buen día buenas tardes o buenas noches les doy la bienvenida a los trabajos prácticos de anatomía histología del segundo cuatrimestre de 2020 en este primer trabajo práctico veremos técnica histológica y microscopía que estudiamos en nuestra materia cuando hablamos de anatomía hablamos del estudio macroscópico del cuerpo humano de cada órgano o elemento que lo compone el cuerpo humano se estudia su forma sus relaciones estructura vascularización inervación desde un enfoque de la anatomía descriptiva se divide el cuerpo humano en aparatos y sistemas por ejemplo el aparato digestivo o el sistema linfático y se estudia cada uno de
ellos y desde el enfoque de la anatomía topográfica se divide el cuerpo en partes por ejemplo el tórax o el miembro superior y se estudia cada una de estas partes cuando hablamos de histología hablamos del estudio microscópico del cuerpo humano es decir las características de los tejidos y las células que los componen observadas a través de diferentes tipos de microscopios por lo tanto que estudiamos en la toma histología estudiamos la morfología del cuerpo humano y de cada una de las estructuras que lo forman siempre en relación con su función a lo largo de la materia
vamos a ver que la morfología de cada parte del cuerpo siempre se relaciona con su función cuáles son los niveles de organización del cuerpo humano cada individuo organismo pluricelular está formado por aparatos y sistemas a su vez formados por órganos formados a su vez por tejidos los aparatos son conjuntos de órganos con una determinada función formados por distintos tejidos con distintas funciones por ejemplo el aparato digestivo sus funciones absorber nutrientes y eliminar desechos y está formado por la boca faringe esófago estómago intestinos y glándulas anexas todos órganos distintos con distintos tejidos cada uno con una
función específica que colabora la función final del aparato digestivo en cambio los sistemas son conjuntos de órganos con una función determinada pero todos formados por tejidos similares con la misma función por ejemplo el sistema linfático está formado por el bazo el timo y los ganglios linfáticos todos formados por tejido linfoide y todos con la función de defender al organismo de agentes extraños todos los tejidos van a estar formados por células y medio extracelular que pueden estar en distinta proporción las células a su vez se forman por organelas y cito sólo dentro de las células tanto
del sitio sol como en las orgánicas tenemos macromoléculas que son compuestos químicos orgánicos como las proteínas los lípidos los hidratos de carbono y los ácidos nucleicos rodeadas por una solución acuosa de iones y moléculas más pequeñas en esta materia vamos a estudiar desde lo más grande los aparatos y sistemas que conforman el cuerpo humano hasta lo más pequeño tejidos células y órganos de las que analizamos por medio de microscopía en esta diapositiva tenemos como ejemplo los órganos abdominales del aparato digestivo de los cuales se toma una pequeña porción de intestino delgado para su estudio microscópico
a través del moc o microscopio óptico de campo claro podemos estudiar los tejidos y las células que lo componen en esta materia siempre que hablemos de características histológicas nos vamos a referir a las características de las células y los tejidos que podemos observar con el uso de un microscopio óptico a través de la microscopía electrónica podemos observar células y componentes sub celulares con mayor detalle el met o microscopio electrónico de transmisión nos permite observar el interior de las células siempre que hablemos de ultra estructura celular nos vamos a referir a las características celulares que podemos
observar con el microscopio electrónico de transmisión es decir cómo se distribuyen las orgánicas en la célula que organiza se encuentran más desarrolladas etcétera el mes o microscopio electrónico de barrido nos permite observar las superficies celulares y dar detalles con respecto por ejemplo a su forma oa las diferenciaciones de membrana celular luego de esta pequeña introducción vamos a empezar entonces con los contenidos específicos de esta clase y arrancamos por técnica histológica cuáles son los dos estados fisiológicos en las que se encuentran las muestras a ser estudiadas y esto lógicamente a lo largo de esta materia vamos
a ver que podemos estudiar células vivas o muertas qué técnicas se utilizan en cada caso si queremos ver cambios fisiológicos en las células debemos tener la posibilidad de observar las vivas y para eso necesitamos tres cosas una fuente de tejido vivo por ejemplo cultivos celulares o células extraídas directamente del organismo vivo por otro lado necesitamos un método de tinción que además de tener específicamente distintas partes de las células sea compatible con una célula viva para eso se hacen funciones vitales sobre el mismo organismo atenciones súper vitales sobre células o tejidos extraídos de los organismos en
ambos casos usan colorantes vitales que tienen la propiedad de atravesar las membranas celulares unirse a moléculas específicas de la célula pero no fue no afectar su funcionalidad un ejemplo de colorante vital es el azul de metileno también necesitamos un instrumento para ver las células y los tejidos teñidos por ejemplo el microscopio óptico de campo claro el de contraste en fases de interferencia y de fuerza atómica es importante que sepan que no pueden observarse células vivas con microscopía electrónica si queremos observar células y tejidos muertos tenemos distintos métodos el que se encuentra más ampliamente usado que
también es el que más vamos a ver durante la cursada es la técnica histológica convencional usando como colorantes la ema toxina y la vecina la técnica ecológica es la serie de pasos secuenciales que hay que seguir en orden para poder obtener un preparado ecológico listo para verlo al microscopio óptico el preparado histológico es una lámina muy delgada de tejido que se encuentra coloreado y que se ubica sobre un vidrio rectangular denominado portaobjetos y cubierto por otro vidrio más delgado denominado cubre objetos entonces cuáles son los pasos de la técnica histológica convencional en primer lugar en
la obtención de la muestra que puede ser una fracción de un órgano o tejido con lados de aproximadamente un centímetro para evitar que la muestra se degrade se procede a la fijación con formol que detiene los procesos fisiológicos logrando mantener la estructura tisular a la muestra obtenida entonces directamente se la sumerge en un recipiente con formol para poder cortar el preparado en vetas finitas es necesario incluirlo en parafina y para eso tenemos que seguir una serie de pasos como el formol es hidrofílico para que la parafina pueda penetrar en el tejido es necesario un paso
de deshidratación esto se hace con distintas soluciones de etanol en concentración creciente por ejemplo estando al 70% al 96% y al 100% y de esta manera todo el agua dentro del tejido se reemplaza por el talón luego se hace un paso de aclaración con filón el siglo es un compuesto visible tanto en etanol como en parafina entonces sirve como nexo entre ambos y al sumergir la muestra en silos se desplaza todo el etanol y luego puede hacerse la impregnación en parafina para esto se sumerge la muestra en parafina líquida y se la deja en la
estufa o bernard en toda la noche hasta que la parafina penetre por todos los recovecos titulares de esta manera obtenemos un bloque de parafina con la muestra en su interior con lo que vamos a formar el taco que es el elemento que metemos en el micro tomo para hacer el corte el micro automóvil es un instrumento muy parecido a una máquina de cortar fiambres pero con la particularidad que hace fechas muy delgadas del tejido en el orden de los micrómetros de espesor luego se realiza el montaje preliminar que consiste en apoyar la lámina de tejido
que sale del micro tomo sobre el vidrio que funciona como portaobjetos el paso siguiente es la coloración de la muestra como los colorantes usados en la técnica histológica convencional son hidrofílicos es necesario llevar la muestra de nuevo a un medio acuoso y para esto se hacen los pasos que vimos previamente pero a la inversa de espera finalización con siglos que disuelve y saca la parafina rehidratación con soluciones de etanol en concentraciones decrecientes por ejemplo etanol al 100% al 96% al 70% y agua y coloración con emma talks y línea de dioxinas que son los dos
colorantes mayormente usados en la técnica histológica convencional todos estos pasos se realizan sumergiendo la muestra montada sobre el portaobjetos en las distintas soluciones en este punto ya tenemos la muestra coloreada sobre el portaobjetos y tenemos que hacer el montaje definitivo para conservar la intacta por años los pasos a seguir son nuevamente una deshidratación con concentraciones crecientes de etanol aclaración con silos y montaje con bálsamo de canadá que es hidrofóbico para esto se pone una gota de bálsamo sobre la muestra y se apoya suavemente el cubre objetos el bálsamo actúa como pegamento que cuando se seca
se endurece completamente y queda listo el preparado ideológico para que puedan entender mejor los pasos de la técnica histológica convencional y para que vean y puedan apreciar como realmente es una técnica sumamente artesanal les vamos a mostrar una serie de vídeos de lo que hacemos nosotros en la cátedra para realizar nuestros propios preparados histológicos en esta primera imagen ya se realizó la recolección de la muestra tenemos algunos órganos de ratas sumergidos en formol la fijación con formol se hace por lo menos un día pero puede mantenerse en formol de manera intacta durante varias semanas el
paso siguiente a la fijación en formol es realizar la deshidratación de la muestra para eso es una batería de alcoholes con distinta concentración de etanol y se pasa directamente en los órganos por esos alcoholes en este ejemplo tenemos dos riñones de rata siempre que se pasa a una solución a la otra debe sacarse el excedente de líquido para no contaminar esa solución y las soluciones siempre se descartan de manera adecuada la batería de alcohol de deshidratación en este caso incluso en alcohol al 70% un alcohol al 96 por ciento y dos alcoholes al cien por
ciento siempre que queremos deshidratar lo que tenemos que hacer es usar alcoholes en concentración creciente en este caso los alcoholes de deshidratación los volvemos a juntar ya que usamos en la misma batería de alcoholes para varios órganos fíjense como a medida que van pasando por los alcoholes va cambiando el color y el aspecto de los órganos finalmente luego de la deshidratación se hace el paso de aclaración con silos para eso se usan esos guantes negros que son guantes de nitrilo ya que el silo el disuelve el látex de los guantes comunes si se hacen nuevamente
dos pasajes por siglo hoy todo este trabajo se hace siempre en campana para evitar respirar los vapores que salen de los solventes el paso siguiente es la inclusión en parafina parece se ubican los órganos ya deshidratados y aclarados en unos moldes también pueden usarse jugueteras de hielos fíjense que ahí tenemos muchos órganos cada uno rotulado como corresponde se usa para final y cuida para eso se disuelve en la estufa y se vuelca directamente sobre los órganos para que la parafina pueda penetrar por todos los espacios del tejido se deja estos órganos en parafina durante toda
la noche en la estufa luego se saca y se deja que la parafina se enfríe para que se forme el bloque con este bloque de parafina lo que tenemos que hacer es formar el taco y para eso lo vamos a adherir a un bloque de madera una vez que tenemos los tacos formados podemos pasar al micro tomás realizar el corte ese es el micro tomo ahí tenemos ubicado el taco en el micro tomo y acá tenemos el micro tomo funcionando como los cortes que realiza el micro tomo son tan delgados muchas veces sucede que se
afecta se pliegan y para eso lo que hacemos es tomarlo con mucho cuidado y extendernos en agua tibia una vez que los tenemos extendidos en el agua directamente se pescan con el portaobjetos que es ese vidrio rectangular y así como esta se deja en la estufa durante unos minutos para que la muestra se adhiera al vidrio y no se pierdan los pasos siguientes así finalizamos en un montaje preliminar y tenemos la muestra sin colorear lista para ser teñida para realizar la coloración se utilizan esos recipientes denominados cumplen los pasos previos a la coloración incluyen la
des para optimización con silos y la rehidratación con una batería de alcoholes de concentración decreciente fíjense cómo se ubican los portaobjetos dentro del copinh y cómo se sumergen en cada una de las soluciones el tiempo que debe quedar la muestra en cada solución es algo que debe ponerse a punto en cada laboratorio en este caso usamos una aclaración con cielo luna es para actualización con cielos y la rehidratación incluye dos alcoholes al 100% un alcohol al 96% un alcohol al 70 por ciento y agua luego realizamos la coloración con emma talks y línea y os
inah primero se sumergen emma toxina se lo deja durante un periodo de tiempo determinado y se hace una fijación de lema talks y línea con agua de canilla el agua al canilla al tener sales minerales permite que lema toxina se fije a las estructuras celulares que tienen fíjense como las muestras ya comienzan a tener color luego se hace la atención con ellos y na y en este caso el lavado se hace con agua destilada durante un periodo de tiempo muy corto ya que el agua lava la cocina al contrario de lo que pasa con lema
talks y lino comenzamos entonces nuevamente con los pasos de deshidratación para poder hacer el montaje definitivo seguimos con los mismos recipientes y vamos a usar una nueva batería de alcoholes de deshidratación que incluye un alcohol al 70% un alcohol al 96% y dos alcoholes al 100% luego de la deshidratación se hace la aclaración con silo hoy que termina de sacar el etanol de la muestra y finalmente ese es el montaje definitivo con bálsamo de canadá el resultado final son los preparados histológicos que tienen este aspecto el portaobjetos que es el vidrio rectangular grande en este
caso tenemos portaobjetos con una esquina esmerilada donde se puede hacer el rótulo tenemos los órganos en el centro del porta objetos y cubiertos por un cubre objetos más delgado donde se puede ver también los restos de bálsamo en la periferia en la técnica histológica convencional usamos colorantes ácidos y básicos que tienen las distintas estructuras celulares por afinidad de cargas los que utilizamos más frecuentemente son la ema toxina de color azul o violeta y la cocina de color rojo rosa o fucsia cuando se usan ambos colorantes se dice que el preparado está teñido con hache y
qué características físico-químicas presentan lehman toxina es un colorante básico que tiene cargas positivas y leucina es un colorante ácido es decir que tiene cargas negativas qué estructuras celulares va a tener cada una lema toxina al tener carga positiva va a tener afinidad por estructuras celulares que sean ácidas y que por lo tanto tengan cargas negativas estas estructuras celulares las denominadas las denominamos estructuras vasos filas porque tienen afinidad por los colorantes básicos por ejemplo los ácidos nucleicos como su nombre lo indica son ácidos ya que presentan grupos fosfatos con carga neta negativa y por lo tanto
son vasos filos y se tiñen con de azul con emma toxina entonces los núcleos celulares de todas las células entonces se encuentra el adn siempre van a hacer basófilos y se van a teñir de azul de la misma forma una célula que en su otra estructura tenga muy desarrollado el retículo endoplásmico granular y por lo tanto tengan muchos ribosomas con mucho a rn ribosomas va a tener un sitio plasma basófilos también los hidratos de carbono que forman las lipoproteínas y los pro técnica nos suelen tener grupos con carga neta negativa como los fosfatos sulfatos y
por lo tanto suelen ser vasos filos las estructuras celulares así dos filas en cambio son aquellas que tienen cargas netas positivas y que por lo tanto tienen afinidad por colorantes ácidos como leucina y se tiñen de color rosa también podemos llamar las estructuras eosinófilos las proteínas son moléculas tranfo teras que tienen tantos grupos ácidos con carga negativa como básico con carga positiva sin embargo por el ph de la solución con las que se realiza la coloración predomina su carácter básico y se comportan como compuestos acidófilos de esta forma las estructuras celulares ricas en proteínas van
a ser así dos filas por ejemplo el sitio plasma de las células musculares que está lleno de proteínas contráctiles es altamente acidófilos fíjense que los colorantes pueden ser ácidos o básicos y que las características ácidos filipas sutiles se refieren siempre a estructuras celulares esto lo vamos a seguir viendo a lo largo de toda la materia así que es súper importante que les quede claro acá tenemos una foto un preparado histológico obtenido con h iii y observado en un microscopio óptico de campo claro pueden identificar cuáles son las estructuras celulares así dos filas y vasos filas
por ejemplo fijémonos en las estructuras señaladas con el círculo reconocen los núcleos basófilos les marco por ejemplo uno se dan cuenta del citoplasma de estas células es ácido filo se les ocurre una justificación de lo que vemos ya dijimos con los núcleos celulares de todas las células son vasos filos ya que contienen el adn y por lo tanto se tienen con emma toxina y se observan de color violeta por la forma ni pie de la estructura señalada podemos decir que es un conducto escritor de una glándula los conductos excretores además de conducir el producto de
secreción de las glándulas muchas veces tienen como función generar un medio iónico adecuado que mantenga el ph y la fuerza iónica adecuadas para eso las células tienen bombas atp asas en sus membranas que consumen mucha energía celular y por lo tanto en la ultra estructura de estas células vamos a ver que tienen muchas mitocondrias en su sitio plasma las mitocondrias tienen un gran contenido de proteínas en su membrana y por lo tanto el citoplasma de estas células es ácido os pido fíjense que muchas veces las características histológicas que observamos en microscopía óptica se justifica con
características ultra estructurales que se observan con microscopio electrónico siendo el primer tp es lógico que les cuesta reconocer estructuras insulares celulares y sub celulares a medida que vayamos avanzando en la materia todo esto va a ir quedando más claro les invito a volver a ver esta imagen en unas semanas y tratar de reconocer otras estructuras y justificar su coloración las siguientes imágenes les mostramos algunos ejemplos de ácido filia y vaso filia logrados con distintos colorantes arriba a la izquierda tenemos dos fotos de dos preparado sostenidos con h y en términos generales pueden decir que alguno
de estos dos tejidos es más ácido filo que lo otro la foto de la izquierda es una foto de tejido muscular estriado cardíaco podemos ver los núcleos celulares basófilos que son las estructuras redondeadas u ovaladas que se tienen de color violeta con emma toxina y el citoplasma de las células ha sido a filo ya que se tiñe de color rosa que con ellos y no debido a la gran cantidad de proteínas contráctiles arriba a la derecha tenemos un preparado histológico de sangre este tipo de preparados se denomina frotis sanguíneo o simplemente frotis la sangre es
un tejido que tiene la particularidad de tener un medio extracelular líquido y por lo tanto el frote y se hace tirando una gota de sangre sobre el portaobjetos y extendiendo la para formar una lámina delgada de tejido donde tengamos una monocapa de células como en la foto además los frotis se tiñen con una mezcla particular de colorantes llamada negro o aliens a que también tiene colorantes básicos en la gama de los azules y colorantes ácidos que tienen en la gama de los rojos en las células que se ven en este campo podemos reconocer varias células
sin núcleo que son los glóbulos rojos que se tienen así dos filos debido a la gran cantidad de hemoglobina que tiene en su interior y otras células nucleadas que son los glóbulos blancos que se pueden diferenciar entre ellos por la forma del núcleo y por las características de los gránulos en su sitio plasma estos preparados los vamos a estudiar en detalle en el pp 7 pero lo interesante por hoy es que piensa en qué diferencias hay en comparación con la técnica histológica convencional y que pueden reconocer diferencias en la atención de estas células abajo a
la izquierda tenemos la foto de un mastocitos que es una célula que tiene grande los vasos filos en su sitio plasma acá podemos ver un ejemplo de media croma tsja que es el fenómeno por el cual un colorante básico al teñir ciertas estructuras se observa de color rojo la meta croma tsja se refiero a un cambio de color en el colorante y ocurre solamente con ciertos colorantes básicos azules llamados ya chinas como el azul de tolú y dina cuando se une apoyan iones en el tejido en estos casos las moléculas de colorante se encuentran tan
cercanas que se unen entre sí formando compuestos de color rojizo miran del azul al rojo otro ejemplo de tejido que presenta metal chrome asia es el cartílago que tiene muchos glucosamina glück anos con cargas negativas en su medio extracelular abajo a la derecha tienen dos fotos de dos preparados teñidos con hache y más al siam blue el alza en blue es un colorante básico que tiene estructuras vasos filas de un color turquesa muy intenso pero que tiene la particularidad de no colorear ácidos nucleicos ya que por su estructura molecular tridimensional no se acerca lo suficiente
como para que haya interacción molecular entre ellos por lo tanto las estructuras que se van a teñir con 'la sean blue de color turquesa van a hacer aquellas ricas en glicoproteínas y proteoglicanos que tengan grupos ácidos como por ejemplo el medio extracelular del cartílago ya lino en la imagen de la izquierda o la música moco secretada por las células cáliz informes que son glándulas mucosas unicelulares en la foto de la derecha todo lo que vimos hasta ahora son distintos aspectos de la técnica histológica convencional que es la técnica a través de la cual podemos observar
células y tejidos muertos teñidos por afinidad de cargas con colorantes ácidos y básicos y otras técnicas para la observación de tejidos muertos son las técnicas sixto químicas que son técnicas que como su nombre lo indica involucra reacciones químicas y por lo tanto tienen de manera específica y selectiva determinadas macromoléculas y permiten evidenciar determinados componentes titulares vamos a ver tres técnicas sixto químicas diferentes que se usan para tres más pero moléculas distintas las dos primeros métodos que figuran en esta diapositiva utilizan el reactivo de cif que es la leuco fuxin e incolora que al unirse aldehídos
forma un producto estable de color rojo o fucsia la técnica de paz usa el reactivo de shift con ácido periódico y tiene específicamente hidratos de carbono o azúcares con esta técnica podemos teñir macromoléculas formadas por hidratos de carbono de alto peso molecular como el glucógeno presente en células hepáticas que al tener carga neutra no se pone en evidencia con emma toxina y ocina también se tienen macromoléculas ricas en hidratos de carbono como las lipoproteínas y los proteoglicanos como por ejemplo las membranas basales de los epitelios o la música secretada por células carlos y formas las
estructuras que se colorean de esta manera la llamamos paz positivas por otro lado la técnica de fusión es el reactivo de shift con ácido clorhídrico y tiene específicamente adn en la imagen podemos ver núcleos celulares de células en distintos estadios del proceso de división celular la tercera técnica histoquímica que deben conocer es la técnica de sudán que colorea específicamente lípidos si pensamos en la técnica histológica convencional como los lípidos son visibles en parafina luego de la inclusión al hacerla de es para finalización con si lol junto con la parafina se pierden todos los lípidos celulares
y no pueden teñirse porque no están ahí entonces para poder verlos hay que cambiar ciertos puntos de la técnica esto lógica la fijación del tejido se hace por congelación que además de fijar el tejido lo deja rígido apto para ser cortado el corte se hace con un criostato que es el instrumento adecuado para cortar el bloque congelado en vetas delgadas en el orden de los micrómetros la coloración con sudanés se hace en un medio alcohólico con etanol el sudanés hidrofóbico y por lo tanto en esas condiciones se va a distribuir entre los lípidos del preparado
existen distintos sudanés el sudán retiene los lípidos de color rojo también está el sudán black que los tiene de color negro en la foto tenemos un ejemplo de tejido adiposo tenido con sudán red el tejido adiposo es el tejido que forma la grasa corporal y está formado por células denominadas adipocitos que contienen en su citoplasma una gran vacuola donde se acumulan los lípidos además de la gran vacuola roja podemos ver los núcleos celulares basófilos en la periferia de las células como veríamos este mismo preparado procesado por la técnica histológica convencional y teñido con leche y
como dijimos antes los lípidos se pierden en la decoración y zación y por lo tanto las estructuras en las que había lípidos se van a ver literalmente vacías en negativo entonces el tejido adiposo con hache y tiene este aspecto de red en el que vemos grandes huecos donde antes estaban las vacuolas de lípidos algunos núcleos celulares en la periferia de las células y pequeñas fracciones teñidas el medio extracelular y tejido conectivo seguramente muchos de ustedes cuando hablamos de lípidos pensaron en las membranas celulares fosfolípidos algo muy importante para que tengan presente durante toda la cursada
es que nunca nunca nunca vamos a poder ver membranas celulares por microscopía óptica ya que son demasiado delgadas y no alcanza el límite de resolución de los microscopios ópticos para hablar las algunas veces vamos a poder a poder evidenciar los límites entre las células por características de los tejidos pero nunca vamos a ver la membrana celular pasamos ahora a la segunda parte de la clase en la que vamos a ver los contenidos de microscopía el microscopio que más vamos a dar durante la cursada y el que más va a usar durante la carrera y en
sus vidas profesionales es el microscopio óptico compuesto de campo claro o moc desde el punto de vista estructural este microscopio cuenta con tres partes la mecánica la óptica y el sistema de iluminación la parte mecánica está formada por el está tivo compuesto por el pie y la columna que tiene una función de sostén la platina que es la superficie sobre la cual se coloca el preparado histológico y que permite su desplazamiento a través de un sistema de correderas el tubo que sirve como soporte del sistema óptico y los tornillos macro y micro métrico de movimiento
rápido y lento respectivamente que permiten subir y bajar la platina para lograr el enfoque del preparado el sistema óptico está formado por distintas lentes las lentes oculares a través de las cuales vamos a mirar con los nuestros propios ojos los microscopios que tienen una sola lente ocular se denominan moleculares y los que tienen dos lentes oculares como el de las fotos se llaman binoculares las lentes objetivos que son las que están cercanas al preparado histológico cada microscopio tiene varias lentes objetivos de distinto aumento montado sobre el revólver y por último el sistema de iluminación está
formado por la fuente de luz visible el condensador que es una lente que como su nombre lo indica condensa los rayos de luz el diafragma que regula la entrada de rayos de luz periféricos y la intensidad de luz y ocasionalmente pueden usarse filtros sobre la fuente de luz para modificar la longitud de onda de la luz utilizada un aspecto fundamental para poder comparar distintos tipos de microscopios es el cálculo del aumento y de la resolución de cada uno el aumento indica en qué medida un microscopio puede aumentar la imagen de la muestra observada para calcular
el aumento total de cada microscopio debe multiplicarse el aumento de la lente ocular por el aumento de la lente objetivo los aumentos son propiedades de las lentes y vienen indicados con la letra x o por las lentes oculares normalmente tiene un aumento de 10 por lo que significa que aumentan 10 veces el tamaño de la muestra también hay oculares de 20 por las lentes objetivos pueden tener distintos aumentos los mayormente utilizados son 4 x también llamado objetivo de campo 10 por objetivo seco débil 40 por objetivo seco fuerte y 100 porque es un objetivo de
inmersión la resolución del microscopio puede medirse a través del cálculo del límite de resolución que es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que se visualicen separados al calcular el límite de resolución podemos inferir el poder resolutivo del microscopio que es la capacidad de un microscopio de resolver o de dar los detalles cuanto menor es el límite de resolución voy a poder diferenciar dos puntos que se encuentran más cercanos entre sí y por ende mayores el poder resolutivo la fórmula de cálculo de límite de resolución es 061 que es una constante por
lambda que es la longitud de onda de la fuente de luz / la apertura numérica que es una propiedad de cada lente objetivo el cálculo de apertura numérica es el n o índice de refracción del medio por el seno de alfa que es el semi ángulo de apertura analizando estas fórmulas vemos que tenemos algunas variables que van a determinar el límite de resolución del microscopio el ángulo de apertura es el ángulo que forma la luz desde que atraviesa el preparado hasta que es captado por el objetivo el semi ángulo de apertura es la mitad de
ese ángulo los objetivos de mayor aumento siempre se encuentran más cercanos a la muestra y por lo tanto tienes un semi ángulo apertura mayor y como es de esperarse tienen un menor límite de resolución y mayor poder resolutivo algo importante a tener en cuenta es que siempre debemos aumentar y resolver en proporciones similares para poder ver más detalles en nuestro preparado otra variable a tener en cuenta es el índice de refracción cuando el medio que hay entre el preparado y el objetivo es aire el valor de n vale 1 y cuando se utilizan otros medios
ese valor de índice de refracción aumenta siendo 1.5 para el aceite de inmersión por lo tanto al usar aceite de inmersión con el objetivo de 100 x disminuye el límite de resolución y aumenta el poder resolutivo por último se puede modificar la longitud de onda de la fuente de luz la luz visible utilizada en un microscopio óptico tiene una longitud de onda de entre 400 y 700 nanómetros utilizando filtros de color azul o violeta pueden seleccionarse los rayos de longitud de onda de 400 nanómetros y por ende seleccionar y disminuir el límite de resolución y
aumentar el poder resolutivo los haces electrones tiene una longitud de onda que se encuentra en el orden de los pico metros mucho menor que la de la luz visible y por lo tanto es esperable que tenga un límite de resolución mucho menor y un poder resolutivo mucho mayor en el recuadro tenemos una comparación de los límites de resolución de distintos instrumentos el ojo humano tiene un límite de resolución de 0,2 milímetros mil veces menor es el límite de resolución del microscopio óptico de campo claro que es de 0,2 micrómetros los microscopios electrónicos tienen un límite
de resolución que va en el orden de los nanómetros y el microscopio con menor límite de resolución y mayor poder resolutivo es el microscopio de fuerza atómica que está en el orden de los pico metros para ir finalizando con esta clase y retomando conceptos de las primeras diapositivas en las que hablamos de los niveles de complejidad de un organismo vivo en esta materia vamos a estudiar al cuerpo humano a un nivel macroscópico desde el punto de vista de la anatomía humana y a un nivel microscópico a través de distintos instrumentos de microscopía óptica y electrónica
en el estudio anatómico del cuerpo humano vamos a dividirlo en aparatos y sistemas cada unos formados por distintos órganos de cada órgano vamos a hablar de su función su ubicación anatómica es decir en qué parte específica del cuerpo humano se ubica sus relaciones anatómicas es decir que otros órganos o estructuras tienen cercanas su configuración externa que es todo lo que podemos decir de un órgano cuando lo vemos por fuera por ejemplo su forma si tiene lóbulos su configuración interna es decir cómo es por dentro si es un órgano hueco o macizo qué aspecto tiene su
interior su irrigación sanguínea y linfática y su inervación a nivel microscópico con el microscopio óptico de campo claro vamos a estudiar las características histológicas de cada órgano siempre que hablamos de características histológicas nos vamos a referir a las características que pueden observarse a través del microscopio son características histológicas por ejemplo que he tejido forman cada órgano como se distribuye en estos tejidos dentro del órgano se forman en una estructura particular qué características territoriales tienen si presenta ácido filia o vaso filia y cómo podemos justificar esta coloración si presentan una estructura o célula particular que podamos
reconocer a través del microscopio óptico todas estas características histológicas las vamos a poder relacionar con la función de cada tejido u órgano por ejemplo las tres imágenes de arriba son tres fotos de la mucosa de distintas porciones del intestino en orden se corresponden con el duodeno el 61 y lyon y el colon sin saber demasiado podemos ver que tienen ciertas estructuras que las comparten los tres órganos que es lo que les da el aspecto similar y otras estructuras más específicas de cada uno que es lo que permite diferenciarlos estas estructuras son características histológicas abajo tenemos
tres fotos de células falciformes teñidas de distinta manera la presencia de células caliza y formes también es una característica histológica que colorantes creen que se usaron en cada preparado la primera foto corresponde un preparado teñido con hache y la segunda tiene además coloración con paz y la tercera está teñida también con el cian blue bay ha empezando ustedes como justificar la coloración en cada caso con el microscopio electrónico de transmisión vamos a poder observar el interior de las células ya que se analizan cortes mucho más delgados de los tejidos el microscopio electrónico de transmisión nos
permite ver la membrana post política de un color oscuro o negro ya que los lípidos son muy electro densos y por lo tanto podemos ver detalles de la membrana celular como las micro vellosidades podemos verlas organelas en el interior de las células que organelas se encuentran más desarrolladas qué disposición tienen también podemos ver algunos complejos proteicos como los complejos millones intercelular algunas fibras estas características que nos permite ver el mes es lo que llamamos características ultra estructurales las características ultra estructurales también las vamos a poder relacionar con la función de la célula o del tejido
y muchas veces nos van a servir para justificar la coloración o alguna otra característica histológica por último cuando el microscopio electrónico de barrido vamos a poder observar la superficie de las células y tejidos en este tipo de microscopio los electrones no atraviesan el objeto sino que rebotan sobre él logrando una imagen tridimensional de la superficie esto nos va a poder estudiar la forma de las células o las diferenciaciones de la membrana celular como nuevamente las micro vellosidades esto es todo les estamos un muy buen inicio de la cursada y esperamos verles virtualmente en cada comisión
