de crescimento Olha como a gente pode ver crescem de 5 a 47 graus Celsius né E também

e são produtoras de sulfeto e aqui eu trouxe outro exemplo aí da instrução normativa nº 60 nesse caso é e o alimento né frutas e hortaliças olha para vocês verem quando o fruto hortaliça In Natura inteira selecionados ou não a legislação exige ausência de salmonella né na verdade salmonella pessoal a legislação sempre vai existir exigir ausência Tá então não tem o limite mínimo que pode ser permitido lido do microrganismo no produto é bom então sua mulher vai ser sempre ausência então aqui ó frutas e derivados preparados inteiros e descascados né branqueados o cozidos então para

salmonella hora pega 10 amostras para analisar mas todas tem que ter ausência desse microrganismo tá eu peguei aqui para vocês verem também um exemplo de Carnes Olha que interessante essa legislação pessoal ao contrário da in-62 fim de 2001 essa legislação ela já colocou até qual a espécie né é exigida embora a gente sabe que a gente não vai chegar nível de espécie muitas vezes não vai identificar nível de espécie para colocar ali no nosso resultado a gente só coloca mesmo a nível de gênero né só salmonella mas a legislação até colocou eu lembro que nós

comentamos isso na primeira aula não sei se vocês vão Recordar na aula de coleta de amostra que nós mostramos as modificações que foram feitas aí então essa legislação que an60 de 23 dezembro 2019 ela já até especificam no caso de Carnes né salmonella enteritidis tá e em 25 gramas cinco amostras que eu vou estar coletando para analisar e tem que ter ausência em todas tá salmonella typhimurium também ausência em todas é aqui ó produtos cárneos Cruz à base de carne moída ou picada de aves temperos temperados ou não embutidos ou não são nelas é interessante

dizem 25g ausência Ok então lembrando salmonella não tem o padrão mínimo permitido pela legislação tem que ser sempre ausência E aí gente análise de salmonella é bastante minuciosa tá ou seja ela é delicada né é que a pessoas Oi aqui é um conhecimento técnico um conhecimento específico requer pessoas treinadas para realizar Ok e ela é baseada na presença ou ausência tá desse microrganismo essa mais justamente porque como eu mostrei pra vocês na legislação e ela a legislação impede ausência desse microrganismo então Eu determino essa análise como presença ou ausência tá posso fazer também pelo método

de número mais provável mas na maioria das vezes a gente faz mesmo e pela presença ou ausência em 25 g né E ela compreende cinco etapas que é o pré-enriquecimento o enriquecimento seletivo o planeamento individual a seleção das colônias e depois a confirmação bioquímica né através de provas bioquímicas aí Oi e aí e como a gente pode ver aqui é a prática então de presença ou ausência é Inicialmente nós vamos tá pegando 25 g da amostra e vamos estar fazendo a diluição em 225 ml de água peptonada né levamos então fazemos a homogenização é e

após homogenização a gente faz o pré-aquecimento né e aliás perdão essa etapa é a etapa de pré-enriquecimento que é utilizada a água peptonada tamponada e também o caldo lactosado lactosado a e esse caldo lactosado gente é para recuperar as células injuriados Nossa comentando sobre esse termo né a quando as células passam por algum processo de stress Então dependendo se você não colocar um meio adequado ali para o crescimento delas elas não conseguem se desenvolver Então esse caldo lactosado tem essa função de recuperação das células injuriados isso porque e também a água peptonada né tamponada porque

o tampão fosfato evita os danos bacterianos devido à alteração do PH do meio e depois tem a etapa de enriquecimento seletivo tá então é quando a gente vai fazer admissão seriada aí nos tubinhos a gente já não usa mais água perguntou nada a gente já vai tá usando o caldo rappaport tá é e a gente no preparo preparo dele é 0,1 ml para 10 ml do caldo tá Oi e esse caldo rappaport ele ele vai possuir alguns agentes inibidores de bactérias gram-positivas como nós comentamos as salmonelas são gram-negativas então aí que dia vai ter o

antibiótico né impedindo o crescimento de grãos positivas É nesse caso os sais biliares que contém no caldo também e o antibiótico é tradicional tu vai estar inibindo aí a microbiota intestinal normal tá bom então essas né Essas calças possui componentes que me bem outros microrganismos e seleciona o microrganismo de interesse e depois a gente então é fácil cultivo em placa né coloca o a ler e faz aí o espalhamento e depois a gente faz confirmação das colônias tá é através de testes bioquímicos e também de testes sorológicos aqui é o mesmo procedimento só para vocês

verem de uma forma diferente primeiro a primeira diluição da amostra né para uma organização que é 25 g ou ml em 225 ml de água peptonada homogenização o prendi com enriquecimento enriquecimento seletivo e depois do bloqueamento no ar Qual que é o água que a gente usa então ali para o cultivo aí da salmonella né o cultivo Inicial é o xlb aí depois disso a gente pega as colônias para fazer as outras as outras é bom né as provas bioquímicas aí ó Oi e aí pessoal nós temos também alguns meses cultura que são específicos para

o crescimento da salmonella então e depois que eu cultivo aqui nesse Agar xld eu vou estar selecionando pegando uma colônia né e esfriando nesses outros meios de Cultura para observar o crescimento aí olha vocês ver esse agr é que tô em ele é responsável pelo planeamento seletivo na análise de salmonella né Ele é um mês de Cultura seletivo e diferencial Olha que interessante e ele contém proteose extrato de levedura e cloreto de sódio e o sistema inibidor deles são sais biliares é o sistema indicador são os carboidratos tá então ele contém a fucsina ácida e

o azul de bromotimol como indicador de PH e contém o tiossulfato de sódio e o citrato de Ferro amoniacal como indicador de produção é de sulfeto OK o agra é Tonho pessoal ele é verdinho olha aqui pra vocês verem ele é verdinho então é esses constituintes aqui que eu acabei de falar com vocês e eles vão tá excluindo a microbiota gram positivo né inibindo perdão o crescimento na microbiota gram-positivo favorecendo somente das gram-negativas e o que é interessante aí olha a salmonella não tem a capacidade de fermentar lactose né esse área com teu sistema indicador

que são os carboidratos no caso lactose sacarose e Sally ensina a salmonella não tem a capacidade de fermentar lactose Então as colônias não crescer verdinhos tá o meio é verde o meio É dessa cor então quando cresce assim eu posso saber que aquela aquela colônia que eu retirei daquele meio de Cultura xlb né que eu retiro Uma colônia só e faço uma estria nesse mês nesse meio seletivo diferencial é para mim estar obtendo colônias bom né Então nesse momento se tiver o crescimento de colônias apenas Verde uma e permanecer verde é positivo para salmonella tá

e se o meio ficar laranja e os colônias laranja é positivo para cole porque iPhone tem e a capacidade de fermentar lactose né então como ela fermenta lactose é o carboidrato é um sistema indicador Então ela consegue mudar a cor do meio de Cultura Ok então quando a gente usa ctoe EA colônia fica verdinho meio permanece Verde ele é um verde bem bonito mesmo Verde bem escuro então é positivo para salmonella e quando nós e observamos o crescimento de colônias alaranjados e o meio muda de cor é positivo para e cole tá e aqui tem

outros outros meios também só para conhecimento de vocês tem um Hub aqui nós utilizamos ele laboratório também ele é seletivo na análise de salmonella ele é também o meio de Cultura seletivo diferencial ou seja ele seleciona uma microbiota né nem do crescimento de outra e diferencial de acordo com o indicador aqui o sistema indicador Então ele pode está mudando de cor aí tá é o Agar xld que é seletivo na análise de salmonella tá ali ele contém um indicador da produção do sulfeto né E aí aqui ó a gente tem um exemplo óleo Run back

né o crescimento de salmonella bom então ali ó salmonella vai fermentar o propilenoglicol e vai combinar com o indicador de PH vai formar então uma mistura cromogênica fico meio cromogênico viu produzir uma coloração vermelha e aqui o hum back Olha quando é o crescimento de e cole-o e colhe produz enzima beta-galactosidase que ativa o substrato cromogênico produzindo coloração Azul nas colônias então quando o agarrar mato fica a nossa coloração mais vermelha positivo para salmonella né E quando ele fica fica assim produzindo colônias azuis e é positivo para e cole Aqui nós temos também o Agar

xld com crescimento de salmonella né como ela não fermenta lactose nem sacarose mas fermenta xilose leva a viragem do indicador vermelho de fenol para amarelo devido a produção de ácido E aí após haverá um aumento de PH de vida descarboxilação da lisina tornando vermelho de fenol novamente vermelho inclusive mais intenso que a cor original do meio a produção de sulfeto varia de acordo com a espécie produzindo ou não colônias de centro negro tá então aqui a gente tem o crescimento de salmonella no xlb e Aqui nós temos o crescimento de e cole que não XL

dela vai produzir colônias amarela em função da fermentação da lactose tá nós temos também lazer lisina com uma identificação bioquímica para salmonella né Ele é um meio de Cultura diferencial é ou seja ele não seleciona ali e o grupo né Não tem um antibiótico para inibir o crescimento de outro grupo de bactéria Mas se for a salmonella que tiver crescendo ele vai ficar diferente ele vai estar mudando de cor tá é o pênis também larga lisina também utilizado no crescimento de salmonella e também ao meio diferencial com o TS i a hora que você veio

aqui ou até cindo crescimento são Manoela Olá aqui é o agradece no crescimento de coliforme então Gente o que que é importante você saber é existe diversos tipos de meio de Cultura né os meios mais comumente utilizados ah e também os meus mais específicos né para cada grupo de microrganismo então quando a gente utiliza quando a gente quer identificar um determinado microrganismo a gente utiliza esses meios para ajudar uma resposta mais direta tá então aí eu cultivo conforme mostrando nós mostramos anteriormente Fazemos o cultivo fazemos no plaqueamento e depois da incubação a gente seleciona as

colônias realiza as provas bioquímicas e também eu pego uma colônia e vou tornar a pura né que a gente fala é eu vou fazer uma estria ali na placa com meio de Cultura específico para ver o crescimento observar eo crescimento da colônia que ele vai me dar uma resposta mais rápido mas a resposta mais direta e também tem esses outros meios de cultura que a gente usa tubo de ensaio para estar observando as características aí tá e hoje na nossa realidade no nosso laboratório nós temos um equipamento que chama maldi-tof e ele identifica um micro-organismo

através das proteínas que ele expressa então é a gente no caso para não precisar ir até aos testes finais fazer as provas bioquímicas isolar nesses meios de Cultura específico quando a gente cultivar o a monstra né do alimento nessa parte aqui a gente estaria a seleção Manda uma colônia e i i a estação pode estar passando também para algum meio né E tá pegando a colônia aí é e fazer a extração da proteína tá eu tenho a metodologia lá então eu faço a extração da proteína e leva no equipamento maldi-tof para análise e aí na

hora já identifica o microrganismo de acordo com essas proteínas o que compõem Ah mas aí é quando não tem né É sempre importante está seguindo todos esses passos para identificação é bom e o outro grupo pessoal e nós comentamos também nessa aula é são as listéria tá gênero né mistério em específico a listéria monocytogenes O que é uma bactéria patogênicas para o homem do seu reservatório primário parece ser o solo e a vegetação a listéria monocytogenes também possui forma de bacilo é gram positivo possui uma utilidade característica ela cresce em uma amplo fácil aliás pra

vocês verem ela cresce de 0 a 42 graus Celsius o gênero EA esfera é dividido em oito expor espécies né e um 1 a 10 por cento da população é portador assintomático dele sério ou seja contém o microrganismo mas não apresenta nenhum sintoma e ali séria não é o a produtora perdão de sulfeto tá ela é psychrotolerant ou seja ela cresce muito bem em temperaturas baixas né é bastante encontrado em alimentos sobre refrigeração o isolado de var ambiente como já citei e muito encontrada em produtos crus e processados Tá bom então são gram-positivas não produtores

de sulfeto a faixa de PH que ela consegue crescer de 4,1 9,6 temperatura de 1 a 45 graus Celsius atividade de água acima de 0 93 tá como vocês podem observar as bactérias patogênicas Exige uma elevada atividade de água que está crescendo a única bactéria é patogênica que cresce abaixo de 0,9 né no caso 0,86 de atividade de água é o staphylococcus áudio tá E ele espera gente ela também cresce a uma concentração de 10 porcento de sal é bem os surtos deles férias são Associados à ingestão de leite contaminado queijo sorvete água vegetal cru

potes de creme aves peixes queijos e processo de maturação Oi e aí pessoal e eu peguei também um exemplo da Ester para a gente está observando aí né instrução normativa nº 60 ela determina que alimentos prontos para consumo que contenha no máximo os 10 elevado a 2 dele sério Ah tá então é e já alimentos prontos para consumo destinado a lactentes ou para fins especiais tem que conter ausência desse microrganismo no produto Ok então quando o alimento tem a característica né alimentos prontos para o consumo eu pego cinco amostras e em cada uma delas é

eu tenho que ter o máximo de 10 elevado a 2 o UFC programa o ML de listéria e alimentos prontos para consumo destinados a lactentes eu pego 10 amostras para alisar e todas tem que estar ausente tá bom às vezes vocês podem estranhar a gente fala assim Nossa mas como que a legislação permite a Como já citei anteriormente a legislação permite até o limite onde não cause nenhum dano ao consumidor tá determinados microrganismos não causa naquela população ali não tem perigo dele tá causar nenhum dano tá Tá bom então aí espera também a gente faz

aí né a prática A análise prática é baseada na presença ou na ausência de microrganismo ou também pode ser a técnica do número mais provável Oi e aí pessoal inicialmente ao meus procedimento pego 25 g da amostra ou 25 ML né Se for 25 ml eu já faço a minha demissão direto Se esse for 25 gramas eu tenho que fazer a homogenização né 225ml do meu caldo de enriquecimento tamponado tá Essa é a gente fala de enriquecimento primário que é o caldo Ralph Fraser Oi e aí depois tem e o enriquecimento secundário tá eu prendi

aquecimento seletivo também quem é E aí e esse caldo tem um cloreto de lítio né que vai estar inibina e o crescimento de enterobactérias gram-negativas E aí gente hoje nós vamos fazer o plaqueamento então depois que a gente fez o pré-aquecimento que a gente fez as diluições nós vamos mesmo processo fazer o bloqueamento o plaqueamento é e a partir desse caldo né que eu fiz as diluições eu vou inocular né fazer estrias em placa de água wisteria ah e também vou fazer em placas contendo meio PSA Depois eu pego algumas colônias vou faz e vou

fazer a purificação aí tá e seguido da confirmação dessas colônias então eu vou pegar essas colônias vou passar pelas provas bioquímicas né Isso é lógicas para depois voltar confirmando aí que é positivo para esteira tá bom Oi aqui é é o mesmo que eu acabei de explicar então depois do bloqueamento a gente vai encubar e vai ver as colônias típicas tá é o que vai crescer né no caldo no abra perdão no ar wisteria essas colônias são verde-azuladas elas vão crescer verde-azulados no ar e aí eu vou coletânea eu tô fazendo estria na placa de

Petri para eu obter colônias isoladas né E quando eu vou fazer as provas bioquímicas eu tenho que fazer a partir de colônias puras que a gente fala né então cresce aí a gente pega uma colônia faz a estranhas para ter aí eu faço no meio específico para their colônias puras do microrganismo é então depois que eu fiz a estreia de esgotamento né nesse agra específico teste que é o PSA acrescido de extrato de levedura sempre que eu vou trabalhar com Ester a gente eu tenho que colocar o extrato de levedura no meio tá senão ela

não cresce então se eu vou colocar fazer um caldo ou se eu vou fazer um mês só eu tenho que tar colocando aí esse extrato de levedura E aí depois disso eu vou fazer a confirmação como que é feita essa confirmação através de vários testes é o primeiro aqui a gente tem um teste de catalase né onde a gente pega a colônia e coloca O peróxido de hidrogênio uma rotina de peróxido hidrogênio e coloca a colônia se se der positivo se formar bolhas é porque deu catalase-positiva tá lembrando que ele espera é catalase-positiva que é

a enzima né doce troco citocromo da bactéria que a enzima capaz de degradar O peróxido de hidrogênio tá é depois eu tenho que faz depois não posso tá fazendo ali também o teste de motilidade como eu já citei para vocês ele fica parecido com guarda-chuva tá então eu uso meio para estar fazendo a minha um teste de utilidade depois que eu coloco que eu furo com a alça de platina aqui em meio de cultura eu vou estar incomodando por 25 mais ou menos um graus por 48 horas E aí olha para vocês verem aqui fez

e olha que é um teste negativo tá só tem mesmo um risquinho de ontem foi furado com a alça e aqui é um teste positivo Onde fica bem parecidinho homem com guarda-chuva tá então a gente se ficar assim é considerado positivo para protesto de motilidade E tem também o teste de hemólise tá que a verificação da produção de Beta hemolisina observa-se uma zona transparente no Agar sangue então eu utilizo Agar sangue ali e se for positivo vai ter uma zona transparente ali no ar Ok e faço também o teste de fermentação de carboidratos tá tá

cheirosa da negativa para fabiose da Positivo que é que é só os açúcares né a ser testado no arder púrpura de base tá então eu coloco esse aqui acrescido de 0,5 por cento de xilose ramnose íncubo até cinco dias e aí para xilose é negativo e para ramnose é positivo Oi e aí pessoal Qual que é o meio de Cultura específico né para o crescimento da alisteria a gente utiliza o pau Khan e também oxford' então o palcão contém esculina que é degradada em scolet Tina e complexa com ferro 3 contém alguns ingredientes responsáveis pela

seletividade do meio né que são alguns antibióticos Olha que é o polimixina ou tem também acriflavine e também o cloreto de lítio E aí as colônias vão tá crescendo negras Oi e aí cresce bem assim ó então como eu disse para vocês cresceu a colônia no meio né inicialmente aí a gente pega uma colônia e vai fazer a estria Oi aqui é uma esfria composta gente a gente vem faz mestria com a alça chega no finalzinho a gente flambo a alça pega do finalzinho aqui puxa outra estria chega aqui flambo a alça pega do finalzinho

puxa e a mesma coisa pega o finalzinho e puxa para que objetivo é obter é colônias separadas né colônias isoladas que a gente chama então aí ó devido a essa complexidade né com ferro cresce as colônias negras no meio de Cultura e a degradação da esculina também é isso coletiva e também oxford' né também tenho mesmo o objetivo ele contém sculino que é degradada em escolher Tina e também complexa com ferro 3 e aí as colônias crescem negras no meio de Cultura Aqui nós já temos uma estria simples né o que aí no caso foi

feita uma só que a gente tem até duas mas só preciso lembrar em quando eu pego um pouquinho da amostra e faço uma estrias ó é porque as três simples agora quando eu pego um pouquinho da amostra e faça essas quatro aqui vira faço dos quatro lados é a estreia composta tá E aqui tem um exemplo mostrar para vocês ó o crescimento da listéria e no Oxford e ela cresce também um pouco esverdeada a colônia E aí e quem bom pessoal essa foi nossa aula então são microorganismos de muita importância né muito bastante interesse na

indústria de alimentos são microorganismos patogênicos tá E espero que tenha dado para vocês para vocês conhecerem um pouquinho sou a respeito deles né terem um prévio conhecimento sobre essas técnicas de inoculação técnicas de identificação os meios de cultura que a gente utiliza para cada grupo ok Oi e essa então é a nossa bibliografia que é os livros da neuseli Nessa versão mais antiga e essa versão mais nova nesse livro contém toda é todo o método né de cada nascer aí como tá fazendo cada análise como está observando os resultados isso tudo a gente encontra nesse

livro é muito obrigada