esta aula está protegida pela lei de direitos autorais Segue o documento de advertência legal o qual já foi apresentado para todos os alunos gostaria de destacar que entre outras ações que estão descritas no documento de advertência legal é proibido copiar e divulgar qualquer tipo de conteúdo desta aula Olá pessoal tudo bem Vamos então continuar com a nossa segunda parte da aula de hoje sobre vacinas o que que nós vamos ver agora nós iremos abordar sobre a vacina de RNA mensageiro e e a vacina então da Biotec da Pfizer nós temos também a vacina de RNA
mensageiro produzido pela moderna Então são vacinas contra a covid-19 e vamos também estudar um pouquinho sobre vacinas inativar E no caso será sobre a vacina coronavac bom então começando com a vacina da Pfizer que é uma vacina de RNA mensageiro bom tanto a vacina da moderna quanto a vacina da Pfizer são vacinas de RNA mensageiro cujo RNA mensageiro codifica a proteína S inteira e nesse caso essa proteína S que é codificada ela apresenta duas mutações as quais são realizadas para estabilizar a conformação de pré fusão que é aquela conformação que eu mostrei para vocês que
a proteína S tem antes de se fundir com o receptor então é uma conformação que favorece a interação dessa proteína com a o receptor né na na na superfície então é é interessante essa proteína manter a essa conformação por é a forma como o vírus aparece para o organismo então o vírus Ele vai infectar o organismo quando ele tiver a proteína s com essa conformação chamada de conformação de pré fusão dessa forma é interessante que a proteína S que for produzida pelo RNA mensageiro também consiga adquirir essa mesma conformação foram realizadas duas mutações que contribuem
para estabilizar essa conformação de pré fusão ok aqui a gente tem então lembrando o trío Esse é verdinho aqui é o RBD ok e a gente tem aqui eh três cadeias da proteína S bom então continuando com a vacina da Pfizer Qual que é o mecanismo Então dessa vacina falando assim e de forma bem simples Ah foi utilizado então o gene que codifica na Spike a partir disso foi produzido o RNA mensageiro a gente vai ver daqui a pouquinho e esse RNA mensageiro ele foi é protegido em uma nanopartícula lipídica de forma que o que
vai ser entregue pra célula é o RNA mensageiro na partícula na nanopartícula lipídica quando ele for então Entregue pra célula a célula vai levar à apresentação da proteína S na sua superfície o que vai então estimular o sistema imunológico o RNA mensageiro que vai ser entregue para as células ele precisa conter todos os elementos necessários para a sua atuação para que ele seja traduzido na célula e para que leve à produção da proteína S aqui eu coloquei um exemplo Geral de um RNA mensageiro é o mesmo esquema que eu mostrei na primeira parte da aula
aqui nós temos então a região que codifica a proteína nesse caso teríamos a região que codifica a proteína s e o RNA mensageiro que é entregue na célula ele precisa ter a calda poliar ele precisa ter essa região cinco linhas Cap que é uma região que promove a estabilização do RNA mensageiro e que também é importante para permitir a tradução a cauda polia também tem que estar presente para promover a estabilização do RNA mensageiro aqui eu coloquei uma imagem de um artigo a referência está aqui só para mostrar para vocês eh um possível mecanismo de
expressão ou de apresentação dessas proteínas da proteína S na superfície da célula então aqui a gente tem a vacina de RNA mensageiro Então a gente tem aqui a entrada do RNA mensageiro a gente vai ter a tradução com a produção da proteína S essa proteína vai ser processada então e pode ser apresentada aqui na superfície das células através das moléculas de MHC que são as moléculas do complexo principal de histocompatibilidade Ok então aqui a gente tem o RNA mensageiro Desculpa gente a tradução o processamento e a apresentação aqui na superfície da celas uma questão que
é importante com relação às vacinas de RNA mensageiro é que o RNA são moléculas lábeis Então são moléculas que são facilmente degradadas e a entrega dessas moléculas nas células alvo é difícil Como que isso foi eh realizado qual a estratégia que foi utilizada a formulação do RNA mensageiro em nanopartículas lipídicas com isso foi possível se realizar a entrega do RNA mensageiro para as células e como que esse RNA mensageiro é produzido inicialmente foi feito a clonagem do gene da proteína s em um vetor em um plasmídeo para eseri cor então foi produzido um vetor que
continha o gene codificante da proteína S inteira esse vetor então foi replicado em grandes quantidades utilizando esquer col Ah foi feito aquele processo então de transformação ou seja o plasmídio recombinante foi introduzido em ecle E aí à medida que a ecle se replica em um meio de eh ela leva então a replicação também do plasmídeo após esse cultivo de ecol foi se realizado A Lise das células com essa Lise a gente tem então a liberação do conteúdo citoplasmático Onde fica presente esses plasmídeos e em seguida é realizada a purificação do DNA plasmidial com esse DNA
plasmidial que é estocado embaixo as aturas é feito então a síntese do RNA mensageiro então a síntese do RNA mensageiro é feita a partir desse DNA plasmidial que serve como molde para a síntese química do RNA mensageiro em uma síntese que são utilizadas várias enzimas diversas moléculas para se obter então o RNA mensageiro esse RNA mensageiro é uma molécula que precisa ficar armazenada em temperaturas baixas a cerca de Men 0º c Por isso que são necessários os ult os Ultras freezer de forma que a administração da vacina da Pfizer ela requer um pouco mais né
ou eh ela requer uma estrutura mais complexa para armazenamento dessas moléculas e aqui a gente tem vários Ultra freezeres em uma empresa da Pfizer né e agora pessoal a gente vai ver um pouquinho sobre as vacinas inativadas como a vacina coronavac bom então a coronavac é constituída pelo vírus sars cov2 inativado então é um vírus morto e esse vírus foi inativado através da utilização de técnicas químicas esse tipo de vacina que são as vacinas inativadas são vacinas tradicionais já são produzidas há muito tempo diferente das vacinas de RNA mensageiro que são eh as primeiras vacinas
que foram aprovadas eh mesmo que seja para uso emergencial né utilizando a plataforma de produção de vacina em RNA mensageiro as vacinas inativadas já são produzidas há bastante tempo então são plataformas bem conhecidas são plataformas tradicionais nesse caso o vírus inativado vírus morto a formulação da vacina na verdade pode ser estocada entre 2 e 8 GC quando a gente compara vacinas inativadas com as vacinas atenuadas é possível eh dizer que as vacinas inativadas elas são mais estáveis e mais seguras do que as vacinas atenuadas ok uma limitação que nós temos com relação a essas vacinas
inativadas é que a Resposta imune ela pode ser de curta duração se a gente também comparar isso com as vacinas que são atenuadas que são vacinas vivas que vão eh normalmente gerar uma resposta mais robusta do sistema imunológico como a gente tem essa possível limitação de ter uma Resposta imune que pode ser de curta duração eh podem ser utilizadas maiores quantidades ou também podem ser utilizados adjuvantes na Corona vac O adjuvante que é utilizado é o hidróxido de alumínio e uma outra questão também que é interessante da vacina coronavac que essa vacina inativada feita com
o vírus inteiro é que a Resposta imune ela é direcionada não somente à proteína Spike por quê Porque ela é constituída do vírus inteiro então outros outras moléculas ali também vão funcionar como oxígeno e vai haver o desenvolvimento de uma resposta imunológica contra outros componentes do sarscov 2 e não somente contra a proteína Spike e como que é o processo produtivo da coron vac o sarscov 2 ele vai ser propagado em células vero que são células de rim de macaco Verde africano adulto e essa propagação é feita em biorreatores então pra gente produzir essas vacinas
inativadas a gente precisa primeiro do vírus e como que a gente obtém o vírus fazendo com que esse vírus se propague em um cultivo de células nesse caso são utilizadas células vero que são e que consistem em uma linhagem celular amplamente utilizada para a produção de vacinas visto que as células vero não produzem interferon que é um antiviral como elas não produzem interferon a gente tem uma facilidade de replicação de vírus nessas células após a propagação desses vírus a gente vai ter então uma separação sólido líquido para que a gente consiga obter o vírus e
esse vírus então ele vai ser inativado com nesse caso da coron V é inativado com beta propiolactona após a inativação é feita a concentração a purificação e o vírus vai ser adsorvido em hidróxido de alumínio que é o adjuvante ele forma um complexo com hidróxido de alumínio após a formação desse complexo ocorre a diluição em tampão no qual há a presença de água fosfato cloreto de sódio em seguida é feito uma uma esterilização uma filtração e o a vcina então é armazenada para a ser administrada posteriormente Ok eu trouxe aqui mais esse slide para vocês
só pra gente fazer uma comparação entre as vacinas que são inativadas né que a gente acabou de falar e as vacinas que são atenuadas então no caso de vacinas atenuadas que a gente inclusive viu que uma vacina atenuada está sendo desenvolvid vida contra covid-19 o que que nós temos são utilizados patógenos vivos mas esses patógenos são atenuados que que significa isso significa que a virulência do microrganismo é atenuada através da passagem cereal em diferentes tipos celulares de outras espécies que não seja os humanos então várias espécies diferentes de células podem ser utilizadas e esses vírus
são passados de forma cereal até se conseguir fazer a seleção de uma ca mutante que tem uma uma virulência reduzida algumas das vantagens é que esse microrganismo pode replicar no indivíduo então ele vai ter eh um mecanismo similar ao patógeno que pode estimular uma Resposta imune mais robusta e geralmente essa resposta imunológica ela é humoral e celular e são respostas geralmente prolongadas e com relação à desvantagens então a a possibilidade de reversão para uma forma virulenta mesmo eh que seja Improvável devido a muitas vezes as cepas terem várias mutações então quanto mais mutações aqui tiver
é mais improvável que tenha essa reversão mas há essa possibilidade Ok então isso consiste em uma desvantagem uma outra desvantagem relaciona-se à imunização de crianças imunodeficientes de adultos imunocomprometidos que pode gerar complicações podendo inclusive levar à morte então a gente tem várias restrições com relação à aplicação dessas vacinas vivas com vírus ou bactérias atenuados então qualquer dúvida vocês podem entrar em contato comigo pelo Moodle pode entrar em contato comigo por e-mail na nossa próxima aula presencial Nós também iremos discutir as dúvidas muito obrigada pessoal pela atenção de vocês Então é isso pessoal muito obrigada pela
atenção de todos
