oi oi pessoal que você sabe eu tô me recuperando da cirurgia né e eu tô com uma aparência muito boa vocês podem ver pelo sorriso Oi e eu vou fazer uma pergunta aqui aí vai entrar vinheta da biologia e quarto se vocês pensam a resposta da essa pergunta Vai nortear a aula de hoje a gente vai começar a responder essa é assim quando você tem uma infecção infecção natural sexsol habitual por exemplo vírus da gripe quem é e a reação do seu organismo é uma reação de formar é uma linhagem clonal de rosto ou mais de uma linhagem clonal direi Fausto bom então a resposta é monoclonal the weather polyclonal eu quero pegou a gripe a resposta do organismo é formar vários Clones ou um colorido só isso vai ligar a nossa aula anterior de genética do borboletas o aula de agora Olá pessoal era isso que eu tinha Que tal uma piscada de cebola para vocês e um abraço [Música] aqui ó e tá escrito antígeno x observa que esse antígeno x nessa região Zinho aqui ele tem tipo uma esfera Onde está o meu mouse o mouse está aqui e tipo uma esfera nessa região Zinho aqui tem tipo Losango e nessa região Zinho aqui tem tipo uma lua e eu tenho aqui um macro anti já vou te chamar agora provisoriamente demaquilante gênio depois eu falar só antiga vai haver uma linhagem uma linhagem dois desculpa vai haver uma linhagem alma a linhagem b e uma linhagem sei uma linhagem b e nem postos B bom então alinhar que essa primeira aqui e ela não reconhece o antígeno como um todo a cantina é muito grande é muito maior do que o sítio de interação antígeno da imunoglobulina e ele vai reconhecer aquilo que dá tem complementariedade aquilo que faz um sistema chave-fechadura e por conta do desenho aqui na ponta do mouse esse desenho Zinho aqui da imunoglobulina que a região hipervariável da imunoglobulina só essa porção do losango e eu tô passando mouse só essa porção do losango é que vai se conectar a essa imunoglobulina O que as outras duas porções as outras duas porções esse linfócito que a linhagem a vida em Foz essa linhagem age linfócito não vai conseguir conectar nas outras porções e ela vai se conectar a essa porção o nome que a gente dá essa porção que se liga em mono globulina é epitopo epitopo bom então quantos epitopos existem nesse antígeno não existe um epíteto que é o Losango 12 epitopos por exemplo essa bolinha aqui três epítopos da meia-lua eu quero saber se tu tem que 3 apito pulso pelo menos a gente consegue ver que a linhagem lá reconhece o epitopo losango faz a reação produzem imunoglobulina o wep o a linhagem B vai se conectar a um epíteto porque o espírito da meia-lua a lua crescente daqui onde está o meu mouse e esse Pitoco meia-lua é reconhecido pela linhagem clonal pela linhagem Coral B o anel da sua linhagem quando o berço a vai reconhecer esse Pitoco só para ir com esse Fi e a linhagem Clonar Você vai reconhecer o terceiro é Pitoco a esfera é o terceiro e Piccolo e vai reagir um de cada linhagem clonal tô de cada monoclonal linhagem clonal uma linhagem monoclonal e vamos extrair muitas células e todas com a mesma afinidade bom então se a célula original e se ligava ao Egipto Por espera vai fazer a expansão clonal a formar várias células idênticas a ela e vai produzir plasmócitos e células de memória são os memória não estão representadas aqui mas vai produzir os dois tipos de células ó e esses plasmação a produzir anticorpos com a afinidade ao epitopo original Original era a esfera é isso aqui a gente chama de linhagem monoclonal a gente tem a linhagem monoclonal a o que se conecta ao epitopo Losango e a gente tem a linhagem monoclonal B e se conecta ao epíteto lua crescente e a gente tem a linhagem monoclonal cê que se conecta ao epitopo a esfera é a minha G1 é a minha pergunta era assim e eu mesmo vou responder porque esses ficou aí todos os times a minha pergunta era uma infecção natural na natureza e a resposta fisiológica do corpo o corpo como um todo Leandro Leandro entrou uma antígeno lembro E qual vai ser a resposta fisiológica do Leandro e vai ser monoclonal eu vou vai ser policlonal várias linhagens monoclonais ao mesmo tempo E isso não depende do corpo do Leandro é isso depende do antígeno a a Xuxa não tiver um e Pitu Pô o que é praticamente impossível E se eu tinha que não tiver um epitopo só e a resposta vai ser maior colar não porque só tem uma equipe é mas em qualquer antígeno ele é muito grande vai ter vários epitocos há dezenas centenas de pipas é isso quer dizer que a resposta do Leandro vai ser de várias linhagens ou mais então vai ser uma resposta policlonal uma resposta natural é uma resposta policlonal e essa é uma resposta natural porque porque o antígeno com tem vários e Picos o Alessandro Mas vai ter um linfócito aqui ó a linhagem de aqui embaixo ele não reconheceu nenhum e pisco não é porque ele é um imposto que se presta a combater outro antígeno que vai ter outros títulos E aí é isso quer dizer então professor que vai ter o linfócito da linhagem áudio e fotos da linhagem dele causa da linhagem c d e f g h i j k vai ter quantos tipos de receptor Zinho assim de imunoglobulina quantos que a gente vai ter Professor foi foi a aula que eu gravei há milhões e a gente tem milhões de combinações gênicas que a gente faz para fazer essa porção da imunoglobulina ó esse pedacinho aqui da imunoglobulina esse pedacinho aqui da imunoglobulina eu tô passando Mouse e são milhões o tipos que gente pode formar que aquela recombinação vdj da aula que eu gravei disponibilizei para vocês milhões de tipos de esse aqui ó é a característica O que é oportuna para essa aula é o linfócito b e ele que faz a ligação de seu receptor da imunoglobulina direto com o antígeno e eu faço B antígeno e sem intermediário é só que a gente vai conhecer um outro linfócitos o linfócito t e hoje a aula é sobre linfócito t a Unifor se tu te e ele não vai reconhecer diretamente a fonte G1 é diferente do linfócito b a uniforte te ele tem um receptor é parecido com imunoglobulina é só que às vezes a gente chamativo urubunny no nome dele vai ser receptor de célula t em Inglês fica team Cell reception o céu receptor receptor de célula t o inglês e o português eles são eles têm essa sequência invertida Oi e esse receptor de celular P ele também tem uma pluralidade muito grande de recombinação ver DJ VJ é a um mecanismo muito parecido de recombinação muito parecido de recomendação como ocorre na imunoglobulina bom então eu faço milhões de tipos de receptores de células t e a porção terminal aqui desse receptor de célula T é a porção de varia O que combina e essa bazinha é a porçãozinha mais constante bom então aqui seria região hipervariável e aqui seria a região constante não temos classes de TCR diferente da imunoglobulina né a imunoglobulina a gente tinha classe e g i g a d e g g m e g d e aqui no TCR não Zé e não tem isso você tem a porçãozinha com afinidade que essa extremidade de cima e essa região Zinho aqui debaixo a região Zinho aqui debaixo que é mais constante é só que esse TCR não se liga diretamente ao ateísmo e para que o tsr possa funcionar a one digital ele tem que estar associado a uma outra molécula chamada MHC II o Perry agora eu fico confuso Bom vamos lá a PCR meu PC e a região ver região hipervariável o feijão ver eles vão ver a extremidade da ponta e a região em constante aqui embaixo é a região se o TCR ele pode ser alfa e beta e se liga a principalmente a peptídeos Ah tá ou pode ser Gama e delta e pode se ligar a lipídios e carboidratos e nós não vamos estudar nosso curso do TCR Gama e delta e ele é estudado em pós-graduação em cursos que se especializa em imunologia não é o nosso caso a gente tá na imunologia básica a gente vai falar do trivial do Sr alfa e beta bom então tem aqui a membrana da célula e logo a parte de baixo do TSE uma porção constante e a parte de cima região hipervariável que vai ter afinidade a alguns antígenos que serão apresentados ao tecer apresentar a a pausa Bom vamos lá o que a gente já sabe né então a imunoglobulina se liga direto antígeno o TCR precisa ser apresentado só que antes de eu falar da apresentação que eu vou falar depois do intervalo e antes de falar da apresentação a gente precisa entender de uma coisa Ah lembrou e como é que eu sei que me faço do B Ellen Fausto b e como é que eu sei que o linfócito t é um nem fácil de ter Oi e aí que vai começar nossa aula começou agora aula começou nesse momento aqui com mais que eu sei que eu nem posso do bebê é um linfócito B como é que eu sei que o linfócito t é um linfócito ter e a gente tem aqui Um ser humaninho né esse ser humaninho a gente sabe que ele tem linfócitos de vários tipos só a células originadas a partir das células linfóides para molhar isso e lá na medula óssea vai se formar se ela mieloide célula nem forte essas células linfóides vai formar célula NK que é um tipo de linfócito t linfócito t nem posso beber é a célula NK não ser a matéria do da nossa disciplina não vou detalhar célula NK E aí a gente já tem aqui o linfócito B que a gente já conhece bastante e o linfócito t tá e quando a gente observa sob microscopia eletrônica de varredura esses linfócitos Oi gente observa aqui um linfócito mais e com filopodios tem mais prolongamento zinhos pseudópode bem fininho philosophy no lilo lilo pode são pseudópodes bem finos e a outra célula é mais lisinha sem esses filopodios bom então uma é equivalente ao linfócito t e a outra é equivalente à linfócito B ali então dá para diferenciar essas células pela forma e não O primeiro é difícil jurar que é desse jeito aqui difícil segundo vocês estão vendo que tipo de microscopia é aqui na ponta do mouse e eu tô passando mal aqui no microscópio já microscópio eletrônico de varredura a ilha muito caro o cara esse microscópio aí não tem como por exemplo a Unemat manter-se microscópio então preciso de um método mais barato e mais rápido para diferenciar o linfócito b do linfócito T porque na microscopia de luz eu não vou conseguir diferenciar olha como que é na microscopia de luz a microscopia de luz é tudo igual Oi ó o microscópio de varredura ele consegue ver algumas diferenças e não está muito caro não dá nem para dar aula nele é só para pesquisa 1 e já ao microscópio de luz ao microscópio que vocês utilizam na sala de aula bom então eu preciso dar um jeito de utilizar microscopia de luz que ela microscopia mais barata para diferenciar esses dois tipos celulares lá eu já expliquei em outros momentos como que a gente produz um anticorpo monoclonal vou até repetir aqui essa animação Eu tenho um linfócito b de interesse uma célula cancerosa mieloma vamos fugir essas duas salas e agora tem um linfócito eterno em impostos que ficou é eterno porque se fundiu com mieloma e a gente chama isso aqui de híbrido ama e esse ele forte da terna e brilhou uma tá que a hibridização mistura de mieloma com nem Fausto b e esse bri doma vai produzir anticorpos quais anticorpos de meu interesse O Alejandro é e pode ser anticorpo o Ant é alguma coisa do linfócito para diferenciar e é isso eu fabrico anticorpo e vou utilizar esse anticorpo para diferenciar os tipos de mim Fausto e vamos ver isso bem facinho e eu tenho aqui nesse frasquinho os linfócitos em geral e eu não consigo enxergar o que tem na membrana deles e a teoria me diz que a gente já sabe a teoria então eu vou pular o que eu vou explicar depois então vamos lá para o final da história o tapete no final eu tenho aqui linfócito T rapper É eu sei que ele é um linfócito t help Queria um linfócito que na membrana tem TCR pelo linfócito T tem que ter TCR receptor do celular ter deixar na membrana de cima imposto tem que ter cd3e na membrana desse linfócito tem que ter CD4 e três conjuntos de proteína o CRC de 3 64 e eu vou ter um outro linfócito t citotóxico citolítico e eu tenho esse linfócito ele tem que ter TCR beleza e linfócito t tem que ter TCR E aí ele vai ter CD3 Oi e ele vai ter cd8 a diferença do rapper Oi para o citolitico é que no help é CD4 a mesma citolitico e cd8 e o as outras duas proteínas a proteína que está numa caixinha azul e numa caixinha verde é igual Oi ó caixinha Azul PCR me fala o que tu perdesse caixinha Verde CD3 vamos no outro caixinha Azul TCR eu tinha Verde CD3 é igual os linfócitos t em geral e em geral qualquer linfócito T vai ter TCR e CD3 e da membrana é só que você não enxerga isso se você não consegue enxergar isso e eu tô te falando assim a gente está no final da história para depois de contar como é que a gente chega aqui e uniformes do b e ele não tem CD4 CD3 ele não tem esse ele tem cd19 é um receptor chamado cd19 bom e é o mais importante ele vai ser na membrana é isso que é mais importante imunoglobulina a linfócito t tem receptor de célula T TCR e linfócito B vai ter imunoglobulina e ige tem a célula natural Killer que eu vou falar bem pouquinho já falei expliquei para vocês ele vai ter o TCR sim só que ele vai ter cd2 ele não vai ter CD3 Se você olhar o linfócito t ele tem tcre cd3e quanto que é natural que ele vai ter TCR e cd2 natural Killer não vou explicar na graduação ficar para quem quiser se especializar que são esses receptores que a gente tá te chamando de CD a gente falou de seu de 3 CD 2 cd8 e CD4 e cd8 cenove ele falou de 5 CDs eles são os clusters de diferenciação são e os proteicos que tem sua função fisiológica mas nos ajudam a diferenciar os tipos celulares então quando eu olho os blocos de diferenciação os clusters de diferenciação eu consigo definir olha essa proteína x a proteína é y consigo dizer essas células x na sala aí o que acontece é eu não enxergo a proteína microscópio de luz não me mostra a proteína que que eu posso fazer então para enxergar essas proteínas E poder dizer olha esse link falso da população tal e se faça população tal eu vou utilizar aquele eu te curto fabricado aquele anticorpo que foi fabricado aqui ou para perdão aqui é aquele corpo que foi fabricado aqui no laboratório É ele que vai ser usado para depois identificar e esses tipos celulares só me entender como que rola isso e eu tenho mais linfócitos ali ó e aqui eu tenho anticorpo anti CD4 é um exemplo eu poderia ter anticorpo anti cd8 poderia ter anticorpo anti cd19 eu poderia ter anticorpo anti cd2 porque cada uma dessas proteínas quando encontradas me identifica o tipo de negócio beleza é o antes e de quatro ele é muito utilizado para contagem de células de pessoas soropositivas então uma pessoa tenha vírus do HIV ela faz contagem de células CD4 positivas O que que é uma célula CD4 positiva é a célula que na membrana tem uma proteína asinha lá chamada CD4 bom então a esse aqui são os anticorpos anti CD4 e já volto no exemplo que eu dei que fica meio no vácuo é tanta informação Zinha Mas vamos lá e eu tenho aqui os nos meus anticorpos comprados antes de quatro tá Eles foram produzidos em camundongo O que significa a minha sala original e o linfócito b a onde eu obtive a sala original era de camundongo o hibridoma ele é mantido em placas de meio de Cultura não é mais no camundongo mas Originalmente quem produziu esse de corpo foi um camundongo é isso quer dizer que a região f. a. b.
da imunoglobulina se liga você de quatro e a região FC é de um camundongo o próximo E aí e aqui eu tenho anticorpos com fluorocromos Excel anticorpos com fluorocromos são anticorpos que vem pendurado nele por uma técnica bioquímica específica Esse é um composto químico que floresce que que é fluorescência é um pausa discutiu se você tem uma lâmpada que você usou bastante na sua vida que foi a lâmpada de florescência essa lâmpada ela ela tinha uma capa ela tinha um vidro e dentro desse vídeo eu tinha uma tinta branca que ficava dentro dela é ela é diferente da lâmpada de LED que tem agora né a lâmpada de LED você bate nela de plástico a lâmpada fluorescente não se batia nela hora de vidro se ela caísse ela que brava dentro da lâmpada fluorescente tem um gás aí tem o vidro e entre o gás eo vidro tem uma tinta fluorescente como que funcionava da lâmpada fluorescente o gás quando energizado ele emitia ondas ultravioletas é um espectro do ultra violeta invisível Então aquela lâmpada ela brilhava ultra-violeta só que você não enxerga a tinta que pintava o vidro abt e filha aquele Ultra Violeta e devolvia aquela energia ultra violeta no espectro de luz visível Então aquela lâmpada era uma lâmpada que fluorescia por quê que absorve o Ultra Violeta e emite luz visível por isso que a gente chamava de lâmpada fluorescente a lâmpada fluorescente era a lâmpada que absorvi a outra violeta dentro do vidro e converti a ele em Luz visível pa que sai doído aquele ultravioletas aí a pouco do vídeo bem pouco já luz visível sair bastante era lâmpada fluorescente que que é então esse composto químico aqui que a gente já de fluorocromos e Esse é um composto químico que quando iluminado por uma luz invisível ultra violeta essa luz ultravioleta invisível bate no flor o Chrome e esse fluorocromo vai converter essa energia ultravioleta em Luz visível isso quer dizer que esse de corpo aqui quando ele é iluminado com luz ultra-violeta ele brilha ele acende Ou seja eu poderia jogar uma luz invisível aonde acendesse tinha esse anticorpo são fluorocromos E aí eu vou pegar aqui o meu anticorpo colocar junto com os linfócitos vamos ver o que que vai acontecer e o anticorpo que foi produzido em camundongo anticorpo produzido em camundongo vai se ligar aonde tem CD4 porque tem um anticorpo anti CD4 aí que que eu vou fazer depois disso e o meu anticorpo aqui no com o fluorocromo ele é antes camundongo anti mausio é isso quer dizer que ele é um anticorpo que vai se ligar aonde tem coisa de camundongo o Uai que que é que tem de camundongo aí I watch corpo que a gente usou e foi fabricado em camundongo lenda bom então com esse esse segundo anticorpo aqui eu anticorpo anti Mouse venho fluorocromo e todo lugar que tiver e o anticorpo o anticorpo que foi produzido em Mouse vai brilhar nesse ponto aqui da experimentação agora é muito fácil e que a gente faz a gente sempre fuga essas células E aí vai ficar um fundinho de célula quem tá no YouTube no fundo da sala e o líquido eu jogo fora ele desse jeito aí ó e sem medo porque essas células grudou aqui no fundo aí eu pego uma PP ti nha enche de soro eu fico puxando as células para ela suspenderem de novo se repita esse procedimento três vezes a centrífuga joga fora que que é que tá saindo nem todo conjunto anticorpo que foi produzido em Mouse e esse aqui é o anticorpo foi produzido em março e junto com anticorpo anti Mouse todo esse conjunto se não estiver ligado na proteína CD4 ele vai cair fora com líquido ele sai e só vai ficar o anticorpo anti CD4 que está ligado na célula Por que a célula não joga fora eu jogo fora os anticorpos que não ligaram isso quer dizer que no final eu vou ver que tem célula que brilha e quando eu jogo Ultra Violeta e célula que não brilha quando joga ultra-violeta para que eu possa ver eu tenho que desligar tudo e iluminar essa célula o luz ultra-violeta luz invisível Aí você apaga a luz e ilumina a sala com blusa ultra-violeta Oi e aí eu tenho um único nem rosto isso aqui essa espera aqui é um único linfócitos esse linfócito ele tá com a membrana florescendo essa membrana florescendo é porque eu tenho anticorpo anti CD4 e grudado nesse anticorpo anti CD4 e eu tenho um anticorpo anti Mouse porque o CD4 aqui o antes e de quatro foi fabricado em camundongo tá E daí eu tenho anticorpo anti mouse com o fluorocromo é desse jeito eu sei que as células que Brilham são células CD4 que que se faz habitualmente se conta bom então você coloca essa lâmina num microscópio e conta quantas salas fluoresceram Oi gente vai lá no computadorzinho e fica na hahaha é e quantas células não floresceram e é isso quer dizer que num determinado volume de sangue eu vou ter tanta células CD4 positivas porque são as células que tem o receptor cd44 que é utilidade de tudo isso pois é eu não falei que o cara que é soro positivo para HIV faz contagem de CD4 é isso é isso porque porque ele precisa saber quantos desse linfócito aqui ele ainda tem porque o vírus do HIV é o vírus que ataca o linfócito CD4 positivo isso quer dizer que a pessoa que é soro positivo e ele vai perdendo esses linfócitos que vai deixando o sistema imunológico dele bem mais fraquinho e eu vou molhar aqui ó é o nome helpers foi dado alguém Fausto ter que exibe CD4 E essas células auxilia outras células a exercer suas funções como a produção de anticorpos pela linfócito B né ou a capacitação para função microbicida por macrófagos para isso quer dizer que a pessoa que não tem o linfócito tcd4 que eu li falso de rapper e vai produzir menos anticorpo Oi e A fagocitose e vai matar menos vai uma pessoa que produz menos anticorpo ele que é fagocitose mata menos e é uma pessoa imuno deficiente agora ligando os pontos e o HIV ele não impede o sistema imune como um todo de forma abrupta mas ele atrapalha e ele faz com que aquela pessoa se torne imuno deficiente e o que que você tem que monitorar a quantidade de sala CD4 positivas a quantidade de linfócitos T help estão lendo a primeira frase só o nome rapper foi dado a classe de linfócito T que exibem o CD4 no começo das pesquisas essas contagens elas eram feitas no microscópio eu senti O computadorzinho e papá você ficava apertando o contador Zinho hoje a gente utiliza uma máquina e tchau tchau e vamos para máquina O que é essa máquina aqui Esse é o citômetro de fluxo e é uma máquina o que vai deixar os linfócitos passar em um de cada vez por dentro de uma agulha Oi e aí ele vai contando quantos que passam são fluorescentes é de quantos que passam não são fluorescentes pessoal chama ele também de fax fluorescente activei são Soccer bom então e por numa separação de células ativas por fluorescência e vamos ver ele funcionar pega o tubinho coloca na agulha a agulha puxa né o líquido e vagarosamente e vai entrando um linfócito por vezes nessa agulha e lá dentro tem uma micro câmera essa micro câmera vai ver qual célula passa florescendo e qual célula passa sem Florescer Quando eu olho o o contador Olha a velocidade com que as células são contadas já passou de 100 mil tá indo para 200 mil tem sete segundos já contou 200 mil células quando era no microscópio Só indo embora aí olhando aqui a telinha do computador e eu observo que quanto mais sua direita maior o tamanho da célula quanto mais para a esquerda menor o tamanho da célula e não vou detalhar demais esses gráficos mas o que é me interessa nesse gráfico O que é eu cada. Desse aqui é uma célula a cada.
