VÍDEO 10

Ô thago você pode voltar na parte que você falou como eu posso ver que as corridas terminaram eh você foi ali para você ver na verdade até mudar o jeito que a gente fala e para saber o que que já foi adquirido de fato você sempre vai vir aqui no Browser Project aqui aí ele vai pedir para você abrir o projeto onde foram adquirido os dados e ele tá aqui então parece um lembra muito o Excel mesmo tá só que assim encarem assim cada linha dessa aqui é um arquivo que foi gerado ou manualmente que a Bianca criou o método ou então que foi salvo durante a aquisição de dados mesmo propriamente dito E aí vocês T que se familiarizando com os nomezinho que tem aqui é inevitável tá sample set são as as listas que a gente correu que a gente fez corrido lembra que a gente ficava selecionou o primeiro para tentar achar cafeína Ah e injetou ele gerou um sample set pra gente então dentro desse sample set repara que aqui vai mudar ó tinha uma injeção lembra que nós fizemos uma injeção procurando a cafeína não saiu nada se eu dou dois cliques nela ela muda pro channels que aquilo que a gente estava vendo aquele cromatograma ele chama de Channel então o canal foi adquirido Se eu der dois cliques agora ele abriu lembra que tinha uma era para ter né uma cafeína e não tinha nada na cafeína é que aqui ele tá o 3D já eu falo disso aqui tá mas se eu extraio o cromatograma vocês lembram esse cromatograma aqui que a gente ficou esperando saiu pique não sau nada então ele tá aqui dentro foi um cromatograma adquirido o último sample set que a gente fez foi esse aqui ó número um aí Aqui tá a data e o horário ó que a gente colocou para injetar medi três se eu dou dois cliques ele fez tudo isso aqui de injeção se eu dou dois cliques dentro de uma da injeção um aqui ele vai abrir o Channel o Channel abriu o cromatograma lev o Cadê o cromatograma o cromatograma É esse aqui só que ele é em 3D todas as vezes que a gente for criar um instrumento método que a gente colocar varredura de 210 que Ero aquele padrão a 400 ou de 190 A 600 ou de 250 a 800 nôm ele vai te dar umato desse jeito aqui então não se assustem com o cromatograma não aparecer aqui todas as vezes que você foi usar o 3D você vai ter que extrair o cromatograma em um comprimento de onda fixo então a varredura foi feita de 210 nôm a 400 nôm Então esse gráfico aqui que vocês estão vendo é tempo não é intensidade aqui e sim comprimento de onda tá aqui embaixo eu tenho tempo o mesmo tempo 2 minutos intensidade mas não tá aparecendo o cromatograma aqui então você vai ter que clicar com o botão direito mas a escala de baixo ele tá tá um minuto só é ele aqui diz é não é embaixo o tempo aí ele tá até 1 minuto é que eu acho que é o de baixo ele ainda tá perdido Eu Vou extrair é eu cliquei com o botão direito E aí eu fui extract cromatograma aqui Ah tá quando eu clico em extrair cromatograma daí sim agora foi para dois né ó tá vendo porque a referência é esse cara aqui de cima a tão vendo que tem um cromatograma aqui agora esse cromatograma Ele tá em 265 nôm se eu trocar para 254 ele muda a intensidade aqui do do canal de baixo tá e se eu clicar com o botão de direito aqui vin aqui em extract Spectrum parece o Harry Potter né Spectrum não tem uma coisa assim en então se a gente traçar tá vendo ó O cromatograma a gente pega o comprimento de onda daqui e aqui é tempo de retenção certo então conforme ele foi adquirindo o tempo de retenção ele foi gerando espectros do qu de 210 a 400 nôm então ele gerou pontos de aquisição voltou pontos de aquisição e voltou ele foi gerando um 3D pra gente de intensidade nessa varredura espectral essa varredura espectral se a gente olhar tem um gráfico Zinho 3D plot aqui ó nos posso usar esse no trabalho e ó é um 3D de fato varredura de 210 nanm 400 tempo de retenção eí lá no tempo perto do 1. 20 e aqui intensidade né perto do 1. 20 ele deu essa sai um pico cromatográfico lá que dá uma banda espectral com essa característica aqui essa característica Deixa eu voltar aqui essa caracterí já eu falo de todos esses ícones aqui tá mas essa característica ela é específica da molécula que saiu naquele pico esses espectro aqui é característico da cafeína de fato tá então eu sei que é cafeína eu consigo falar que é cafeína nesse momento tá por é um detector seletivo a banda espectral é específica dele tá e eu posso ter outras moléculas com uma banda semelhante posso Esse é o BO do a a seletividade do PDA ela não é tão alta assim ela não é Nossa espetáculo de de de seletividade só que para isso para confirmar eu consigo traçar vários espectros ao longo desse pico cromatográfico E caso eu tenha em alguma região do pico uma característica espectral diferente distorcida Pode ser que eu tenha outro pico lá dentro desse pico isso aqui isso que eu acabei de fazer pode ser usado para vocês na hora de vocês trabalharem o extrato de vocês ter lá não vai ter um pico da cafeína vai ter 15 Picos E aí como saber se esses Picos é só uma molécula ou não você vai traçar o espectro e vai olhar as características do espectro você consegue puxar na literatura se você puxar digitar no go spect pá da cafeína você vai conseguir achar algo semelhante a isso aqui tá E aí você consegue dizer que de fato olha Cafeína é a cafeína cara tá lá mesmo é que a gente já sabia que é um padrão né é inevitável a gente ter essa noção mas dá para ver que esse pico aqui ele tá realmente puro né tá com uma característica espectral aqui bem interessante tem algumas ferramentas que dá para ser aplicad mas talvez seja um um segundo passo tá pra gente trabalhar com as ferramentas nesse primeiro que Você clicou lá com o botão direito aí esse comprimento de onda é ele que ele que escolhe né aqui vai extrair é o cromatograma não eu é a gente que escolhe Ah então isso aqui eu posso mudar ó se eu pegar aqui arrastar por exemplo ó tá vendo que tá mudando o cromatograma lá ó e aí qual comprento de onda eue usa né é recomendado você usar o ponto máximo do espectro então eu venho aqui extraio o espectro e olha 2722.

103 então eu posso usar 272. 2 que seria o ideal aqui nesse caso aí você vai falar ah mas por que que eu não uso isso aqui então né É porque essa região aqui do espectro a própria fase móvel ela tem uma absorbância grande também então se eu se eu jogar aqui para baixo ó é o pico continua intenso igual derrubou que eu ia falar eu ia falar é abaixo de 200m e isso varia de solvente para solvente Mas você tá usando água set por exemplo a água e a set também tem uma determinada absorvância lá só que são absorbâncias baixas aqui do 180 nôm 190 por isso que não é recomendado você colocar medir a concentração do seu analito baseado numa região baixa espectral mas sim no segundo ponto sempre que ele tiver maior intensidade então deu 200 71 2 Ops 2. 1 né Essa seria a intensidade máxima de de avaliação do seu do seu pico cromatográfico tá então nós começamos pelo 3D só que aqui ó ó a gente tem sle sets injections channels métodos Lembra que você criou um método chamado instrument método treinamento operacional e salvou ó ele fica preso aqui dentro aí você vai falar não mas eu criei só o instrument método e o método set e o sample set método não foi é e por que que tem tudo isso daqui porque quando a gente tava criando o projeto lembra que eu falei ah coloca como cópia o default aí ele foi puxou tudo isso aqui sim tá então se eu der dois cliques aqui nesse instrument met eu consigo abrir novamente aquilo que você criou aquela hora tá habilitado pro PDA tô dentro do PDA lampion 3D plot 3D de 210 a 400 se eu tirar isso aqui e vir aqui colocar 254 273 nôm que seria o o comprimento de onda pra gente fazer uma aquisição paraa cafeína né ele ia gerar um gráfico pra gente um cromatograma semelhante a isso aqui ó só sem isso aqui sem isso aqui então você pode optar por fazer um ou por fazer o outro fica a seu critério isso aqui é muito usado justamente para poder você ter certeza que a molécula é molécula caso você não tenha um padrão e segundo a para poder saber a pureza desse pico aqui então quando vocês injetar de novo o extrato eu essa técnica do extrato porque vai ser complexo não vai ser tão simples a gente tem que ter essa clareza vai sair infinidade pico um ovo assim tudo torto sabe vai sair aquele aquele Cácio Mas não tem problema vai pico por pico sair faz isso gera o espectro você vai ver essa característica aqui daí você consegue baseado numa sugestão também você deve imaginar o que tem o que não tem de compostos fenólicos você vai procurar já o espectro desses compostos fenólicos também uhum para tentar fazer um cara cachar ali ó esse aqui tem um um espectro tal então É o Fulano traça vários espectros em várias regiões desse pico tão todos iguais [Música] tá igais né É igual tá então expic tá puro tá caso ele não esteja igual tem alguma distorção na no espectro Aí lascou aí é você tem que tentar fo separar alguma coisa que pode estar ali saindo junto tá isso isso aqui é é uma maneira Até manual da gente fazer tá tem outras ferramentas possíveis da gente eh utilizar aqui no momento certo a gente vai eh falando sobre elas Beleza beleza Ô Thiago quando a gente faça o padrão também aparece como esses gráficos é vai eu passei o padrão e passei minha amostra tem como comparar ali mesmo tem os dois já é sim então assim na verdade aí tem tá a já tava falando do espectro tá mas aqui tem um tempo de retenção Hum deixa eu ver se eu deleto isso aqui que estão deixa ver aqui consigo deletar não aí aqui chado eh aqui dá para ver né Tem uma bandinha aqui só né tá tá bem bonitinho né esse esse espectro aqui né na verdade esse cromatograma né mas isso aqui ó aqui tem um iconz inho até agora eu usei três ícones aqui o do 3D plot se você coloca o mouse em cima ele mostra 3D plot 3D plot eu usei esse Icone Zinho aqui que é o review Main Window que é a página principal tá lá o cromatograma e tem um botãozinho aqui chamado integrate se você clica aqui integrate ele integra tudo que achou que saiu da linha de base e voltou inclusive seu pico cromatográfico aqui ó tá vendo que ele deu algumas outras integrações aqui isso aqui é sujeira e só de só de clicar aqui ó ele integrou esse pico cromatográfico aqui certo quando ele integra ele te dá esse valor aqui ó 1.

413 1. 413 Nas condições de uso hplc é Arc hplc coluna de 5 cm tamanho de partícula pá tudo isso aqui 90 10 fluxo de 1. 4 ml por minuto sempre ele tem que sair em 1.

4 e Então você ou crava que é a cafeína por pelo tempo de de retenção nessas condições por isso que se você passa um padrão desenvolver um método de um padrão e você conseguiu obter sei lá cinco Picos diferentes cada um vai dar um tempo de retenção diferente esse tempo de retenção é característico da sua molécula de interesse quando você passar sua amostra o pico que sair no mesmo tempo de retenção Você pode falar semelhante equipamento semelhante condições semelhantes tudo semelhante você pode dizer que é a sua molécula de interesse então tem duas maneiras né de você eh saber ou no tempo de retenção ou então no aqui no caso como vocês TM um PDA tem como fazer a barred dura que foi o que a gente fez e captar o espectro dele aí baseada no espectro como é específico de cada molécula você também vai conseguir ver se você colocar esse perfil aqui em cima for sobrepondo vários espectros esse aqui é característica da cafeina é seletivo é um detector seletivo Beleza quando eu cliquei em integrar aqui ó ele gerou pra gente uma série de informações aqui embaixo tempo de retenção tem algumas outras aqui sobre pureza de pico e uma coluna aqui chamada área a outra chamada altura a área aqui ela é proporcional e a área deu 2 milhões 8756 é um número absoluto aqui não tem unidade tá então deu isso aqui de área essa área é proporcional à concentração daquela primeira injeção da cafeína que a gente fez lembra que a gente fez várias injeções né então eu tinha aberto vou cancelar aqui e se vou conseguir ver então a concentração da quantidade que tem exatamente pela área você consegue puxar pela área o quantidade ó lembra que eu que eu falei 2 milhões né então ter que extrair um spectro de novo aliás porque daí todo mundo tem que dar tem que tá no mesmo Méia Ona vou integrar a área dela agora 6.