Palestra_Zebrafish como biomodelo animal

Pronto pode pronto deu certo então gente é um prazer né falar aqui para vocês hoje sobre zebrafish Então a gente vai mais nada no sentido de uma palestra eu quero que seja uma conversa né no sentido de que qualquer dúvida qualquer eh curiosidade que vocês venham ter a gente possa conversar e compartilhar um pouquinho do pouco da experiência que eu tenho né com relação a esse modelo onde eu venho trabalhando Com ele eh eh desde o meu desde o meu mestrado na verdade né desenvolvi minha dissertação e tese usando o modelo eh durante os meus

experimentos certo eh alguém aqui já ouvi falar sobre zebrafish não sei assim não sei se para alguém é novo né então não sei se todo mundo vem a a conhecer já tem algum conhecimento ou teve curiosidade de pesquisar sobre o modelo sobre o que é que vem sendo trabalhado com o modelo aqui no Brasil né Mas o zebrafish é um um animal que vem sendo estudado né alguns né já tem um um bom tempo assim mais aqui no Brasil só começou a ser difundido no período dos últimos 10 anos mas assim no mundo ele já

é já é bem bem utilizado em pesquisas científicas né em vários países certo então assim só para me apresentar para vocês né o professor ve falou aí um pouquinho eu sou hoje doutorando em química biológica né é o meu pós-doutorado estágio de pós-doutorado é Pela cura mas a gente eh faz o desenvolvimento das nossas pesquisas aqui na US mesmo certo laboratório vou até falar mais um pouquinho na frente onde fica tá então a gente trabalha com o modelo Aqui no laboratório de eh ensaios farmacológicos na US né com a professora professora Jane Professor Elson Tá

bom também fiz doutorado na pós-doutorado estágio de pós-doutorado na ciências naturais pelo ppg CN ciências naturais certo e aí sou química De Formação onde é que nós ficamos aqui na US né nós ficamos eh aqui no bloco do Núcleo de Estudos ambientais na US tá e nós fazemos parte do programa de ciências naturais né junto aí com parceria com a or ppkb né E aí nós fazemos uma essa rede de de de de trabalhos em comuns né E colaborações também ok então assim o que que a gente vem trabalhando hoje nosso laboratório né um dos

principais objetivos eh hoje a investigar as Propriedades químicas e farmacológicas de produtos naturais e sintéticos utilizando o modelo né zebrafish ele na sua fase adulta né institutos pré clínicos com o intuito de identificar compostos bioativos e elucidar seus mecanismos de ações para desenvolvimento aí de principais eh terapias farmacológicas né principais tratamentos certo então hoje o que que nós trabalhamos nós trabalhamos com que tipo de material nós trabalhamos com com Compostos sintetizados eh com compostos colados certo chalconas que é um dos nossos carros nossos nossas moléculas eh assim onde nós temos uma maior concentração de publicações

né trabalhamos com ales essenciais né em parceria com o pessoal aí da Urca o pessoal da de sobal então assim a gente tem uma rede de colaboradores né e e e formadores também professores de diferentes áreas né onde a gente compartilha essa experiência tudo isso Usando né o modelo animal zebrafish né pessoal da nutrição a gente trabalha com combust né aqui pessoal da química daqui complexos metálicos Enfim então é uma infinidade de de moléculas de de produtos naturais né Eh onde a gente busca avaliar o su efeito biológico usando modelo zebrafish tá então assim eh

o zebrafish em si como modelo animal na pesquisa científica ele foi bastante difundido né na na vem Começou a ser a vim conquistando os os pesquisadores né por diversos motivos mais à frente a gente vai falar um pouquinho sobre as as características que fizeram dele né um modelo essencial para vi sendo utilizado n pesquisas né não Em substituição mas em complemento né a Os experimentos que se utiliza hoje que é a questão do rato né adulto né o camongo então o z fich ele não veio substituir veio é um modelo que veio complementar certo então

ele começou a Sair né Eh algumas reportagens né começaram a a sair nas nas mídias né brasileiras e uma delas trouxe aqui para mostrar que éi um dos primeiros reportagens que saiu foi lá pela pela pro Rio Grande do Sul né onde ele começou a surgir como como zebrafish o peixe que vem conquistando os laboratórios né peixe quase humano e aliado em pesquisas científicas pelo mundo e aí foi crescendo né zebrafish conduz avanço na pesquisa sobre efeitos Do álcool então ele veio crescendo e crescendo em diversas Vertentes né em diversas áreas né parte ambiental também

a parte de ecotoxicidade né Não só farmacológica e aí tudo isso unindo todas essas áreas o zebrafish Hoje ele tem uma revista né científica onde são concentrados os maiores números de publicações usando o modelo animal né então Eh zebrafish é uma das uma revista de al P né uma revista bem bem consolidada onde a gente pode observar Eh trabalhos publicados que vem que traz esses protocolos onde a gente pode se basear e tentar a questão da reprodutibilidade Por meio dessa revista né então a revista bastante interessante a gente concentra todas essas publicações envolvendo o modelo

só que o marco inicial mesmo dos zebrafish né na Medicina translacional né Foi por volta de 1981 né onde o primeiro artigo foi publicado para esse pesquisador né George stac onde ele Mostrou algumas vantagens do peixe e e começou a investigar né o modelo a fundo com todas as suas características com todas as suas eh eh eh eh pontos positivos né ao usar o modelo E aí trabalhou ele trabalhou com pesquisas voltadas pra parte genética né E aí teve a sua primeira publicação publicado aí na Nature né então foi considerado aí essa publicação dele foi

o Boom para ser considerado aí um Marco na medicina translacional diante disso né tanto no Mundo quanto aqui no Brasil né começou a partir dessa publicação começou eh eh eh a aumentar o número de publicações né Principalmente no mundo né então aqui a gente traz um gráfico eh até 2014 mas hoje né já essa vertente ela já cresceu bem mais que a questão da produção científica usando o modelo aqui Mundial né e a produção científica usando o modelo no Brasil Então esse gráfico mostra né o quanto eh houve uma crescente com relação ao número de

Publicações usando o modelo E aí eh com esse avanço com esse aumento de publicações né usando zebrafish né aqui no Brasil né Foi por volta de 2016 que realmente teve uma consolidação maior do modelo na pesquisa né Onde foi criado a rede de zebrafish né Essa rede zebrafish ela Concentra o maior número de pesquisadores onde que trabalha né com o modelo em diferentes áreas e nessa rede de pesquisadores onde eles se conectam né Compartilham experiências compartilham eh eh dúvidas né compartilham protocolos e com essa rede foi possível né Eh acrescentar a questão da da do

número de publicações né através dessa rede onde a gente tem eventos eh anuais certo onde reúne todos os pesquisadores brasileiros que trabalham com modelo n então é é bem organizada essa rede então através dessa rede zebrafish foi criada a plataforma zebrafish uma plataforma eh criada pela pesquisadora citex né da da amparada Pela Fapesp eh e nessa rede nós nós conseguimos encontrar todos os pesquisadores para as lees que trabalham com modelo a gente consegue encontrar aquilo que h de novo utilizando o modelo no Brasil então essa rede é é é alimentada por todos os pesquisadores né

com relação aos protocolos com relação a os ensaios as inovações que vem sendo eh vem sendo realizadas nos nos respectivos Laboratórios né de cada pesquisador e é bem organizada essa Plataforma muito interessante inclusive nós fazemos parte dessa plataforma zebrafish aqui né no Brasil Então teve uma uma crescente com relação de publicações né como eu já falei e aí várias instituições já vemm usando o modelo né E principalmente em São Paulo né na USP na faculdade de medicina então Eh os últimos congressos que nós participamos né foi justamente lá na USP onde a gente viu que

que o animal já já vem sendo Usado né há muito muito tempo mesmo tem tem eh várias pesquisas usando o modelo com protocolos bem estabelecidos né publicações patentes então eh só veio acrescentar né mas aí com relação a ainda às áreas de publicação né gente coloquei aqui um pouco só para para para mostrar né no Brasil né a parte onde mais se concentram as publicações do zebrafish aqui no Brasil com relação à parte de toxicidade né de toxicologia né e em Seguidas vem parte neurociência bioquímica biologia molecular né então então cada área teve a sua

teve a sua crescente com relação a esse número de publicações né e aqui a gente pode ver no mundo né E aqui no Brasil ess esse quadrinho Traz essa essa classificação certo mas aí para quem não conhece o zebrafish ele é um nativo do sul da Ásia tá ele é originário das partes baixas dos principais rios da Índia tá aqui no Brasil né se ele tem diversos nomes né Mas o mais conhecidos nas lojas de aquários são é Paulistinha né então se você chegar em uma loja de aquarismo e quiser né fazer a compra do

do peixe eles vão conhecer por Paulistinha Teoricamente né então zebra Fish danho héo que o nome científico eles não não vão ter tanta familiaridade né mas Paulistinha eles vão conhecer então ele é encontrado em Águas rasas paradas ou de baixa movimentação certo com vegetação aquática submersa Eh vive em PH em temperatura variando do 5.9 né a 8.5 16 a 38 GC com relação a alimentação desses animais né zoop planto insectos algas detritos né ações onde a gente pode encontrar nas lojas de aquário então com relação à alimentação tem tem várias várias nós temos uma variedade

né com relação a alimentação do animal com relação à questão do comportamento né do animal zebrafish ele é um peixe que vive em cardons de sexos misturados na natureza né em cativeiro As suas atividades né se concentram né as suas atividades de urno tá mostrando os maiores níveis ao longo do dia né particularmente durante as primeiras horas da manhã então Eh realizar ensaios eh farmacológicos né onde se avalia comportamento o ideal seria né é né no período da manhã onde ele tá ali eh eh com asas atividades em alta né Então à noite Esses animais

frequentemente dormem né e no período da manhã eles têm ali a sua atividade bem ativa tá então Possuem um cíclo circad an de 14 horas Claro e 12 horas escuro de atividade governa muitos processos fisiológicos bioquímicos e comportamentais do animal né então Eh nós adquirimos Esses animais que T essa que tem todo esse cuidado né então a loja onde nós nós adquirimos os animais eh obedece esse ciclo C cardiano né então eh eh nós nós procuramos né obter os animais de uma loja onde tem toda uma procedência né Tem tudo registrado direitinho certo Infelizmente Nem

todas as lojas né Tem esse Cuidado então se vai usar o animal para pesquisa científica Então tem que observar todas essas características Né desde que não se faça a questão da reprodução no laboratório né caso você v fazer sempre a compra né então tem todas essas características a ser observada com relação à anatomia a fisiologia né do do animal a gente pode perceber aqui nessa tabela onde mostra Os estgios né cada estágio cumprim a descrição tá na larva jovem a gente tem aqui né o animal o tamanho do animal mde de 3 a 5 mm

né ele nada livremente com posicionamento vertical ah na larva aqui com 14 dias né Tem um comprimento de 6 mm bexiga tor recheia procure de alimentos crescimento então eh ele tem um C ele tem passa por vários estágios né Então até o estágio adulto tá e eh a gente pode observar aqui nesse círculo todos os estágios do Animal deja fasem né embrionária tá até a fase adulta eh e com relação à questão né dos an do zebrafish né marcho e fêmea né como é que eu vou posso diferenciá-los né então nessa foto aqui ao lado

a gente pode perceber né que o macho Ele tem ele é mais maior no sentido de tamanho né mais comprido podemos dizer assim comparado com a fêmea ela tem uma barriguinha sempre mais avantajado né e as listras que ele possui n nas fêmeas a gente Consegue também diferenciar elas possuem uma Corola menos eh menos vibrante a coloração do que comparado com máo né Qual o objetivo de se identificar um adulto né de uma fêmea obviamente se você quiser fazer protocolos onde você vai trabalhar com os animais na fase embrionária nas fases lavais você precisa colocar

os animais para fazer reprodução né então quando eu faço reprodução eu tenho todo aquele acompanhamento né da reprodução e nós Estamos nesses nesses estádios iniciais da produção né para fazer teste de toxicidade analisar vários fatores com relação à toxicidade eh desde a fase embrionária né até a fase a fase adulta tá então eh essa a importância de saber identificar o sexo né de cada o animal tá ainda a questão da anatomia e fisiologia né ele possui essas essa pele marcada por listras né que pode ser danificada por por manejo né durante o manejo tá e

A e esses fatores de questão de D planete do animal em si na pesquisa científica e de uma forma geral né é importante porque eles devem ser controlados e minimizados evitando que se abram portas de entrada para infecções bacterianas microbianas né então Eh eu se costumo dizer que zebr fich ele não não é um modelo tão sensível mas também pode adquirir ali algumas doenças né se não tratado o local de ambientação De forma forma correta certo então eu já tive problemas com carones com com infecções né com parasitas né Já recebi já tive infelizmente já

tive animais né que a gente observou ali parasitas que teve que fazer retirada que teve que fazer um tratamento Então tudo isso eh São cuidados né que nós temos que ter se tivermos qualidade Se quisermos né ter qualidade nos seus experimentos e para nós que trabalhamos com o modelo na questão comportamental principalmente né Geralmente eu não posso trabalhar como animal o comportamento do animal com ele doente né com ele com um com um comportamento alterado quando o animal fica doente o nado dele é minimizado né eu eu consigo observar que o animal não está bem

pelo nado né de cara pelo nado já vejo que tem algum problema como os animais então a gente já fica já deixa eles reservados em observação e procura investigar Quais as causas de determinada doença Certo E aí quais seriam as vantagens né quando a gente olha zebra ficha e roedores porque na pesquisa científica de forma geral quando a gente traz traz bioensaios a gente lembra de roedores a gente lembra de camundongo a gente lembra de ratos né E aí a gente traz aqui algumas vantagens né de se utilizar o modelo nessa tabela Ela traz três

modelos né traz a drosófila zebra fich camundongo e traz também algumas características né Eh entre os dois né Fecundação né externa do zebra fiche do camundongo interna o desenvolvimento do embrião zebra fiche externo camongo interno enfim a questão da produção de filhote se você vai colocar uma reprodução né se o seu objetivo é não eu quero fazer reprodução desses animais né eu eu vou ter ali em média sem ovos com relação a zebra fich eu vou ter em média 100 ovos por dia né o cund dong eu vou ter aí 10 filhotes a cada do

meses certo então a questão da manutenção também Diária né obviamente e e fazer o acondicionamento de um peixe Um biotério comparado com o acondicionamento de um rato em um biotério né obviamente eu vou ter ali uma vantagem do zebra fich é questão Econômica né a gente sabe que para para bioté rato com camundongo a gente sabe que sai bem bem caro né os custos bem altos certo então a questão da manutenção diária também é uma das vantagens né do zebrafish tá hoje a gente compra o animal né em Loja a unidade a 1,50 né E

aí com algumas pesquisas que nós fizemos é rato né a a gente chega comprar em algumas universidades a r$ 50 a unidade né então assim um custo muito elevado né n para quando você quer trabalhar com um número com n aí alto né de animais certo Outra vantagem com relação a comparação com o ser humano né então nós que trabalhamos com a parte comportamental do animal né a gente tem que levar em consideração o que é que há de similaridade entre o Modelo né entre o zebrafish e Nós seres humanos né Então essa esse quadro

quadro aqui ao lado ele mostra né A questão da similaridade genética né então o Genoma do zebrafish já é totalmente sequenciado então o rato né com relação ao ser humos eles têm 85% de similaridade né e os zebrafish tem 70% e isso quando avaliado algumas doenças né Eh essa essa similaridade ela sobe para 85 né não para 80 né então assim tem uma uma alta similaridade com Nós seres humanos certo Então isso é uma é uma das principais características que fazem do modelo né um modelo eh eh essencial né tem ali o sistema nervoso central

totalmente conservado com várias regiões né preservadas né Igual igual o nosso sistema nervoso central então assim dá para se trabalhar várias eh eh várias doenças que afetam ali o sistema nervoso central do animal certo então são inúmeras as as vantagens né quando a gente fala a questão de custos né custos Eh e de material também Chega a ser uma vantagem por quê Porque quando aqui eu até coloquei né a foto aqui do rato e a foto aqui do zebra fich ao lado custos elevados para o uso de roedores né e requerem quantidade elevada de material

para quem trabalha com pouco material né para quem trabalha com substâncias sintetizadas para quem trabalha com material que tem pouco rendimento né Eh o zebrafish se torna essencial por que porque a gente nós vamos administrar num Animal pouca solução de material obviamente né Com base no seu peso quando eu faço essa comparação com relação ao rato obviamente esse peso ele vai aumentar essa quantidade material vai aumentar né todo mundo tá me escutando aqui faltou energia estamos sim Ai que bom Ai que bom estou aqui no laboratório e acabou de faltar energia não tá dando certo

que bom pronto certo então é mais uma das uma vantagem de se Trabalhar com modelo tá eu coloquei aqui essa tabelinha para mostrar né Eh com mais uma mais mais mais uma vantagem né E mais uma curiosidade digamos assim né A questão da via de administração peixe coredor né camongo rato tá então as vias de administração M muita gente pergunta mas como é que eu aplico isso num peixe né Será que é a mesma forma que eu aplico no no rato no camundongo né então aqui a gente traz diferentes formas de Aplicação no rato né

a gente tem aplicação sub no camongo né no caso que a gente tem aplicação subcutânea intr muscular intra peritonial intravenosa intranasal né E até aqui é oral por gavagem né quando a gente Analisa isso em peixe como é que fica né como é que como é que acontece essa administração de soluções de amostras então uma das das primeiras vias de Administração é a questão da imersão tá na imersão né aquele material ele é solubilizado na Água e o animal é colocado dentro da água contendo ali o material então a gente chama de administração por ção

a outra via de administração assim como nos ratos é a questão da da administração intraperitoneal onde a gente pode perceber aqui nessa segunda foto eu tenho uma aplicação né pelo pela Via intra peritonial né em uma região próxima que é a barriga do animal tá então a gente chama de aplicação intraperitoneal outra aplicação que Também assim como no rato é ocasionado só que no rato a gente geralmente Acontece uma administração por gavagem né aqui no rato a gente faz aplicação via de administração por via oral tá então a gente observa aqui o animal recebendo ali

aquela solução Zinha diretamente na boca do animal tá outro tipo de de aplicação eh de de administração pela córnea do animal né que a gente chama de via de administração corneal então o animal Recebe aquela solução Zinha ali diretamente na córnea né Então tudo isso tem sempre o auxílio de uma pipeta automática né e de seringa onde a gente tem que administrar ali eh aquela solução por via intraperitoneal por exemplo então a gente precisa sempre de uma seringa de insulina né que é aquela seringa mais sensível né Eh que tem o bauzinho né tudo tudo

muito tudo muito e eh milimetrado e pequeno né para poder dar certo fazer essa aplicação ali via Intraperitoneal né a via intraperitoneal aplicação no peixe para essa via eu considero uma das vias mais mais sensíveis porque você pode chegar a perfurar ali algum órgão do animal né Dependendo da forma como você tá administrando então sempre a gente faz treinamento com relação esse sentido de vi administração para que não ocorra né venha a perder os animais certo hoje né Nós adquirimos a lojas a a A os animais né de uma loja local né chamada agroquímica e

aí como eu falei anteriormente Esses animais eles passam por um acompanhamento né a loja nos passa um relatório técnico sobre como Esses animais né são como eles receb de onde eles recebem como é a questão do armazenamento se eles reproduzem se não reproduzem então a gente tenta sempre saber todo o histórico da loja né para saber as condições que nós estamos recebendo Esses animais né quando esses Quando esses animais eles chegam na loja Laboratório a gente passa 24 horas né de aclimatação até o início dos experimentos certo então os animais chegam né a gente precisa

fazer aclimatação né fazer com que os animais se acostumem ali com uma nova temperatura uma nova água né como PH dureza tudo diferente da da da água em que ele estava inserido né então a gente tenta manter todos esses cuidados para padroniza tudo isso para que ele possa a Eh eh conseguir se adaptar aquelas novas condições tá E aí sempre armazenados né em aquários certo eh e alimentação né a gente geralmente utiliza a alimentação eh da loja mesmo aliment é ração PR PR específica né para zebrafish para peixe tá E eles se dão super bem

também a gente também da artênia salí eles gostam bastante né então a gente sempre intercala a questão da alimentação por dia tá então a gente tem ali um Cronograma é onde número de vezes onde tem que ser alimentado os horários tudo direitinho aí vem a questão da qualidade de dos Aquários né a questão da higienização como eu falei anteriormente né a gente tenta seguir aí as resoluções do conceio da concea eh questão dos PH né questão de ter cuidado com as densidades muito elevadas né não colocar o número mínimo ali eh de peixes por aquário

por ambiente né Então tudo isso a gente tenta levar em consideração Questão das trocas parciais de água também né então nós temos aqui no laboratório uma escala onde os alunos fazem o que a gente chama de rotina até a gente colocou o nome assim rotina E aí esses esses alunos tentam preencher a tabela com a rotina colocam data tudo direitinho tudo isso né e prisão do bem-estar do animal e aí né zebra fiche Assim como nós seres humanos eles são assim estressados por naturezas então quando Os animais chegam eles chegam bastante estressados eles t o

que a gente chama de mudança de coloração né durante a chegada tá Esses animais eles mudam a cor né quando eles estão bastante estressados então a mudança ocorre em função de um estresse fisiológico né Eh a questão também da da viagem né então eles chegam bastante estressados E aí quando quando observar a questão das anomalias morfológicas né O que se tem alguma coisa errada ali com Os animais como é que a gente observa os indicadores mais comuns de estresse são as as anomalias nas branquias eh os nadadeiras né então observa-se ali uma opacidade nas nadadeiras

uma descoloração nas branquias certo tudo isso pode ser ocorr eh devido a alguma coisa que não está certo na água né ou no comportamento Então tem que ser investigado se os animais tiverem algum desses indicadores a gente já procura investigar o que que Pode estar acontecendo e com relação às alterações comportamentais visíveis né Eh o nado errático a letargia né se o animal eh a tendência do do do do zebrafish é nadar de forma né frequente frenética bem rápido ali no seu nado natural quando eu observo né uma paralisação nesse nado uma letargia né Eh

imobilidade né alteração padrão no nado tudo isso indica né que tem alguma coisa estressando o animal que tem alguma Coisa errada ali também tá então a gente tenta observar também esses esses fatores outra questão é a questão da das condições né a gente pode ter problema com esses animais com relação até à condições ambientais da sala né temperatura Tá ok a luminosidade Tá ok né então incado seria uma sala com fotop perido natural né uma iluminação aí de 14 horas Claro 10 horas escuro né A questão da remoção do Cloro lío na água né tudo

tudo isso são eh condições em Que a gente tem que tá ento também tá então eh devido à falta né de algum deslisa algum problema que pode ter ocorrido ali a gente pode ter animais ali com um fundo né pode ter um animal como a gente pode observar aqui esse animal aqui essas figurinhas aqui abaixo da barriga bem avantajada né Eh são vermes né ali presentes entendeu então tudo isso a gente tem sempre que tá atento para evitar né esse tipo de problema e ficar Inviável você trabalhar com animal né então a gente então não

é só flores né Tem a parte negativa também que são os eh eh eh que são os problemas que a gente pode vir a ter com esse tipo de animal assim como os ratos como os redores de forma geral também ou qual qualquer outro modelo que não se tenha os cuidados necessários de manutenção e aí a gente vem pro pra área que mais se estuda né a parte do zebra fiche que é a parte de Do animal sendo utilizado eh em testes toxicológicos né então os testes toxicológicos do animal eh geralmente eles são expostos né

os Os experimentos Os Protocolos experimentais de forma geral né eles coloca os animais expostos a diferentes concentrações e solução test né os critérios para determinar os efeitos estabelecidos essa questão da Sobrevivência né da do crescimento das deformações onde eu consigo ver a questão da deformação né em um animal na Fase embrionária onde eu vejo ali uma formação de um olho de uma calda certo comparado sempre com a solução controle né então eh eh esses esse obviamente é é o protocolo geral né A questão da da da exposição do animal em diferentes concentrações daquela solução teste

para avaliar eh uma toxicidade Que tipo de toxicidade é é aguda é crônica e vai depender de cada protocolo tá de no de forma geral e dessa forma e aí tem a questão da renovação de solução estática Quando não existe renovação da solução durante o teste né tem a estática com renovação onde a solução é renovada periodicamente geralmente a cada 24 horas tem a renovação contínua onde a solução circula para dentro e para fora das câmeras testes é um tipo de renovação que pouco ser é utilizado em protocolos Mas é uma uma das classificações de

de de solução durante a análise de toxicidade No Zebra tá zebra fich Ok o que nós realizamos Laboratório é a estática com renovação né onde sempre a a solução é renovada periodicamente certo e os Animais recebem alimentação eh daquele determinado material de de análise certo a renovação do do dos Testes da solução na verdade ok Ahã então como eu falei né existe idade análise de toxicidade No Zebra toxicidade crônica né e a toxicidade aguda né a toxicidade crônica ali é um mês ou mais né para detectar os efeitos Letais né quando eu trabalho ali com

o animal na fase embrionária né e a toxicidade aguda que é a toxicidade que nós fazemos né onde é analisado até 96 horas né de 48 24 48 até 96 E aí analisada a questão da mortalidade ou imobilização dos organismos tá tá nós fazemos essas duas coisas analisamos a toxicidade e uma possível imobilização dos organismos eh após a administração daquele material em solução Ok E aí a análise da toxicidade a gente Analisa né a concentração o a doose letal né que são parâmetros que indicam a concentração tóxica né do meio que provoca respectivamente a morte

ou a inibição eh por exemplo crescimento de Metade dos indivíduos da população considerada Nas condições experimentais então aqui mostra né e eh como nós fazemos o teste de toxicidade em laboratório toxicidade aguda né até 96 horas E aí nós estamos em fase de teste de novos protocolos que são a toxicidade Aguda e embrião né então como eu falei dá para avaliar vários fatores no embrião que é a taxa de mortalidade a taxa de eclosão desenvolvimento de malformações que são as deformidades físicas né A questão do comportamento também do embrião né como movimento e as respostas

de estímulos certo então Eh dá para avaliar vários parâmetros no no embrião Então como nós estamos ainda no processo de reprodução e nós Montamos aqui no laboratório eh uma salinha Específica paraa questão da reprodução e para acompanhamento desses ensaios com embrião né Nós nós estamos nesse nesse processo de de validação dos protocolos com animal na fase embrionária Porque nós já fazemos né com o adulto e a gente pretende ampliar pra fase embrionária e aí ficar um estudo estudos mais completos né então assim é um desafio a questão da reprodução zebra ficha hoje no Brasil né

conversando com outros pesquisadores é considerado um desafio Né Devido as condições né então então fica a gente fica sempre trocando figurinhas entre um estado e outro e aí conseguiu aí foi como foi que você fez e tudo aqui não estou conseguindo eh nós ficamos felizes a felizes e tristes né em saber que não é só a gente que está passando por esse processo de dificuldade de reprodução todos os grupos que a gente conhece que tem contato parceria também passam por esse por esses percalços às vezes nós temos Temos a desola as desovas mas não foram

tão boas né então eh eh tem a questão da mal formação dos animais sem administração de nada ou então tem eh os ovos saem com com com com algumas lesões a gente observa sangue a gente observa várias coisas que não não é do padrão né não faz parte do padrão então são Várias Vários várias eh eh observações que a gente tenta manter e e entender o por que tá acontecendo o que que a gente tá fazendo de errado né só que no momento Tá dando certo agora parece que vai dar certo e está encaminhando né

no futuro nós teremos novos protocolos aí com a parte toxicidade envolvendo o embrião né esperando por por esse esse momento e aí a gente vem aqui mostro para vocês a questão uma um estudo foi publicado né Eh com toxicidade envolvendo toxicidade e também ansiedade certo most como eu falei toxicidade a gente mostra um artigo onde a gente utilizou eh analisou uma toxicidade Aguda né com o animal na fase adulta tá a gente conseguiu publicar Esse estudo com um uma chalcona né uma subclasse flav sintetizada a gente conseguiu analisar não foi tox e seguimos aí para

os os bai testes de baios tá E aí a gente vem chega no nosso grande gargalo nosso nosso Carro Chefe aqui né nossa linha de pesquisa no laboratório que é o uso do animal zebrafish em testes comportamentais Tá então assim mas Len como que dá para trabalhar algo que afeta o sistema n centrar no zebrafish né O que que o que é que o peixe tem o que que o peixe me traz né que e eh de recurso Onde eu posso analisar né O que é que eu posso estudar nesse sentido então Eh olhando pro

sistema nervoso central do zebrafish né a gente O que que a gente Analisa né através de alterações comportamentais né o efeito de diferentes moléculas diferentes Materiais com relação ao sistema nervoso central então a gente Analisa alterações fisiológicas no sistema nervoso central privações sensoriais de origem alatri alterações an neurogênese neurotransmissores então assim aqui a gente pode perceber eh o sistema nervoso central do zebrafish e o sistema nervoso central do humano né a gente tem várias regiões o bub fatri cex cerebral várias regiões que são ali preservadas né Em ambos sistema nervoso central e aí a Gente

consegue né eh estudar moléculas que afetem o sistema nervoso central ou inibem né uma resposta no sistema nervoso central tá E aí através de eh eh desse dessa linha de raciocínio né a gente busca avaliar moléculas ansiolíticas moléculas anticonvulsivantes né que vam ali inibir uma convulsão certo e a gente vai ver mais na frente um pouquinho um dos Testes comportamentais que a gente mais utiliza né A questão do Teste de Campo aberto onde Analisa ali a locomoção do peixe tá nesse teste a gente analisa o quê né o padrão do nado do animal frente a

diferentes amostras certo então a gente Analisa se aquele molécula se aquele material se aquele óleo essencial ele vai causar ali uma alteração na locomoção do animal tá alterando essa locomoção a gente investiga os possíveis efeitos dessa paralização ok E aí um dos Testes que nós realizamos é O teste do Claro escuro tá teste do Claro escuro ele também é realizado em ratos em camundongos né já existem eh eh vários protocolos né publicados eh onde eu dá é possível avaliar aí a ansiedade por um por um por uma caixa aí no caso né diferente do do

peixe onde é analizado no aquário né no rato em uma outra proporção pelo tamanho do animal obviamente né mas aqui eu coloquei só para em termos de comparação né Assim como os ratos oos zebrafish ele tem uma Aversão inata à áreas iluminadas né eles não gostam ali do claro então assim como nós seres humanos que tem geralmente tem uma preferência por ambientes escuros ze brofist também tem uma preferência por regiões escuras tá E aí esses animais eles são colocados em aquário com divisão região Clara e escuro né e após a administração de diferentes doses daquele

composto aquele material o animal e avaliado durante 5 minutos sobre a sua permanência na Região Clara do aquário porque se eu administro uma uma dose de uma substância ou de um fármaco de um medicamento e o animal permanece maior tempo na região Clara do aquário né eu tenho indícios de que aquele fármaco de que aquela solução ele é possível ente vem a ser ansiolítica certo e deixa o animal ali Tranquilo mais paralisado E aí ele está e ele fica a maior parte do tempo na região claro que é uma região que ele Não tem tanta

preferência natural por estar ali né porque eles gostam mais da região escura tá então a gente Analisa durante a questão da permanência do tempo um possível efeito ansiolítico de diferentes amostras usando esse teste e aí a gente Dent publicação né Com relação à ansiedade na superfí analisamos ansiedade de diferentes moléculas esse artigo aqui ele traz uma uma outra chalcona onde nós analisamos né Eh o efeito ansiolítico dela no Zebrafish E aí aliado ao teste de Campo aberto onde é um teste realizado aqui em placa foi realizado em placa e aliado ao teste do Claro escuro

nós encontramos o efeito an lítico desse material e fomos investigar a questão de mecanismos e e fomos a fundo fazer um estudo mais elaborado com docagem molecular tudo isso para deixar um estudo mais completo tá então um outro teste onde a gente analisa a questão do comportamento do zebrafish né na epilepsia tá a questão De crises convulsivas no zebrafish Ok então as crises convulsivas né Elas são induzidas pela exposição do zebrafish a agentes convulsivantes né e apresentam aspectos característicos de crises convulsivas em humanos certo então Eh nós nós nós analisamos no zebrafish os parâmetros comportamentais

que são possíveis de ser avaliados em Nós seres humanos né então são os estágios das crises convulsivas e quem tem a doença da epilepsia né passa por por por várias Vezes né Por crises epiléticas e a gente Analisa esses parâmetros comportamentais e aí essa aí vem as perguntas né as curiosidades mas como assim né como que eu vou analisar em um peixe dentro de água né possíveis estágios de uma crise convulsiva né E aí esse desenho ele mostra basicamente como que é analisado tá então esses animais são imersos né em um ptz que é um

convulsivante né que existe aí para para o desenvolvimento de Moléculas anticonvulsivantes né então nós induzimos esse animal a uma solução de ptz certo a determinada concentração e é observado no estágio um uma natação aumentada esse animal vai vai começar a ter um aumento do nada né ele já nada de forma bem frenética bem rápida né E ali na natação aumentada ele vai aumentar mais ainda esse n no isso a gente observa no estádio um no estágio dois nós vamos ter que nós chamamos de natação em redem unim nesse estádio os Animais vão começar a nadar

né Eh em redemoinho mesmo dentro do Becker né todos os testes são feitos em Becker né com tudo etiquetado tudo identif ficado né até porque a gente tá ali lidando com convulsivante né E aí esses animais vão passar por um processo de redema ent do bec E ali a gente chama de estágio dois ou fase dois da convulsão né que nos adultos é observado né quando eles ficam se batendo e tudo né então é exatamente o estágio dois eh da convulsão tá no Estgio três que é o estado assim mais que é o estágio né

e a fase mais mais que a gente pode observar melhor é a questão da perda de postura do animal e uma queda paralisada por 3 segundos então o animal chega ao Ápice do estágio ele tem uma queda né ele vira certo e chega ao fundo do Beck eh por uma paralisação de 3 segundos tá então eh basicamente isso a gente observa esses aspectos né essas características das crises convulsivas que acontecem no Humano no peixe e aí eu trouxe um vídeo mais na frente onde a gente pode até visualizar não falei aqui né ao lado a

gente faz tratamentos com as amostras né E aí determinada aí espera o intervalo ali de 30 a 30 minutos a 1 hora e faz análises desses desses estágios tá no zebrafish E aí a gente pode até observar aqui por motivos às vezes eh a gente fez questão de gravar e mostrar como que acontece né no zebrafish aqui a gente pode observar o Que acontece no primeiro estágio ele vai começar a ter um aumento do nado né No primeiro estádio certo essa solução aqui no entanto é o meio convulsivante né ptz E aqui ele vai começar

a entrar no segundo estágio que a gente consegue observar melhor pronto aqui o animal entrou no segundo estágio da convulsão vocês perceberam que ele começou a ter um nado em forma de redinho dentro do Beer né então aqui Ele entra no segundo estágio e começa a nadar em forma de círculo na borda né então aqu eles que se encontram no segundo estágio e aí vem o terceiro estágio da convulsão observada no zebrafish onde ele tem a queda né e a paralisação por 3 segundos certo e aí ele retorna nadar novamente e passa por todos os

estos novamente ok então esse é a avaliação da das crises convulsivas né da atividade Anticonvulsivante ali no zebra fich adulo e o que que a gente usa como parâmetro né a gente usa como parâmetro o tempo em que o animal passa para entrar em cada crise né então se eu tenho ali uma molécula um material que tem ali um efeito anticonvulsivante obviamente esse animal vai passar muito mais tempo ou não vai passar né ou não vai chegar a entrar em cada fase da convulsão e aí a gente tem nós temos artigos publicados com relação a

essa Metodologia de de convulsão né Eh onde a gente fizemos estudos de de estrutura atividade de extratos aqui esse segundo fala de um extrato que reverteu tanto a ansiedade como a convulsão né ansiedade de convulsão nós sabemos que aí que está interligado as duas doenças estão interligadas e aqui a gente consegue fazer uma abordagem e uma discussão mais mais Ampla nesse sentido né onde os resultados eles se conversam e a gente consegue trazer uma discussão Bem interessante eh eh fazendo trazendo essas duas essas duas doenças né de ansiedade e convulsão outro protocolo outra atividade que

nós fazemos a questão da da dor né chamado decepção não sei se alguém já ouviu falar esse termocepção zebrafish noção roedor camundongo em rato então nós trazemos nós fazemos vários modelos de nos seção no zebrafish né então aqui eu coloquei modelos decepção que são os Que nós chamamos de Agentes nocivos ou formalina Salina ácida Salina hipertônico os mesmos esses mesmos modelos são também avaliados em ratos Então já existem muitas publicações com relação a esses esses modelos tá E aí nós fizemos trouxemos aqui para o zebrafish analisando também no zebrafish então nós induzimos o modelo nós

aplicamos o agente nocio que é o o que vai causar ali a dor local né e depois nós trazemos o tratamento com fármacos Né nossos controles positivos e as soluções de de interesse de investigação para saber ali se aquela amostra vai ou não eh diminuir a dor que o animal vai estar sentindo né então quando esse animal está ali nadando quando eu aplico um agente noivo que vai causar uma dor no mal então o nado dele vai começar a dar uma paralisada esse animal vai parar né E vai ficar ali sentindo dor certo ele para

literalmente de nadar tá E aí a gente vem com a com com um uma uma Aplicação da solução de interesse né para ver a reversão da dor que foi induzida tá então todos esses padrões vocês podem observar que são avaliadas pelo comportamento tá então é pelo nado né pela tudo isso todos esses parâmetros estão relacionados ao comportamento do zebra fich tá outra outra publicação onde nós temos aqui resultados de dor no Animal né essa publicação aqui foi com um triterpen isolado de das Folhas do compreto Leproso né e a gente nós nós fizemos uma investigação

sobre diferentes modelos de dor e e verificamos né quais os modelos né o extrato ali atuou ou como anticonvulsivante tá Outro teste comportamental né que nós também realizamos no laboratório né é um dos Testes mais recentes que nós fazemos é o teste de aprendizagem em memória usando ze brofit né um teste que também é realizado com Rat né a as últimas publicações que eu vi realizado com rato Também tá só que obviamente com uma outra proporção né aí tudo que nós fazemos com zebr fich né vem aqui o a ao aquário né e com rato

eles fazem uma uma uma nova nova metodologia só que avaliando da mesma forma com a mesma proposta né então aqui para avaliar a questão da aprendizagem memória né E aí as pessoas perguntam mas o peixe vai aprender e vai vai aprender e memorizar informações né então então assim a gente diz que sim eles têm essa idade né eles Têm um sistema nervoso central totalmente completo então eles têm essa capacidade ali de aprender né a a e memorizar uma determinada informação esse teste ele é realizado aqui no aquário a gente pode observar aqui pelas fotos né

esse aquário ele é dividido também na região escura e Clara com a mesma proposta ali do teste de ansiedade no Claro escuro tá E aí nós analisamos aqui ele tem uma divisória que é um no meio certo tipo uma guilhotinas inha Onde a é possível baixar e subir aqui essa guilhotina E aí eh sim e aí aqui ao lado né na região escura nós temos essas barras metálicas né que são conectadas uma determinada voltagem certo eh e o animal né como eu falei anteriormente ele tem uma preferência obviamente pela região escura né pronto como o

animal tem uma uma preferência pelas regiões mais escuras né né Eh nós realizamos esse teste da seguinte forma Esse teste acontece durante dois dias né No dia um nós temos a sessão de treinamento e após 24 hor né Nós temos no mesmo dia nós temos aqui os 24 é depois no mesmo dia nós temos a sessão de tratamento tá então assim na sessão de treinamento o que que é realizado nós analisamos animal por animal né ah a questão da da memória da da a memória e aprendizagem do animal nós colocamos o animal na região Clara

do aquário nessa região aqui né ã Então Essas barras metálicas vão estar ligadas n uma voltagem Então a partir do momento em que eu coloco o animal na região Clara nós baixamos essa guilhotina essa portinha aqui né deixamos o animal ali aclimatado a região Clara e quando Subimos a portinha nós e eh apertamos aqui no sensor e esse sensor vai induzir um choque tá e quando nós Subimos à portinha obviamente como o animal tem a tendência de ir para a região escura porque a região de maior comodidade dele Né então ele vai pra região escura

e nós induzimos um pequeno choque tá Então nesse choque animal não morre tá nós induzimos esse choque então quando nós induzimos o choque obviamente ele vai voltar pra região né é clara do aquário mesmo não sendo uma região que ele goste né que ele tem ali a tendência e ficar mais tranquilo né então nós fazemos esse teste que nós chamamos teste treinamento durante não eh durante todos com todos os animais de estudo daquele determinado Grupo né e após esse treinamento nós aplicamos fazemos o tratamento ali com a com o fármaco com amostra de análise e

no dia seguinte 24 horas após tá nós vamos fazer a mesma coisa só que sem o tratamento né nesse sentido né O que que nós esperamos de uma molécula de um material que venha aí preservar a memória do animal né Nós esperamos que os animais né a ao ser levantado essa guilhotina eles não vá não vão ali para a região escura do aquário né porque Memorizar a informação do dia anterior né que se for ali pra região escura da par vão receber aquele choque em determinado em determinada frequência né então Eh então a espera-se que

o animal não vá para a região escura do aquário e fique né maior parte do tempo de análise ali na região Clara do aquário certo então esse é o teste de aprendizagem memória que a gente chama de teste de Esquiva inibitória também então o animal tenta se esquivar né de uma digamos ali De uma punição de um choque né onde ele sabe que recebeu se for paraa região escura da par certo e aí vem coloquei aqui zebrafish inflamação né Não sei se alguém já chegou a ver que é é possível analisar em ratos em camundongos

eh vários agentes né antiinflamatórios medicamentos antiinflamatórios soluções eh moléculas extratos isolados que tenham ali uma tendência de ter um efeito antiinflamatório em ratos né Então Eh Nós também fazemos em peixe certo nós analisamos a atividade antiinflamatória no zebrafish adulto tudo isso eh através da do peso do animal né então Então como é que é feita a questão do peso do animal em balança então nós colocamos aqui O Beque com a água né fazemos aquele processo de tarar certo colocar o animal e ali ter o peso corporal do animal tá então nós realizamos tratamento com os

animais com os possíveis fármacos né com as soluções De interesse E aí é que esses animais passam ali 30 minutos de forma individualizadas identificadas né porque eu tô ali eu avaliando o peso animal por animal né então assim como os cudos nós aplicamos né a carragenina que vai que vai ocasionar um edema no Animal então da mesma forma como como ocasiona no rato também vai ocasionar um edema aqui no ze fich adulto tá e após isso eh nós fazemos eh a questão da pesagem do Peso corporal do animal entre uma duas TRS e 4 horas

certo então o que é que eu quero avaliar aqui né do Peso se o animal receber um medicamento que vai inibir diminuir o edema que foi induzido né então obviamente o peso dele né vai diminuir né com as horas né então o peso Inicial que ele tem ali com a carragenina presente está bastante demasiado quando eu faço uma aplicação com possível antiinflamatório e a tendência é aquela inflamação aquele edema vinha diminuir tá e a aí a gente Faz um estudo com relação a possíveis estresses Dan oxidativo a gente retira fígado faz é análise de estresse

oxidativo em parceria e E aí a gente tem ali um estudo bem bem amplo mais completo Tá e aí vem zebrafish e diabetes né já Estou finalizando viu tá pertinho e aí vem zebrafish se fosse para falar de zebrafish é tanta coisa né tanta eh eh São Tantas áreas que que dá para se trabalhar que a gente Passaria o dia Todo falando zebrafish né mas vou tentar aqui resumir tá zebr fite diabetes né uma outra uma outra um outro protocolo padronizado né já com publicações no nosso laboratório né A questão da hiperglicemia da alta concentração

de açúcar no sangue certo a assim como é analisado em rat também dá para analisar quefit então nas nossas últimas publicações nós conseguimos eh induzir né a hiperglicemia No Zebra fite por meio da imersão né com arose com açúcar Né imerso com diss solução na água então nós deixamos Esses animais com alta concentração de açúcar no sangue né E esse estudo foi um estudo que demorou alguns dias néos animais passam eh eh um um do TR aqui nós pegamos apenas os dias íes né mas eles passam um dois trê até nove dias ali eh com

imersos n no sacar né os grupos de controle de análise ficam Esses animais imersos na sacarose determinada concentração tá E aí nós passamos quatro dias fazendo retirando a Sacarose e fazendo análises com com fazendo tratamento né desses animais com moléculas com fármacos que ten ali um um possível efeito hipoglicemiante né de reduzir a o açúcar no sangue desses animais e aí aqui como mostra a figurinha mas lemb como como que vocês analisam né então como é feito com o adulto da mesma forma que o adulto faz né pelo glicosímetro com a fitinha eh cada grupo

nós cada grupo de estudo nós retiramos os animais Fazemos o teste Para ver a concentração de Açúcar né tiramos o sangue colocamos lá no na fitinha analisamos no glicosímetro e verificamos se como é que tá o índice glicêmico tá então assim como os adultos analisam nós também fazemos a tirada do sangue e analisamos no efix dor tá então após o tratamento que dura ali durante 4 dias a gente faz a retirada eh do fígado também retira sangue retira fígado para fazer os estresses oxidativo um possível estess ostativo gerado ali No fígado né e avalia se

se os resultados foram bons né se se teve ali um possível efeito hipoglicemiante daquele material tá bom estudo E aí vem algumas publicações né com dor [Música] com ansiedade certo algumas publicações dos nossos grupos né foram protocolos todas esses protocolos que mostrei né de forma assim bem simples né mas exist muito mais informações que seriam Impertinentes eh foram publicados pelos nossos grupos tá E aí vem a questão eh muito importante que eu gosto sempre de falar né que é a questão do comitê de ética né quando a gente nós temos projetos de extensão eh onde

nós fazemos divulgação do modelo em em escolas também né E aí a gente a gente sempre fala da questão de do comitê de ética né e outros colaboradores com outros colaboradores também né então assim tem que ter obviamente né se trabalha com Animal aqui no Brasil né Precisa ter seja com rato com coelho com com ou qualquer outro modelo precisa ter o comitê de ética né para os experimentação animal né lá fora em Portugal em outros estados eles eles só podem trabalhar sem o comitê de ética eh a fase os animais a fase embrionária né

com a fase adulta já não pode tá então a diferença né então Eh é preciso ter esse comitê de ética hoje o comitê ele tá né bem mais restrito no sentido De a questão de você ter um curso específico para a para poder submeter um projeto da ceua né então mais nada mais do que justo né porque você não pode submeter sofrimento ao animal as condições né você tem que dizer o número que de animais que você vai precisar eh usar nesses experimentos a forma de de de que você vai sacrificá-lo ou não como é

como é que vai ser os animais que que Qual a finalidade dos animais que que não não foram usados ou que foram usados Né tudo isso tem que tem que constar ali no comitê de ética né então nós somos amparados pelo comitê de ética aqui da US né onde nós trabalhamos com plantas medic extratos plantas medicinais como eu falei né então Eh nós somos amparados esse comitê de ética nós sempre passamos por atualizações né existe sempre um comitê de ética então Pensa em se fazer um novo protocolo está estudando para fazer um novo protocolo onde

você vai usar um novo número de Animais uma nova metodologia as formas como essa metodologia será realizada tudo isso tem que tá na atualização do comit de ética né então Eh deixa aqui a questão da importância do comitê sempre tá então mais artigos aqui colocados com relação à hiperglicemia este primeiro aqui com hiperglicemia tá outros com ansiedade outros com hiperglicemia novamente certo se são trabalhos realizados tanto por mestrandos e Doutorandos laboratório quanto como parceiros da fc uva sobr certo vários outros outros parceiros nossos Ok eh ultimamente Esse aqui foi de 2024 foi nós tivemos a

nossa primeira publicação com parceria internacional né com pessoal lá do da universidade de m em Portugal onde foi avaliado né a uma Petros minina que é isolarem de uma esponja Marinha com relação a neurotoxicidade né então eles eles lá trabalham com os embriões já TM Trabalham tanto com embrião não somente com embrião é somente com embrião né então a gente tentou fazer com eles uma parceria como nós trabalhamos aqui com o adulto e eles trabalham lá com embrião né a gente trocar essas figurinhas e fazer um complemento para que possamos tem artigos aí mais completos

né então esse aqui foi o nosso primeiro artigo eh de com parceria entre eles né E a gente vai nós vamos recebê-los aqui eh através de um evento mais na Frente eu vou falar para vocês certo então aqui é nosso grupo de pesquisa nós somos nós temos aqui né alguns doutorandos Certo Sobre a orientação da professora Jan Professor Elso que é o nosso químico sintético que sintetiza nossas amostras temos mestrandos pós-doutorandos certo eh antes de finalizar aqui né eu também deixo deixo aberto para vocês um convite né Nós vamos ter o nosso primeiro evento eh

que vai ser o primeiro evento de Zebra Fish eh de todos os pesquisadores de zebrafish que trabalham com o modelo aqui no Ceará né então nós vamos ter esse primeiro S zebra tá então nós vamos receber pesquisadores de Portugal palestrantes do Pará Goiás todos os pesquisadores que já vem trabalhando com modelo eh alguns anos né E tem uma expertise muito grande então nós estamos conseguimos o edital e conseguimos aí eh eh um recurso para sediar o primeiro evento do modelo aqui No Ceará certo fico aqui à disposição de vocês Espero que não tenha demorado muito

Agradeço ao vson e fico aqui aberto a algumas perguntas e foi um prazer viu gente Obrigada nós que agradecemos Len eu acho que eh foi muito esclarecedor até porque é um modelo que todo mundo fala né mas até então tem muitas pesquisas e é importante tá enfatizando né paraa comunidade científica essas possibilidades e aí essa disciplina Especificamente ela é eh uma disciplina de métodos alternativos então nós temos vários modelos métodos que são padronizados já pelo pelo concea e eu disse eu preciso de alguém que realmente esteja trabalhando com zebrafish por isso eu fui falar com

a Jéssica que eu sabia que na US tinha um grupo que trabalhava Ainda bem que ela lhe indicou né sua palestra foi muito eh esclarecedora e trouxe eh trouxe a uma visão Geral do que se trabalha Atualmente Tá eu vou abrir a palavra agora pros meninos né para caso eles queiram fazer algum questionamento ou tiver alguma dúvida pode pode pronto quer perguntar alguma coisa pessoal pode perguntar Gabriel é boa tarde boa tarde começar parabenizando pela palestra Eu adorei Particularmente eu tenho uma afeição maior pelo pe porque eu tenho um aquário em casa ai que legal

para mim foi ótimo ver a palestra eu consegui eu vi muita Coisa que já tinha visto de alguma forma mas não tão prática assim forma tão científica E aí eu fiquei com algumas dúvidas ó da palestra são duas uhum A primeira é sobre as vias de administração você falou sobre a vias de administração intra peritonial que exige maior cuidado e a minha dúvida na verdade é como é que eu faço para me capacitar nesse sentido que eu posso vir administrar um dia em peixes Quando eu for atender quando quando você como você Faz para se

capacitar isso existe um curso pronto existe muito os cursos que a USP oferece certo de manipulação animal e e a rede zebrafish lá eles geralmente dão anualmente um curso de capacitação além do do evento anual eles dão um curso de capacitação de prática e teórica muito interessante Então o que que eu sugiro para você que fiquem atento a a às plataformas da da da rede zebrafish da USP tá que eles têm um grupo que sempre fazem esses Treinamentos eu eu Lene eu Lene fui aprendendo eh eu vim da Unifor né a unió tem um grande

grupo de pesquisa aqui que é uma universidade eh né particular que já iniciou trabalhando com zebrafish né com do E lá eu aprendi Porque eu tive uma capacitação lá em loco né E aí como eu mudei de Universidade aí vim para para o mestrado na na OBS né na Universidade Estadual foi que a gente deu continuidade mas eu sugiro você acompanhar eh eh e quando eles eles Lançarem esses cursos teórico e prático né você vê se consegue ir fazer lá a a capacitação teórica teoria e prática é muito interessante muito interessante na minha situação unif

CONSEG que ser mais acessível Aí caso eu queira ir para on eu falo com quem assim desculpa P você você mora onde eu moro em barbária mas eu tenho família em Fortaleza barbária pois então seesse convidado que eu lidou com a capacitação ah fico muito grato muito grato eu vou entrar em contato com A senhora então viu eu alguns pesquisadores nos procuram porque eles querem desenvolver protocolos que nós não conseguimos desenvolver aqui semana passada um rapaz nos procurou porque eles querem fazer a parte antimicrobiana né análise a gente não tem essa condição não tem estrutura

né então que é que eles queriam eh questão do manuseio né poxa Len Eu quero fazer uma aplic aprender a aplicar como é que eu com a amostra diso não tem Problema você vem a gente passa faz um curso de capacitação explica como você deve fazer né ele acompanhe todo o processo e você sai daqui aprendendo a aplicar certo pois eu fico muito grato eu tenho só uma segunda dúvida sobre o teste Claro escuro que para mim foi muito curioso e aqui na no FCA a gente trabalha muito com a questão do estresse e a

a possibilidade do bem-estar animal em qualquer seja o cultivo E aí eu Fiquei com algumas dúvidas por exemplo Qual o tempo de iluminação então que eu posso colocar dentro do meu aquário do meu sistema para que eu não venha estressar os peixes ou se se refere somente ao zebrafish eu não entendi muito bem sobre o teste do Claro escuro eu entendo que talvez assim pela minha lógica ele por ser uma preso ele tenda a se sentir mais confortável em um ambiente onde ele possa se esconder pronto o test do Claro e escuro como eu Falei

Eles têm preferência pelo escuro né os animais eles eles gostam mais da região Escura então quando eu coloco o animal num teste onde eu tenho uma região clara e uma região escura quando eu coloco o animal diretamente na região claro eu já tô causando ali um estress um um um um estresse né porque eles não gostam daquela região o que que eu analizo nesse teste moléculas com efeito ansiolítica porque se eu tem uma molécula com efeito ansiolítica os Animais vão ficar mais sedados mais tranquilos né porque eles são ansiosos por naturezas no o fato dele

ir pra região escura eles vão lá para ficar nadando de forma frenética então quando eu faço um tratamento com uma droga um efeito ansiolítico eles t a permanência ficar mais no Claro porque estão mais tranquilos ficam mais o nado dele é alterado Eles não nadam tanto certo é como se fosse um efeito de um jaz Pan né que deixou eles ali o controle de Japan Deixou eles ali mais tranquilo certo então a questão do tempo não é não é um tempo não é a questão do tempo em si é é a as condições em que

eu coloquei o animal eu coloquei o animal já já é uma condição estressora e espero uma resposta sedativa de algo que eu que eu que eu eu estou avaliando com relação à ansiedade né com efeito sedativo que tem um efeito ansiolítico que vem a diminuir a ansiedade certo então o teste basicamente é esse com relação a tempo De eh iluminação Eu falei acho eu falei ali 14 10 né 14 Claro 10 escuro é o círculo citad do peixe natural do zebrafish isso eu falo do zebrafish certo onde e eh a o concea é o concea

é o concea é que né fala o cículo exatamente que deve ser obedecido para o melhor bem-estar do animal certo que é esse ciclo circadiano de 1410 tá eh eu acho que era isso que você quis dizer ou será que eu não entendi não é Isso mesmo is né ah Consegui fechar legal esse mas aí Gabriel seu nome né Gabriel pode entrar em contato comigo pode pedir meu número para o vson e a gente pode alinhar Nossa capacitação sim viu pois sou muito grato muito obrigado deixa eu olhar aqui o chat tem mais alguma pergunta

gente vocês querem perguntar mais alguma coisa não Len muito obrigado viu pela disponibilidade por ter destinado aí Quase 2 horas e para est falando um pouquinho pra gente sobre zebrafish e aqui na ufca tem alguns grupos que estão começando a trabalhar Professor CL trabalhando não sei se já é em parceria com vocês mas é um tema importante relevante né e eu tenho certeza que possa ser que outras parcerias aconteçam né E aí venha realmente pro Cariri não venha só é tá colaborando gente gente é um prazer o Que a gente precisar estabelecer parceria nós estamos

aqui de portas abertas né e a gente só pede para os parceiros a questão da compra dos peixes que nos ajude mas assim mas assim a questão da compra dos peixes né comparado os redores aí a gente consegue ter um animal aí a 1,50 então assim é um custo não tão elevado né comparado a ratos camundongos Mas a gente sempre tá aberto as parcerias né então nós vamos ter esse evento onde nós vamos receber Os pesquisadores de Fora Se quiserem vir para cá ter curiosidade mais sobre o modelo animal fica aqui meu convite vai ser

em março do próximo ano né como nós vamos sediar já estou adiantando então assim vai ser Março do próximo ano esse evento vai durar três dias tá e a gente vai receber o pessoal de Portugal pessoal do Pará Goiás então várias regiões e aqui a gente pretende porque assim aqui na US não não só tem nós que trabalhamos com zebrafish aqui na US né Então tem outros grupos que trabalham FC unicristo então várias universidades já estão aí trabalhando com modelo o nosso intuito é unir esses pesquisadores né E aí conhecer mais aquilo que a nós

ainda não conhecemos que dá para fazer com modelo tá então fiquem aí o convite para vocês tá bom agradeço É tá bom depois me manda o o quando for lançado o site do evento po enviar eu divulgo aqui na universidade também tá perfeito perfeito obrigada gente pois mais eh obrigado Mais uma vez pessoal eh eu vou encerrar aqui no caso eh a aula de hoje eh eu já disponibilizei um artigo para vocês sobre a temática lá no no no Cai algumas orientações né sobre o trabalho que vocês vão fazer e a Elene disponibilizou pra gente

gravar a palestra vou estar disponibilizando para vocês também tá teve vários pontos importantes e aí eu vou pedir o de um resumo da palestra né pelo menos para citar eh para vocês revisarem verem novamente qualquer Dúvida que tiver me envia que qualquer coisa se eu não souber responder é eu entro em contato com ela tá bom e muito obrigado né ter uma boa tarde boa tarde muito obrigado Mais uma vez